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1、植物组培实验室设置条件及器具,一、实验室组成二、基本设备三、培养器皿及实验用具四、无菌条件及创设五、无菌操作 六、组培的环境条件和营 养条件,组织培养实验室布局的总体要求 便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察,一、实验室组成,基本实验室,辅助实验室,实验室组成,准备室缓冲室无菌操作室培养室,细胞生物学实验室温 室生化分析实验室,基本实验室布局平面图,实验台,搁架,培养架,培养架,培养架,培养架,药品及仪器柜,无菌台,无菌台,搁架,拉窗,冰箱,搁 架,水槽,电炉,门,4.5m,3.0m,3.5m,4.0m,准备室,缓冲室,无菌室,培养室,组织培养准备实验室,缓冲室,培养室,无菌室（一）,无菌室
2、（二）,二、仪器与设备,1、基本设备 冰箱、电炉、酸度计、纯水器、天平、培养基分装器、搅拌器等。,冰箱,酸度计,电炉,天平,纯水器,培养基分装器,搅拌器,2、灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。,蒸汽压力灭菌锅,干热消毒柜,无菌瓶顶过滤装置,喷雾消毒器,（参考图）,（参考图）,3、无菌操作设备,超净工作台,无菌接种箱,4、细胞培养设备,摇 床,培养架,HZC-250恒温振荡培养箱,150C250D光照培养箱,5、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜,倒置显微镜,光学显微镜,1、玻璃器皿,三、培养器皿及实验用具,培养皿,三角瓶,培养瓶,2、金
3、属材质用具,镊子,解剖刀,接种针,无菌条件,物理方法：物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌,1、灭菌方法,2、灭菌,（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.810410.8104Pa 温度在121 灭菌2030min（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌,（3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌 浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用,（5）接种室灭菌,空气消毒灭菌,接种室,超净工作台,紫外灯照射,70%75%的酒精擦洗,培养材料的接种,紫外灯照射,（6）外植体灭菌,流水冲洗1020m
4、in或更长时间,70%75%酒精中浸泡30s,0.1%0.2%氯化汞液中浸泡10min左右,蒸馏水冲洗45次,在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右,备用,六、无菌操作,实验员消毒,实验室、无菌台灭菌,实验器材的灭菌,无菌接种,消 毒,实验台卫生,培养室培养,1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。3、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。4、用70%75%的酒精擦拭工作台和双手。,5、用沾有70%75%酒精的纱布擦拭盛培养基的培养器皿，放进工作台。6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的酒精中
5、，再在火焰上消毒，放在器械架上。7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。,9、取下接种器械，在火焰上消毒。10、把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。11、接种结束后，清理和关闭超净工作台。,注意：操作期间应经常用70%75%的酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上消毒。,温度光照湿度气体培养基的渗透压pH值,植物材料一般最适温度在252之间,环境条件,最常用的光周期是光照16h，黑暗8h,一般情况下，培养器内相对湿度应达100%，培养室内环境的相对湿度在70%80%,氧气是愈伤组织生长所必需的,调节渗透压常常从糖入
6、手,植物组织培养时培养基的pH值大多在5.06.5,第二节 植物组织培养所需的环境 条件,1.大量营养元素：2.微量营养元素：,3、碳源,4、维生素类,5、肌醇,6、氨基酸,7、天然复合物,如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物,8、琼脂,9、活性炭,10、抗生素,11、生长素类,12、细胞分裂素类,13、赤霉素类和脱落酸,植物组织培养的营养条件,因地制宜，创设实验,上述是正规的组培条件，很多学校并不具备这样的条件。但因为组培实验在课标中是应用要求，最好创设条件做一下。比如做一个组培的实验最低要求就是要有一个灭菌锅和一个超净台，这个就能满足洁净的要求。如果没有灭菌锅可用高压锅代替，进行细菌的灭菌；如果没有超净台，可选择比较容易做的材料，就用胡萝卜，在外面的开放的环境下，点上两个酒精灯，最主要保证在火焰温度的范围内，温度可以保证无菌，瓶子也置于酒精灯的外焰灼烧灭菌，而胡萝卜也进行外部的消毒，用消毒的刀片割里面的韧皮部即可。,
