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1、乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液蛋白质组学的初步分析大连医科高校硕士学位论文乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液蛋白质组学的初步分析姓名：王媛申请学位级别：硕士专业：内科学指导老师：赵久阳201006硕士生姓名：王媛振方法：留取健康人。陨鲂蛭簸装槁。砸倚透窝O质，再用OC预冷丙胴进行蛋白沉淀，置于C冰箱过夜后，经乙型肝炎病毒相关性肾炎尿蛋白。Xe。X。eeo培。或由。.。.。gX。.。、一。打./。甑。MY。oee赵久阳审校ee、目前畏白质组学探讨前沿主要分为以下几个方向：表达蛋白的变更，以及不同时期蛋白表达谱的变更等；功能蛋白质组学。、蛋白质组学探讨的基本技术路途主要必：从生物样品中提取。心。殍为基础的蛋白
2、质鉴定技术，由于灵敏度高，速度快，易实现F1.动化，已经成为蛋白质组学探讨鉴定尿液是血液经肾小球滤过，肾小管和集合管重汲取、排泻及分泌产生的终末代谢产物，其组成与性状可反映整个泌尿系统的状况，尤其是尿液中的蛋白质，其种类和数量的变更能够反应出泌尿系统疾病的相关信息。正常尿液中可含有少量的蛋白成分，如白蛋白、糖蛋白和微球蛋白等。疾病状态下，尿中完全有可能出现一些特殊蛋臼成分成为特异性的生物标记物。糜谡银仙妒嗦腮蚣嗖饬膊慕尿液标本的采集无创伤性，便于重更取样及保存，随着蛋白质分别与鉴定技术的不断进步及蛋白质数据库的不断扩充，尿液蛋白质组学也随之快速发展。通常尿液中的蛋白浓度低且不稳定，简单膈解变性
3、，且含有盐类物质和其他杂质，并不适合干脆用来做双向瞥股电泳。所以须要首先对尿液中的蛋白成分进行提取和纯化，制备出纯净的、稳定高丰度表达的蛋白质样本。制备的基本步骤包括：收集尿液，离心沉淀，低温冰冻，反复冻融，透析除杂，低压冻干等。目前常用的方法有染料沉淀法、丙甜用蔗糖聚酯柱过滤法制备出了高通量表达的尿蛋白质样本，而且与传统蛋白质分别技术目前蛋白质分别技术可分为有胶系统和无股系统两类。有胶系统是.为基。晦。、微毛细管色谱等。具有高敏感性、高辨别率、易与质谱分析鉴定相匹配等优点，特殊是固相化梯度。，海。等其它蛋白质分别技量分析器和检测器，其基本原理是运用软电离技术使经酶切处理后的蛋蛋白质的特异性更
4、强而渐渐取代单级质谱仪成为主要的鉴定手段。、生物信息处理生物信息学是蛋白质组学探讨不行缺少的技术支持平台，主要指综正常人尿液蛋臼质谱的建立合分析了。个健康志愿者的尿液蛋白组成，发觉。的标本中均检测病理生理学机制供应了更广袤的空间。、泌尿系统肿瘤它对膀胱鳞癌的协助诊断作用。等用。雕。.。分析一组膀胱癌患者尿液中的蛋白质，发觉肿瘤患者的尿液中有多种蛋白质的变更，其中包括。忠斐5男碌鞍缀种异样的蛋白组合，分子量从。等【。紫榷蕴悄去霍臀（津宜颊叩哪站航。辛。.分析，结的削减可能是肾性高血压的发病缘由之一；而生长激素。仅在。例。乔悄圣颊叩哪站海a】D钟兴闹值鞍字。锌。糖蛋白，。酸。、急性移植排斥反应在肾
5、移植中最麻烦的一个问题就是急性移植排斥反应。析结合。和算法进行信息学分析计算，得到与排异反尿液进行了分组探讨，包括例临床发生。和例移植后病情稳定的患。耕幕颊咧杏衡现为典型的排斥反应型图谱，对这些蛋白进一步鉴定可能找到早期的标各项探讨结果并不完全相同。、范科尼综合征质以及低丰度蛋臼、高疏水性蛋白的分析有肯定的局限性：蛋白质数据库及生物信息学。还需进一步完善等等。参考文献。.。.。，：三。，瑞。哨。懿。，。兴。殍。，。，。瑁，.0途，。，.。戳。2。：2。血。雕。.登。，。：8。：。卜，。，。e*。琦.。琦。.。璜。.。璜。：。，。.。.。琰。/0。，e*。，令。O，8。,。，。8硕士生姓名：媛指
6、导老师：赵久阳.教授副探讨员刘春艳副教授教授杰副、三世纪末，生命科学的探讨起先进入了以蛋白质组学：诵牡善蠡蜃械贝是以蛋白质组为探讨对象，利用肯定的技术手段在整体水平上揭示蛋白究等。蛋白质的分别和鉴定是蛋白质组学的两大关键步骤。双向凝胶电技术是经典的蛋白质分别方法，它虽然已经特别成熟，但也有肯定的局限性，如疏水性蛋白不适合尿液中的蛋白质，其种类和数量的变更能够反应出泌尿系统疾病的相关区，慢性乙型肝炎患病率高，一般人群中男。矢叽府多的依据。材料和方法一、主要仪器设备及试剂质谱仪：5缗缥磋胱于岩。势浮。e。e。辔。合崂紫低e。美国。紫外分光度仪：兴倒e。安玛低温离心机：。蒸水由。期中段晨尿。全部标本
