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1、液相色谱-质谱联用仪1范围本作业指导书适用于新安装、使用中和修理后的离子阱和四极杆（包括三重四级）两种类型LC-MS的校准，四极杆飞行时间串联等其它类型台式LC-MS的校准可参照此作业指导书进行。2引用文献下列文献所包含的条文，通过在本指导书中的引用而构成本指导书的条文。本指导书发布时，所示版本均为有效。所有标准、规范或规程都会被修订，使用本指导书的各方应探讨使用下列文献最新版本的可能性。JJF1001-1998通用计量术语及定义JJF1059-1999测量不确定度评定与表示JJF1164-2006台式气相色谱-质谱联用仪校准规范3概述液相色谱质谱联用仪是以液相色谱为进样分离系统并通过一定的接
2、口与质谱仪耦合到仪器的分析仪器。样品经过色谱分离后经离子源离子化产生带有一定电荷、质量数的离子，采用不同的质量分析器把电离子按质荷比（m/z）分开,得到依质量顺序排列的质谱图。通过对质谱图的分析处理，进行定性、定量分析。液相色谱质谱联用仪主要由液相色谱、离子源、质量分析器、检测器、真空系统和计算机等几部分组成。4计量特性LC-MS各项技术指标见表1表1 LC-MS主要技术指标技术指标要 求质量范围不低于1000 u质量准确性* 0.6 u分辨力（R）*1 u信噪比*正ESI10 pg利血平，m/z609处 S/N10：1 （峰峰值）负ESI 20 pg氯霉素，m/z321处 S/N10：1 （
3、峰峰值）正APCI 20 pg利血平，m/z609处 S/N10：1 （峰峰值）整机定量重复性*RSD10%注：1 标*的为必须校准项目 2 本技术指标仅供参考,不作为合格性判断依据5校准/测试条件5.1 实验室环境要求5.1.1 仪器室内不得有强烈的机械振动和电磁干扰，不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性气体或试剂。5.1.2 实验室温度：2030。5.1.3 相对湿度：70。5.2 标准物质与试剂5.2.1 利血平-50%乙腈水溶液：100.0 pg/L；5.2.2 利血平-50%乙腈水溶液：10.0 pg/L；5.2.3 氯霉素-50%乙腈水溶液：200.0 pg/L；5.2.4 氯
4、霉素-50%乙腈水溶液：20.0 pg/L；5.2.5 碘化铯钠-异丙醇水溶液：2 g/L碘化钠，50 ng/L碘化铯溶于50%异丙醇水溶液；5.3 标准设备5.3.1 微量注射器：10 L6校准/测试项目与校准/测试方法6.1外观检查6.1.1仪器应具有下列标识：名称、型号、制造厂名(或公司名)、出厂编号，并附使用说明书。6.1.2仪器主机、色谱仪、计算机、真空部件和检测器等完好(符合出厂说明书要求)，各部件连接正确，各插件紧密配合，接触良好，仪器启动后无异常噪声。6.1.3仪器的按键开关、各调节旋纽均能正常工作，无松动现象，指示灯显示正常。6.1.4仪器运行中使用的高电压、大电流和高温等应
5、在仪器的显著部位贴有警示标志，提醒操作者注意这些潜在危险。6.1.5仪器应标明使用电压和频率等。6.2 分辨力仪器稳定后，选择ESI正离子模式，采用手动调谐，将碘化铯钠溶液 直接注入质谱中，参照附录D均匀选择5个扫描质量，优化仪器至最佳状态，记录各目标离子峰得到半峰宽W1/2。6.3 质量范围参照6.2条件将碘化铯钠溶液通过进样泵直接注入质谱中，选择Scan模式，设定扫描范围为（202000）m/z，观察是否出现质量数1000以上的质谱峰。6.4 质量准确度参照6.2条件，将碘化铯钠溶液通过进样泵直接注入质谱中，记录133，323,473,623,922,1072等碘化铯钠主要离子的质量数，理
6、论值见附录D，根据公式（1）计算质量准确度 (1)式中第i个离子三次测量平均值，u；第i个离子理论值，u。6.5 信噪比6.5.1 正ESI源仪器稳定后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C或等效色谱柱分离，注入10pg利血平溶液，选择SIM模式，提取特征离子，根据公式（2）计算信噪比。 (2)式中：提取离子的峰高； 基线噪声。6.5.2 负ESI源仪器稳定后，将200pg/ul的氯霉素溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子321至最佳响应后记录参数并保存
7、调谐文件。调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C或等效色谱柱分离，注入20pg氯霉素溶液，选择SIM模式，提取特征离子，根据公式（2）计算信噪比。 6.5.3 正APCI源仪器稳定后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C或等效色谱柱分离，注入20pg利血平溶液，选择SIM模式，提取特征离子，根据公式（2）计算信噪比。6.6 测量重复性参照6.5.1条件，注入200pg/ul的；利血平溶液10ul，选择SIM模式，提取特征离子
