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1、2013届本科生毕业论文题 目 仙茅粗多糖清除自由基活性的研究 二级学院 专 业 学生姓名 学 号 年级 指导教师 职称 教务处制表2013年 5 月 1目录摘要IAbstractII第1章 绪论11.1 选题背景11.2 研究目的和意义21.3 主要研究内容2第2章 双波长法测定仙茅多糖含量的研究32.1 材料与方法32.1.1 材料32.1.2 方法32.2 结果与分析52.2.1结果52.2.2 讨论8第3章 多糖的体外抗自由基活性93.1 引言93.2 实验材料93.2.1 材料93.2.2 药品及试剂93.2.3 仪器93.2.4 实验方法93.3 结果与分析113.3.1 仙茅多糖
2、对羟自由基(OH)的清除作用113.3.2 仙茅多糖DPPH的清除作用113.3.3 仙茅多超氧阴离子自由基(O2-)的清除作用123.4 讨论13结论14参考文献15致谢17附录：18附录1：缩略词表18附录2：实验试剂19附录3：实验仪器20摘要用80目的仙茅细颗粒用95%的乙醇脱色素，残渣用水提取后再脱蛋白，用双波长分光光度法来测定出仙茅多糖含量，并用体外化学模拟法测定仙茅粗多糖对OH、超氧基和DPPH的清除能力。结果表明：双波长光谱法测仙茅多糖含量及清除力操作简便，结果可靠，重复性好。回归方程C=0.0096x+0.0225，R2=0.9993，平均加标回收率95.89%，RSD 为2
3、.28%，仙茅多糖含量为12.48g，得率为6.24%。Vc对OH、DPPH、O2-的半数清除率分别是0.099、0.027、0.144mg/ml仙茅多糖对OH、DPPH、O2-的半数清除率分别是4.273、5.332、4.983mg/mL 。结论：仙茅粗多糖除具有一定清除自由基能力。关键词：仙茅；多糖；含量测定；抗自由基AbstractCurculigo using 80 fine granular pigment, with 95% alcohol residue after extracting with water and protein, with double wavelength
4、 spectrophotometry to determine the common curculigo rhizome polysaccharide content, and chemical simulation in vitro determination of crude polysaccharide curculigo and DPPH OH , ultra oxygen removal capacity.Results showed that: the polysaccharide content and remove curculigo force measurement is
5、simple, reliable results, good repeatability. Regression equation C = 0.0096 + 0.0225 x, R2 = 0.9993, the average standard addition recovery rate 95.89%, RSD was 2.28%, common curculigo rhizome polysaccharide content was 12.48g,yield is 6.24%. Vc of OH , DPPH and O2 - half of clearance are respectiv
6、ely 0.099, 0.027, 0.144 mg/mL curculigo polysaccharide of OH , DPPH and O2 - half of clearance are respectively 4.273, 5.332, 4.983 mg/mL. Conclusion: rhizoma curculiginis coarse polysaccharide has the ability of scavenging free radicals.Key words：Common curculigo rhizome; Polysaccharides; Content d