7、采集时均获得患者的知情同意，符合伦理学原则。篌。例原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者。f岗.座谈会拟定的诊断标准，即诊中第点为最基本条件，缺此不能诊断。置于.C冰箱保存备用。预冷丙酮根据标本体积与丙酮体积比为。的比例快速加入进行蛋白沉取含尿蛋白的沉淀物，真空干燥浓缩。虻鞍着烘舛d号力能稍铜牡鞍壮恋皆镉服。充分溶解后应白稀释成不同的浓度，加入考马斯亮蓝。蛋白定量试剂马斯亮蓝。，溶于。.配制。/的花骸=。帽。蛋白质的混合固体，加入娣从娃丈魔鸠捶从。种樱。偌尤。下避光。科考。瘪。腿。焙蛆。偌尤8根泗OC下避光水浴反应小时，根据甲酸与样品体积比为。加入甲酸酸化。序：。%。：流速：。/悍治鎏奔湮#。分钟
8、；扫描范围：病慌缥淼缪梗O。杭尤让腹茂露C。每份样品重夏做。质量容忍差异。爵。灰崔滩银觥：获得混合肽片段质量数据在：/版e.数据库中进行检索，查询所表达的蛋白质名称、靶基因等相关信息。例正常人、。旧陨鲂蛭岐装槁。砸倚透窝谆颊吮。例乙年龄。性别男针配男尿蛋白定性血肌酊。肥/抵血谷丙转负酹/血谷草转氨酶。/血乙型肝炎病毒余阴性年龄。尿蛋白定性。血自蛋白。/。加胆固醇。传。.性肾病家板.耻。髀稣娜,。.嘉一aMEJOO佟0佟0。6。0儆。用。软件检索份尿液的肽序列，获得混合肽片段质量数据在其中菌OH说哪期罕瓯局泄布种蛋白质，通过手工验。瑁。、。蛋白*.。喽蕴堑胺ex。堂鞍。电令令令令-89.乔诺鞍、
9、胰腺。（歪世福。.、非分泌性肝勖锌轴蛋白eee。蕤。泛素结合酶篇.目、*、激肽释放前.、。涸瓒一。4.陨鞍。、。一-.。M。*。繇。琪。一。令e。、仅.。峻蕴望鞍。*。仁崽堑鞍。-。一。、磷脂酰肌醉。傅鹘诺望，机.。*。婴。,。，。及细胞学定位，具体的蛋白质名称、细胞定位、分子量及等电点详见表表。:H000*城一。苑倚透发撞鞠喙随陨皱谆颊叩哪站罕瓯竟他。门。种蛋fi。错筐。86转铁蛋白锌一糖蛋白。蛋白ee,能及细胞学定位，具体的蛋白质名称、细胞定位、分子量及等电点详见。樨。抗胰凝乳蛋白醉。一。酚链三。硝区根结合蛋白。健目前尿液蛋白质组学探讨的技术方法许多，技术瓶颈主要集中在蛋肾炎患者、原发性肾
10、小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者及正常人的尿液蛋白定出。值胺字剩陨鲂蛭岐装槁。碓倚透窝谆烦叩。份尿液共鉴定出。种蛋白质，健康人的菽站罕瓯竟布口。种蛋白质。蛋白质各自的生物功能如下：的发中、发展及预后.复独创显相关。可作为肿痛标记物。硝能相关，可激活补体，介导穿过胎盘和黏膜屏障，结合细胞表面的。受筐。等炎症细胞的趋化活性，通过部分去糖化而转变为巨嗜细胞活化因子及运输脂肪酸和内毒素，还可能参加病毒感染。乙型肝炎病毒。腥局饕奂案卧瞰玲。感染后主要通过机体说等。液中含量极微，而在急性炎症反应时，。即可增加倍,故有可能参有待于进一步探讨。蛋H属于丝氨酸超家族，是存在于人血清中的一个糖蛋白。它胞活化因子。破。鹿
11、，随之刺激组织的巨嗜细胞活化，并可介质，其中。治N粗5鞍祝淑种蛋白质均与免疫应答以及氧化应激反应有关，因此有可能成为乙型肝炎病毒相关性肾炎的生物学标记物，但是检测出来的蛋白质还须要进行进一步验证，它们与乙型肝炎病毒相关性肾炎发生发展的关系以及在病理生理学机制方面的作用还有待研究。臼笛根捎禽瓶./方法鉴定了乙型肝炎病毒相关性肾白质，大部分与免疫反应及氧化应激有关。有可能成为乙型肝炎病毒相关性肾炎的生物标记物。参考文献。O融。.*虬。稀融。舞。“。璘。随琰。域。.韩咏梅，杨令国，刘新枝.乙肝病毒相关性，肾炎例治疗分析，临床军医杂。.。，.。.。瓶，。瑾。他，。*簪。，。琪。：。.e。电。俄促，。，。*。*eeeeee。，.。/.。，。,。，：。.，。*。培。琦。：。，环。诱。，。：。筋。电.。的；：。玷瑁，。瑙。唁。e*谨此论文完成之际.，向我的导师赵久阳教授致以我最真诚的敬意和感谢刘春艳老师、孙品娣老师、生杰老师及其他科内各位老师在工
