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1、第三章药物的杂质检查,药物分析教研室,Test for purity,Contents,第一节 概述,一、药物纯度的概念与要求,1.纯度（Purities）药物的纯净程度,2.杂质(Impurities)药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。,需综合考虑药物的外观性状、理化常数、杂质检查和含量测定,综合评定。,3.药物纯度与试剂纯度,第一节 概述,共同点均规定所含杂质的种类和限量.,不同点,药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑,只有合格品和不合格品.试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对
2、生物体的生理作用及毒副作用.,化学试剂一般分为4个等级基准试剂、优级纯或特种试剂(光谱纯、色谱纯、农药残留检测级)、分析纯和化学纯,化学试剂不能代替药品！,第一节 概述,二、杂质的来源与种类,杂质的来源,生产过程,储藏过程,1.合成过程：原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽2.制剂过程3.生产过程：试剂、溶剂、还原剂残留4.异构体、多晶体5.使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质,在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化,第一节 概述,三、,四、杂质的限量(Limit Test),药物中所
3、含杂质的最大允许量。通常用百分之几或百万分之几(parts per million,ppm),注意平行原则,第一节 概述,第一节 概述,注意单位统一！,第一节 概述,示例一 茶苯拉明中氯化物检查,取本品0.30g 置200 ml量瓶中，加水50ml、氨试液3ml和10%硝酸铵溶液6ml，置水浴上加热5min，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，放置15min，滤过，取续滤液25ml置纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，与标准氯化钠溶液(10g Cl-/ml)1.5 ml制成的对照液比较，求氯化物
4、的限量。,C=10 g/ml,V=1.5 ml,S=?,对照法,示例二 肾上腺素上酮体的检查,第一节 概述,取本品0.2g,置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9-2000)溶解并稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度不得超过0.05，酮体的百分吸收系数为435，求酮体的限量,V=100 ml,C=A/E=0.05/435=1.1510-4 g/100ml,S=0.2 g,比较法,习题一 磷酸可待因中吗啡的检查,第一节 概述,取本品0.10 g，加盐酸溶液(91000)使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15min，加氨试液3ml，所显颜色与吗啡试液取无水吗啡2.0mg，加盐酸溶液(91
5、000)使溶解成100ml 5.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量是多少？,习题二 苯巴比妥钠中重金属的检查,第一节 概述,取本品2.0g，加水32ml，溶解后缓缓加入1mol/L盐酸溶液8ml，充分振摇，静置数分钟，滤过，取滤液20ml，加酚酞指示液1滴与氨试液恰显粉红色，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量成25ml，依法检查，含重金属不得超过10ppm。试计算应取得标准铅溶液(每1ml相当于10g Pb)的体积。,第二节 一般杂质的检查方法,一、氯化物检查法,供试品,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,标准溶液,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml
6、,暗处放置5min(避免AgCl分解),氯化物检查法,测定条件C标NaCl=10g/ml，50ml溶液中含Cl-5080g为宜HNO3避免碳酸银、磷酸银、氧化银沉淀（10ml/50ml）先使溶液体积为40ml，再加入硝酸银暗处放置注意事项供试液浑浊，含硝酸的水洗涤滤纸，再过滤供试液若有颜色，可用内消色或外消色法碘的干扰 氨制硝酸银或升华法不溶于水的药物，水溶解过滤有机氯：转化为无机氯,二、硫酸盐检查法,第二节 一般杂质的检查方法,测定条件：C标K2SO4=100g/ml，50ml含100500g SO42-为宜HCl避免碳酸钡或磷酸钡沉淀，2ml HCl/50ml先使溶液40ml，再加氯化钡注
