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1、,琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需要事先处理；电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小，而非所带电荷的性质和分子的大小、形状。,【典例1】有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是A.它们都是分离蛋白质的重要方法B.它们的原理相同C.使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要D.以上说法都正确【解题关键】解答本题的关键应明确以下两点：(1)凝胶色谱法的原理；(2)电泳法的原理。,【标准解答】选A。凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的一种有效方法；电泳法是利用待测样品中各种分
2、子带电性质的差异和分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离或鉴定。所以A正确，B错；这两种方法都用到缓冲溶液，以调节溶液的酸碱度，所以C错误。综上所述，答案选A。,【互动探究】(1)相对分子质量不同的蛋白质在凝胶色谱中的运动情况如何？提示：分子很小，可进入凝胶全部的内孔隙；分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙。(2)为消除净电荷对迁移速率的影响，可以在凝胶中加入SDS的原因是什么？提示：SDS所带负电荷的量远远大于蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移速率完全取决于分子的大小。,【变式训练】(2010宿州高二检测)利
3、用凝胶色谱法先洗脱出来的蛋白质是()A.相对分子质量大的B.溶解度高的C.相对分子质量小的D.所带电荷多的【解析】选A。凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快，首先洗脱出来。,2.凝胶色谱操作(1)凝胶色谱柱的装填：用蒸馏水溶胀凝胶均匀装填色谱柱在约50 cm高的操作压下，用300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12 h，使凝胶装填紧密。(2)打开流出口，使缓冲液与凝胶面平齐，关闭出口,(3)样品的加入和洗脱用吸管将1 mL透析
4、后的样品加到色谱柱顶端，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内后，关闭下端出口。小心加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH=7.0)到适当高度后，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。,红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。凝胶的预处理：沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡。色谱柱的装填：装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。,【典例2】(2011扬州高二检测)如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题：,(1)血红蛋白是人
5、和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有_功能。(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是_；乙装置中，C溶液的作用是_。(3)甲装置用于_，目的是_。用乙装置分离蛋白质的方法叫_，是根据_分离蛋白质的有效方法。(4)用乙装置分离血红蛋白时，待_时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。,【解题关键】(1)理解凝胶色谱法的原理；(2)分析磷酸缓冲液的作用；(3)掌握蛋白质的分离与提取方法。【标准解答】(1)血红蛋白能携带氧气，体现了蛋白质具有运输功能。(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是磷酸缓冲液；乙装置中，C溶液的作用是洗脱血红蛋白。(3)甲装置用于透析(粗分离)，目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质。用乙装置分离蛋白质的方法叫凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。(4)待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。,答案：(1)运输(2)磷酸缓冲液 洗脱血红蛋白(3)透析(粗分离)去除样品中相对分子质量较小的杂质 凝胶色谱法 相对分子质量的大小(4)红色的蛋白质接近色谱柱底端,【误区警示】在血红蛋白的提取和分离中，缓冲液能维持溶液酸碱度稳定；透析过程中，可以除去小分子的杂质；在蛋白质纯化过程中，可以将血红蛋白分离出来。,
