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1、病毒的增殖和培养,学习目标,知识目标理解复制的定义理解病毒复制的基本过程掌握病毒的人工培养方式及应用能力目标具备病毒分离培养及利用培养特性进行病毒鉴定的理论基础,主要内容,病毒的增殖复制的概念复制的基本过程,病毒的培养动物接种禽胚接种组织培养,重点与难点,重点病毒复制的基本过程病毒的人工培养方式难点病毒的复制过程,病毒的增殖方式复制,复制概念是指病毒利用宿主细胞内的原料、能量、酶与场所，来合成病毒的核酸和蛋白质，然后装配成熟并释放到细胞外的过程，称为复制。,病毒复制的基本过程,吸附,静电吸附非特异吸附可逆 与受体结合病毒与宿主细胞之间有选择性和有特殊亲和力的特异性吸附不可逆,穿入,有囊膜病毒的
2、穿入囊膜与细胞膜融合吞饮作用,无囊膜病毒的穿入 直接穿入 吞饮作用,囊膜与细胞膜融合,吞饮作用,吞饮作用,形成内吞小体,吞饮作用,有囊膜病毒的穿入,穿入（无囊膜病毒）,直接穿入,穿入（无囊膜病毒）,直接穿入,穿入（无囊膜病毒）,吞饮作用,脱壳,多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。不同病毒的脱壳又各有特色，例如：新城疫病毒经溶酶体酶的作用脱壳。痘病毒的脱壳分为两个阶段进行。呼肠孤病毒只脱去外层衣壳，内层衣壳不脱去，形成亚病毒颗粒。小RNA病毒在吸附的同时，就发生衣壳蛋白消失，即吸附的同时就发生了脱壳。,脱壳,生物合成,生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病毒的各种组成成分。早期:病毒特异性酶的合成病毒
3、核酸复制病毒结构蛋白质合成,生物合成,有囊膜病毒的生物合成,无囊膜病毒的生物合成,装配,新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病毒。,成熟与释放,成熟由新合成的病毒成分装配成完整的病毒。释放无囊膜的病毒：细胞完全裂解释放有囊膜的病毒：出芽释放,成熟与释放,有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞膜,有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞核核膜,无囊膜病毒的释放,塞里基森林病毒的出芽释放,HIV 的出芽与成熟,艾滋病毒的出芽释放,病毒复制的过程,有囊膜病毒的复制,病毒的培养方式,动物接种禽胚接种组织培养,动物接种,动物选择本动物 实验动物 最理想的是GF动物或SPF动物。病毒增殖结果观察动物死亡、
4、症状、病变等。动物接种的用途病原学检查，传染病诊断，疫苗生产及疫苗效力检验等。,禽胚培养,禽胚选择 最好选择SPF胚病毒增殖结果观察常见病变有死亡，充血、出血或出现坏死灶，禽胚畸形，绒毛尿囊膜上出现痘斑。接种途径禽胚接种的用途家禽传染病的诊断、病毒病原性的研究以及生产诊断抗原和疫苗等方面。,禽胚接种途径,绒毛尿囊膜接种 1013日龄鸡胚，如传喉。尿囊腔接种 912日龄鸡胚，如新城疫。卵黄囊接种 68日龄鸡胚，主要用于虫媒披膜病毒、鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的增殖。羊膜腔接种 1011日龄鸡胚，主要用于正粘病毒和副粘病毒。,1气室 2卵壳 3卵黄囊 4卵白5尿囊腔 6绒毛尿囊 7胚胎8羊水腔 9
5、胚外体液膜用的鸡胚,组织培养,组织培养细胞培养细胞选择增殖结果观察优缺点应用于病毒研究、疫苗生产和病毒病诊断的良好方法,细胞选择,兽医上通常用的细胞：CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-15株（猪肾上皮细胞）、K-L株（中国仓鼠肺）、D-K株（中国仓鼠肾）等。,增殖结果观察,病毒的致细胞病变作用（简称CPE），借助倒置显微镜即可观察到。有的细胞不发生病变，但培养物出现红细胞吸附及血凝现象（如流感病毒等）。有时用免疫荧光技术等血清学试验检查细胞中的病毒。,组织细胞培养病毒优缺点,组织细胞培养病毒优点：离体活组织细胞不受机体免疫力影响，很多病毒易于生长。便于人工选择多种敏感细胞供病毒生长。易于观察病毒的生长特征。便于收集病毒作进一步检查。细胞培养病毒缺点成本和技术水平要求较高，操作复杂，在基层单位尚未广泛应用。,谢谢！,