7、意事项：供试液浑浊，含HCl的水洗净滤纸，过滤供试液有颜色，内消色法,2ml稀HCl/50ml,第二节 一般杂质的检查方法,三、铁盐检查法,1.硫氰酸铁法(Ch.P 和USP采用),红色,4ml稀HCl/50ml，目的？,第二节 一般杂质的检查方法,测定条件：C标Fe=10g/ml，用硫酸铁铵配制时加入硫酸防止铁盐水解。1050g Fe/50ml稀HCl：防止Fe3+水解。4ml/50ml过硫酸铵：氧化Fe2+成Fe3+，防止硫氰酸铁见光分解或还原过量硫氰酸铵：增加配位离子稳定性,注意事项：稀硝酸：氧化Fe2+成Fe3+，剩余加热除去（亚硝酸能与硫氰酸根离子生成红色亚硝酰硫氰化物）色调不一致或
8、颜色浅：正丁醇或异戊醇提取，醇层比色环状结构：有机破坏,2.巯基醋酸法(BP采用),第二节 一般杂质的检查方法,红色,注意：由于反应体系在氨碱性条件下进行，为避免氢氧化铁沉淀，应先加入枸橼酸与铁离子形成配位离子,第二节 一般杂质的检查方法,四、重金属检查法(Pb),1.第一法 硫代乙酰胺法,第二节 一般杂质的检查方法,条件：介质：醋酸盐缓冲液(pH 3.5)2ml 试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2)2ml 杂质对照液：Pb(NO3)2(10g/ml)灵敏度范围：1020 g/27ml,黄色至棕黑色混悬液,注意：供试品有色：加有色溶液或改用第二法 含微量高铁盐：加Vc 供试品为铁盐：除去 供试
9、品能形成不溶性硫化物：加掩蔽剂,2.第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法,第二节 一般杂质的检查方法,第二节 一般杂质的检查方法,3.第三法 硫化钠法,4.第四法 微孔滤膜法,第二节 一般杂质的检查方法,五、砷盐检查法,(一)古蔡氏法(Gutzeit),黄色,棕色,黑色,+As2Hg3,2 As(HgBr)3+AsH3 3AsH(HgBr)2,第二节 一般杂质的检查方法,古蔡氏法检砷器,8cm,有孔玻璃旋塞,导气管,AsH3发生瓶,溴化汞试纸,醋酸铅棉花(60mg),HCl Zn 粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液,生成砷斑,吸收硫化氢气体,注意事项,砷斑不稳定，应干燥、避光、立即比较。有机结合态的砷应破坏
10、后检查（加酸或碱），但温度应低于600C。供试品若为铁盐，能消耗碘化钾和氯化亚锡，可加酸性氯化亚锡，使高 铁离子还原后检查。供试品（硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐）若在酸性条件下生成硫化氢或二氧化硫，与溴化汞试纸作用生成黑色硫化汞和金属汞，可先用硝酸处理，使其氧化为硫酸盐。锑盐含量较多时，可改用白田道夫（Bettendorff）法检查砷,(二)二乙基二硫代氨基甲酸银法 Ag(DDC)法,第二节 一般杂质的检查方法,红色胶态银,目视比色法,510nm 测定A值,线性范围：110 g/40ml含锑药物不干扰测定用于砷盐的限量检查和微量砷盐的含量测定,(三)次磷酸法,第二节 一般杂质的检查方法,1)用
11、于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物的砷盐检查，不产生干扰。2）灵敏度较古蔡法低。,注意四种砷盐检查法生产的产物,古蔡法生成的是黄色至棕色的砷斑Ag（DDC）法生成的是红色胶态银白田道夫法生成的是棕褐色的胶态砷次磷酸法生成的是棕色的游离砷,六、溶液颜色检查法有色杂质Ch.P采取三种检查方法：目视比色法：药物溶液的颜色标准比色液的颜色 标准比色液：比色用重铬酸钾、硫酸铜、氯化钴+水分光光度法 某波长处的吸收度色差计法药物溶液的三刺激值（在给定的三色系统中与待测色达到色匹配所需要的三个原刺激量）直接比较、与水之间的色差值,第二节 一般杂质的检查方法,第二节 一般杂质的检查方法,七、易炭化物检查法含义：药
12、物中易被硫酸（含硫酸94.5%-95.5%，g/g）炭化或氧化而呈色的有机杂质检查方法：目视比较法 供试品炭化后，与对照液（视品种而定）目视比较 对照液：溶液颜色检查项下的不同色调的标准比色液 比色用氯化钴、重铬酸钾、硫酸铜配成 高锰酸钾液,八、溶液澄清度检查法含义：检查药品溶液的浑浊程度。意义：反映药物中微量不溶性杂质的存在情况，反映药 品的质量和生产工艺水平。方法：Ch.P 比浊法药典中澄清的定义为：供试品溶液的澄清度相同于所用的溶剂，或不超过0.5号浊度标准液。浊度标准液：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合，生产不溶于水的甲醛腙白色浑 浊，以不同量的水稀释可得不同浊度的标准
