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1、ICS65.150CCSB51中华人民共和国家标准GB/T205522023代替GB/T2055220062023-12-28发布Pacificoyster2024-07-01实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草.本文件代替GB/T2O552-2OO6太平洋牡蝴,与GB/T205522006相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下,a）更改了分类地位（见4.2,2006年版的3.2）lb）更改了可量性状比值（见5.2,2006年版的4.1.2.1）,c）删除了壳高与壳长、克长与体重的关
2、系式（见2006年版的4.1.2.3）；d）删除了生化遗传学特征及检测方法（见2006年版的第7章、8.2九e）增加了分子遗传学特性描述及检测方法（见第8章、9.5%D增加了判定规则（见第10章）.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由中华人民共和国农业农村部提出.本文件由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。本文件起草单位：中国海洋大学.本文件主要起草人:李琪、于瑞海、李海昆、徐成勋、刘士凯、孔令锋、于红.本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：2006年首次发布为GB20552-2006,2017年转为推荐性国家标准GB/T2O5
3、52-2OO6本次为第一次修订.1范围本文件界定了长牡期Crass。“。gigas（ThUnbergj793）的术语和定义，瑜立了学名与分类，规定了主要形态结构特征、生长与繁殖特性、细胞遗传学特性与分子遗传学特性，描述了相应的检测方法，给出了判定规则.本文件适用于长牡蛎的种质鉴定和检测.2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件.GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分:抽样方法GB/T22213水产养殖术语GB/T32757贝类染色
4、体组熨分析3术语和定义GB/T22213界定的以及下列术语和定义适用于本文件.3.1壳高shellheight壳顶至亮腹缘的最大距离.3.2亮长SheUlength垂直于壳高、与两壳统合线平行方向的前后缘间最宽部分的长度.4学名与分类4.1 学名长牡期CmSsoreagigas（ThUnberg,1793）.4.2 分类地位软体动物门（MOlIUS8）,双壳纲（BiValvia）,牡蛎目（OStreida）,牡蛎科（C）Streidae）,巨蛎属（OaUsostrea）.5主要形态结构特征5.1外部形态贝壳长形,壳较薄。左壳固着，深陷，绕片粗大;右壳较平，鳞片环生，呈波纹状,排列稀疏,放射肋不
5、明显,壳顶腔深并常具有白整色的沉积物.壳表白型色到紫褐色.长牡蛎外形见图1,标引序号说明:1titi长牡蜥mmmm长的比值为左光6生长与繁殖特性1龄长牡蛎壳高为53mm114mm,壳长为26mm68mm.质量为8g53g2龄长牡蛎壳高为78mm162mm壳长为46mm92mm.质量为53g214g.6.2繁殖6.2.1 性成熟年龄1龄。6.2.2 性别雌雄异体.个别雌雄同体有性逆转现象。6.2.3 生殖方式卵生型,体外受精.6.2.4 繁殖季节5月7月.6.2.5 怀卵数百万粒至数千万粒.6.2.6 卵的特征沉性卵.梨形、椭细胞遗传学特,染色体二倍体染色 染色体臂式为0,其中中部着丝.NF指8
6、分子遗传学特性线粒体COI底因做基参有序列如下（621 bptATAGITViTTG GATTTTGAGCIATTCGTT(；G AGACTTTArATGTTcTTGCG (X；.?U7D(X；TACCCTGGGC TAAGTTrrIATTAGGTCTCT 50GC(CGTG 100CTTATAA(XAGTTGlAACTGGCTGCGTTGGTTATGATTTTTTTCTTT 150GTTAlACCTG Gcttctagta ggttttcjcc ,CGGAGTTGTYIAATGG GCAGACyYICiC AGGGTCTCTT GGGCGGGTGCXXXjTTTGGTCTGGCTTatttc
7、ctcg*iatcttxtgcCATTTCTDATGC GTCTAA CCTVCTTlTVTTCCCTTTGAT 200ITEAGATTTT 250CyVrTGTAGAA 300CACCTC 3507.2核型TTATCArGGA G17VAGCTC Atgcgatctg Ggtiacttca Tiactaiact GTCGGAGGGGGTTTGTMAG TATTTTCAGG Ttgggggcca ttcttgcttt TTTGACTGAr GGGACCCTGTACCTTGCA TCAATTAArT TACIAGCA TGAC7ACTCT TCATTA CTciaagcctt Tcaiagiaa
8、c CIArTCCeTT Cccagtgtta AiacctctttCACCTTGCTG 400 GAT7GAAA 450 GArCTArIAA 500 GCTGGAGGTC 550 TTTTGACCCT 600 621种内K2P遗传距离小于2%.9检测方法9.1 抽样按照GB/T18654.2的规定执行.9.2 主要形态给构特征9.2.1 外部形态在充足光线下肉眼观察.9.2.2 可量性状壳高和壳长按照定义用游标卡尺测区.9.2.3 内部结构撬开外壳后,在充足光线下肉眼观察.9.3 生长与繁殖特性9.3.1 生长用游标卡尺测垃壳高和壳长,用电子秤称量质垃.9.3.2 性成熟年龄查询养殖记录.
9、9.3.3 性别通过显微镜观察生殖细胞分辨性别.9.3.4 生殖方式通过显微镜观察排放的生殖细胞判断生殖方式.9.3.5 繁殖季节肉眼观察性腺的发育程度并结合显微镜观察生殖细胞判断繁殖季节.9.3.6 怀羽量解剖雌贝，将整个卵巢取出，揉碎溶于海水中，经稀理后取一定体积在显微镜下统计卵的数就,计算卵的浓度,进而计算怀卵量,浏3次取平均值.9.3.7 卵的性质在显微镜下观察卵的形态.9.4 细胞遗传学特性采用成体龈组织法,将长牡蝴在0.005%的秋水仙索海水中处理10h取婚组织用含0.05%秋水仙素的海水处理45min,其余操作按照GB/T32757的规定执行,其中，低渗时间为30min-45mi
10、n,解离时间为50min,热滴片法滴片9.5 分子遗传学特性按附录A执行.10判定规则10.1 当检测结果符合第5章和第7章的要求，可判定该种质时,按第5章和第7章的要求判定.10.2 当出现下列情况之一时,增加检浏第6章和第8章要求的内容,依据检测结果进行辅助鉴定：a）第5章和第7堂的项目无法进行检测或者判定时1b）第三方提出要求时.附录A(规范性)长牡蛎81基因序列分析AJ总DNA提取取闭壳肌】00mg,按照标准的酚三凯甲烷抽提法或者使用试剂盒进行DNA提取.A.2引物序列COI-Ft5,-GGTCAACAAATCATAAGATATTGG-3l,COl-Rt5,-TAACTTCAGGGTG
11、AC-CAAAAAATCAT.A.3PCR扩增反应体系为25L,包括0.5L的TaqDNA聚合急(2.5U/9)，正反引物各0.5L(10molL),0.5L的dNTP(10mmolL).2.5L的IoXPCR缓冲液200mmol/LTns-HCLpH8.4200mmol/LKChlOOmmol/L(NH4)2SO4115mmol/LMgaj,加灭菌的蒸慎水至25L,基因组DNA约为20ng.PCR参数包括94C预变性5min,94*C变性30s,51C退火30s,72C延伸1min,循环35次,然后72匕延伸7minPCR产物经琼脂糖凝胶电泳检浏后进行双向浏序.A.4遗传距离计算利用Kimura两参数模型(KimUra2-parameter,K2P)计算检测样品的序列与参考序列的遗传距离.