8、，连续测量6次，记录相应峰面积，根据公式（3）计算重复性 式中：相对标准偏差，%； 第i次测量峰面积； 峰面积的算术平均值。7 校准/测试结果处理与复校周期7.1按程序文件CX 34-01 证书/报告管理程序要求出具校准/测试报告。7.2检测部门对原始记录进行整理和归档。7.3根据校准结果，发校准证书或校准通知书。在校准结论中明确说明被校准仪器是否合格、存在问题及建议。7.4液相色谱-质谱联用仪的校准周期为2年，更换重要部件、维修或对仪器性能怀疑时，应随时校准。附录A液相色谱-质谱联用仪信噪比扩展不确定度A.1 概述A.1.1 测量依据SSY 0052-2010液相色谱-质谱联用仪作业指导书A
9、.1.2 环境条件温度（1527），相对湿度小于75%RH。A.1.3 测量标准液相色谱-质谱联用仪标准物质。A.1.4 被测对象Agilent6100A.1.5 测量过程SSY 0052-2010液相色谱-质谱联用仪作业指导书A.1.6 评定结果的使用符合上述条件的测量结果，一般可直接使用本不确定度的评定结果。A.2 数学模型A.2.1 数学模型： (1)式中： ：提取离子(m/z)的峰高：噪声峰高度A.3 不确定度分量的计算A.3.1信号峰高值测量不确定度：仪器测量峰高时，它与标准物质的浓度、进样量和峰高测量值的不确定度有关，因此信号峰高值测量不确定度应包括三个方面：信号峰高测量值的相对不
10、确定度进，标准物质的不确定度、微量进样器的不确定度和仪器重复测量的不确定度。A.3.1.1信号峰高测量值的相对不确定度进:信号峰高测量值的测量有两种方法：一是根据工作站中记录的选择离子流图，读取峰高值和基线值，以两点差的绝对值作为峰高的测量值，这种峰高的测量方法的相对不确定度优于0.2%；二是用工作站记录相应的选择离子流图，再用游标卡尺量取谱图的峰高的高度。谱图的高度一般为100mm,峰高为7090nm，其相对不确定度的分量估计为。A.3.1.2标准物质的相对不确定度：标准物质的相对不确定度是检定质谱计的不确定度的主要来源之一，它直接影响检定结果，标准物质的相对不确定度通常由标准物质证书给出，
11、标准物质证书给出其定值的误差为10mg2%，认为其为矩形分布，所以。A.3.1.3微量进样器校准的相对不确定度：微量注射器的体积刻度是重要的不确定度来源之一，所以，微量注射器必须经校准后才能使用。规程中规定校准一般称量6次，相对标准偏差1%。(进行检定结果计算时，应当采用校准值)。A.3.1.4重复测量相对不确定度:现在以一台6310的液相色谱-质谱联用仪为例做重复性测量：在相同的条件重复进样10次，按仪器本身计算信噪比的软件进行计算，所得的表1中的数据：表1：型号为6310的液相色谱-质谱联用仪10次连续测量的数据序号12345678910信噪比18513218522522821919617
12、4231212由上表可计算出其单次相对标准偏差A.3.1.5由于，相对独立，则A.3.2基线噪声测量值的不确定度：基线噪声测量的不确定度主要来自卡尺检定的不确定度和用卡尺测量的不确定度，一般为2%。如果用色谱工作站记录基线噪声，则其不确定度优于1%。A.4合成标准不确定度：A.4.1数学模型： 式中： ：提取离子(m/z)的峰高：噪声峰高度A.4.2方差与传播系数由：依据(1)可以推导出： 由于式中各不确定度分量彼此独立， A.4.3 表3 不确定度一览表不确定度分量标准不确定度来源标准不确定度分量值信号峰高测量值的相对不确定度0.5%标准物质的不确定度1.2%微量进样器校准的相对不确定度0.
13、4%重复测量不确定度14.8%基线噪声值测量的不确定度2.0%A.4.4合成标准不确定度：由,得：A.4.5扩展不确定度：为了计算的方便，均取=2由公式可得：A.5 扩展不确定度的评定为了计算的方便，均取=2由公式可得：A.6 测量不确定度的报告该液相色谱-质谱联用仪信噪比的扩展不确定度表示为U=30%，k=2。附录B液相色谱仪-质谱联用仪量值溯源图国家标准物质中心化学基准直接测量深圳市计量质量检测研究院标准名称：液相色谱-质谱联用仪检定用标准物质测量范围：离子阱和四极杆液相色谱-质谱联用仪准确度等级：二级直接测量客户被测名称：液相色谱-质谱联用仪测量范围：离子阱和四极杆液相色谱-质谱联用仪信
14、噪比不确定度：Urel= 30%，k=2附录C 深圳市计量质量检测研究院 校准记录格式（供参考）客户名称：仪器名称：液相色谱质谱联用仪型号规格：出厂编号：资产编号：制造厂名：技术依据： 检定/校准日期： 年 月 日有效期/复校周期： 年检定/校准地点： 环境条件： %RH标准器名称特征设备编号检定/校准证书号有效期使用前后状态使用前：正常/不正常使用后：正常/不正常一、外观： 正常/异常二、分辨率：三、质量范围： 四、质量准确度理论值实测值五、信噪比 离子源： 测量样品：利血平/氯霉素/峰高基线噪声信噪比六、测量重复性：样品名浓度响应值平均值:重复性:检定员：核验员： 附录D碘化铯钠（NaCSI）离子质量（m/z）离子（）理论值（）2322.99133132.91173172.88323322.78473472.67623622.57722772.46922922.3610721072.1512221222.1413721372.0415221521.9316721671.8318221821.7219721971.61