13、液。注意事项：光线及温度、不同药品溶剂会不同。,第二节 一般杂质的检查方法,九、炽灼残渣检查法炽灼残渣（residue on ignition）：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。方法：1.02.0 g供试品 炽灼至恒重的坩锅 精密称定 缓缓炽灼至完全炭化 防冷至室温 加硫酸0.51ml 低温除去硫酸 700800炽灼完全灰化 移置干燥器 放冷至室温后精密称定 700800炽灼至恒重炽灼温度：Ch.P 700800 USP 80025 BP 800 JP 450550,第二节 一般杂质的检查方法,12 mg,0.1%0.2%,炽灼残渣检查法注
14、意点1、操作及称重方法：1）坩埚要事先恒重，精密称定，所得的残渣要恒重；2）坩埚应斜置，防止暴沸和溅出；3）有机药物在坩埚中加热开始时应缓缓加热，加入硫酸后也应缓缓加热，防止药物暴沸、溅出和硫酸腐蚀;4）坩埚炽灼后要放于干燥器中冷却后称重。2、如供试品为重金属，炽灼温度应为500-600C，防止重金属逸失。3、药物的炽灼残渣限量一般为0.1%-0.2%（1g供试品不超过1-2mg）。含氟药物用铂坩埚,第二节 一般杂质的检查方法,十、干燥失重测定法,第二节 一般杂质的检查方法,干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量。用于检查药物中的水分及其他挥发性物质。恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后
15、称重的差异在0.3mg以下。（干燥至恒重的第二次及以后每次称重都应在规定的条件下继续干燥1h后进行）,（一）常压恒温干燥法注意事项样品厚度含较多结晶水：提高温度熔点低：逐渐升温易吸湿或受热发生相变而达不到恒重：T、h一定减失的重量供试品膏状：事先放入粗沙粒或玻棒（二）减压干燥法与恒温减压干燥法常用干燥剂的吸收能力：五氧化二磷 硅胶 无水氯化钙硫酸（三）干燥剂干燥,第二节 一般杂质的检查方法,第二节 一般杂质的检查方法,(四)热分析法（Thermal analysis）测定物质的物理化学性质与温度关系的仪器分析方法。,热重分析法(Thermogravimetric Analysis,TGA),差
16、热分析法(Differential Thermal Analysis,DTA),差示扫描量热法(Differential Scanning Calorimetry,DSC),第二节 一般杂质的检查方法,1.热重分析法(TGA),应用热天平在程序控温的条件下测量物质的质量随温度变化的热分析技术,可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率.,特 点,分析样品用量少,适用于贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失重测定.灵敏度高,可达1 g以下测定速度快可用于判断结晶水或吸附水,并推断结晶水含量.,第二节 一般杂质的检查方法,2.差热分析法(DTA),在程序控制温度下，测量供试品和惰性参比物(常用石英
17、砂、煅制MgO)之间的温度差与温度(或时间)关系的热分析技术,DTA用途(1)熔点测定,(2)定性和纯度检定根据峰的数目、形状、位置对供试品进行纯度判别,草酸钙(CaC2O4H2O)的热重曲线,盐酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲线,3.差示扫描量热法(DSC),第二节 一般杂质的检查方法,测量保持供试品和惰性参比物的温度相同,系统所需输给供试品或参比物的能量差随温度(或时间)变化的热分析技术.,用于待测物质的鉴别、晶型鉴别、纯度检查以及熔点和水分等的测定，更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化。,不同纯度苯甲酸的DSC曲线,低共熔杂质,应用热分析法检查药物纯度的条件样品纯度在98.0%以
18、上杂质不与主成分反应杂质不与主成分形成共晶或固熔体杂质与熔融试样有化学相似性药物在熔融过程中化学性质稳定药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型,甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线,失溶剂,失水,分解,十一、水分测定法（卡尔费休法）,第二节 一般杂质的检查方法,A供试品消耗的Fisher试液的体积B空白消耗的Fisher试液的体积F每1ml Fisher试剂相当于水的重量(mg)W供试品的重量,指示终点方法：Fisher试液颜色 淡黄色红棕色永停法,十二、残留溶剂测定法,第二节 一般杂质的检查方法,残留溶剂：在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。,
19、第二节 一般杂质的检查方法,色谱系统与系统适用性试验(System Suitability Tests;SSTs)用待测物的色谱峰计算的N应大于1000（或5000）；内标物与待测物的两个色谱峰的R1.5；每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD10%,进行有机溶剂限度测定时，根据残留溶剂的限度规定来确定对照品溶液的浓度；进行定量测定时，应根据供试品中实际残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度。对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。,第二节 一般杂质的检查方法,第三节 特殊杂质的检查方法
20、,一、色谱分析法(一)TLC法,比移值,一般要求：颗粒直径1040m薄层涂布：无粘合剂 含粘合剂：常加入1015%煅石膏(CaSO42H2O,180烘4h)或0.50.7%羧甲基纤维素钠水溶液,第三节 特殊杂质的检查方法,杂质对照法 适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况 供试品溶液自身稀释法 适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况(仅限于二者的颜色相近或相同的情况)杂质对照法与供试品溶液自身稀释法对照使用 对照药物法 无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异，难以判断限量。,第三节 特殊杂质的检查方法,(二)HPLC法,主要方法,内标法加校正因子法：用于有
21、杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定。外标法：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。加校正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定不加校正因子的主成分自身对照法：用于没有杂质对照品的情况峰面积归一化法：粗略测量供试品中杂质的含量,第三节 特殊杂质的检查方法,220 260 300 nm,肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线,max310nm,二、光谱分析法,第三节 特殊杂质的检查方法,杂质与一定试剂产生沉淀杂质与一定试剂产生颜色反应杂质与一定试剂反应产生气体,第三节 特殊杂质的检查方法,三、化学分析法,呋塞米中芳香第一胺的检查,呋塞米,2-氨基-4-氯-5-氨磺酸
22、基苯甲酸,重氮化-耦合反应显色,氯硝柳胺中5-氯水杨酸的检查,氯硝柳胺,5-氯水杨酸,三氯化铁显色,第三节 特殊杂质的检查方法,四、物理分析法,嗅味及挥发性的差异：乙醇中杂醇油 颜色的差异：盐酸胺碘酮中游离碘 溶解行为的差异：高三尖衫酯碱 旋光性质的差异：黄体酮 吸附或分配性质的差异 对光选择吸收性质的差异,Thank You!,a.KI的作用还原剂：As5+As3+,反应速度慢,反应速度快,b.酸性SnCl2的作用,还原剂,As5+As3+,将KI氧化生成的I2I-,稳定的络离子,进而促进AsH3不断生成,与Zn粒表面形成Zn-Sn齐,SnCl2,起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生,白田道
23、夫法含锑药物,棕褐色胶态砷,加入少量HgCl2,灵敏度可提高至2 g As2O3（1.5 gAs）/10ml,旋光性质的差异,Ch.P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为：186198,供试品10l N-甲基哌嗪10l 50mg/ml 50g/ml,枸橼酸乙胺嗪,I2蒸气显色,规定：如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照品主斑点相比较，不得更深,地塞米松磷酸钠 地塞米松 20mg/ml 0.20mg/ml,如有12个杂质点超过时，应不得深于0.01%对照液的主斑点。其中有1个杂质点应不深于0.002%供试品的主斑点。,氨苯砜中检查“有关物质”规定,0.01%供试品,100g/ml,1%供试品,10mg/ml,0.002%供试品,20g/ml,