7、etermination; Resistance to free radicals第1章 绪论1.1 选题背景该仙茅属植物的经典分类中，根据植株的高大矮小分为大叶仙茅属Sect Molinerin与仙茅属Sect Curculiga1。仙茅(Curculigo orchioides Gaertn)为仙茅科仙茅属植物仙茅，始载于海药本草，其叶似茅，根状茎久服益精补髓，增添精神，故有仙茅之称，别名地棕(四川、贵州)，独茅（四川），山党参(福建)，仙茅参(云南)，海南参（海南）2。石蒜科植物仙茅的根茎为中华人民共和国药典2005年版第一部收载的中药仙茅。其性温，味苦，有小毒，用于肾阳不足、阳痿遗精、
8、腰脊冷痛、尿频尿急、腰膝疲软、高血压3、疮疡肿痛、痨虚内伤、筋骨疼痛等临床病症。现代各国文献研究显示仙茅中含有皂苷类、酚类、苷类、微量元素和多糖类成分。药理研究发现，仙茅具有适应原样作用、抗炎、改善味觉、补肾壮阳及抗骨质疏松等生物活性4。此外仙茅的临床应用，特别在补肾壮阳、提高免疫力、防衰老及促生育作用等方面前景广阔，开发利用潜力很大5。多糖是一类天然高分子化合物，它是醛糖或酮糖通过甙链连接在一起的多聚物，是构成生命的四大基本物质之一。近年来对糖复合物与多糖活性的研究得到了空前迅速的发展。从包括膜的化学功能、免疫物质的研究以及对新药物资源的寻找等的相关研究中，如猪苓多糖6、香菇多糖7和当归多糖
9、8，因无毒副作用和有生物活性被作为疫苗或临床用药；另外一些多糖因具有特殊的理化性质在轻纺、石油、食品等领域得到广泛应用9。有研究表明仙茅多糖能提高小鼠免疫功能10。相关研究人员11-13进一步以植物中药理论为指导，对植物化学成分进行深入研究。发现枸杞14、桑葚15、山丹叶16、黑灵芝17等植物多糖类化合物具有抗氧化、抗自由基、抗衰老、降血糖、降血脂等生物活性作用。其具体作用机理是清除减少了体内自由基含量，开发新的抗自由基产品迫在眉睫。为了充分利用与合理开发仙茅资源，寻找仙茅产品的新价值，本文主要针对仙茅多糖的抗自由基作用进行研究，为提高仙茅的综合利用率提供理论依据，从而促进仙茅产业的可持续快速
10、发展。1.2 研究目的和意义 植物多糖类化合物具有抗氧化、调节免疫、降血糖、降血脂等生物活性作用，是一类具有开发前景的功能性活性物质。仙茅是我国的一种天然药用植物植物，在使用时只是作为药包炖煮食物或用来泡酒，用后剩下大量废叶残渣被丢弃，不仅浪费资源，还污染环境。鉴于近年来发现自由基的产生是引起机体衰老的重要原因，目前已发现有100多种疾病都是人体自由基过剩引起的，而人工合成抗自由基和质子化超氧阴离子的物质如：BHA、BHT、PG虽然清除自由基的效果很好，但是长期服用对身体有害，因此在众多天然植物成分中，筛选出无毒副作用和有良好作用与效果的抗氧化剂，对预防和缓解相关疾病的发生发展具有重要的意义。
11、1.3 主要研究内容 （1）仙茅多糖的提取及含量测定 （2）仙茅多糖对羟基的清除能力的测定 （3）仙茅多糖对超氧基离子的清除能力（4）仙茅多糖对DPPH清除能力的测定第2章 双波长法测定仙茅多糖含量的研究 多糖是由10个以上单糖通过苷键连接而成的聚糖，具有抗氧化、增强机体免疫力等多种生物活性18。近几年关于氧自由基的生理功能和毒性的研究越来越引起人们的关注。氧自由基在动脉粥样硬化、糖尿病、白内障的形成和视网膜的损伤过程中起到重要作用。众多研究表明植物多糖具有广泛的生物活性，其参与机体各种代谢，就有调节免疫作用，多糖的相关研究已引起国内外广泛重视19-21，而抗氧剂用于食品工业的需求量逐年增加，
12、其中天然抗氧剂的应用大量增加。仙茅主要生长在我国南方海拔1600米以下的林中、草地或荒坡，资源量相对较足。为了更加有效地利用仙茅，提高仙茅的经济价值和医用价值，同时开发医药新产品。本实验对仙茅采用乙醇提取、沸水抽提、乙醇沉淀、sevage22去蛋白的方法获得粗多糖。经真空冷冻干燥，采用苯酚硫酸法测定粗多糖中多糖的含量。2.1 材料与方法2.1.1 材料2.1.1.1 实验材料仙茅(Curculigo orchioides Gaertn)购自于正源药业有限公司。60恒温24小时烘干至恒重。粉碎，过筛取80目的粉末备用。2.1.1.2 药品与试剂无水乙醇、95%乙醇、葡萄糖、氯仿、正丁醇、丙酮、浓
13、硫酸、浓盐酸、抗坏血酸。2.1.1.3仪器与设备冰箱；电磁炉；紫外可见分光光度计；数显恒温水浴锅 ；电子天平；旋转蒸发仪；真空干燥箱；真空冷冻干燥机；粉碎机；离心机。2.1.2 方法2.1.2.1 多糖的提取称取仙茅粉末200 g，用95%乙醇98水浴2h，除去色素和小分子物质。减压过滤后残渣与水按1:10比例混合，水浴回流2h，取滤液，滤渣再与水按1:10回流2h，合并两次滤液，经旋转蒸发仪减压浓缩。将浓缩液用Sevag法除蛋白三次：向浓缩液中加入其体积1/4的氯仿-正丁醇溶液，振荡离心留沉淀，除去有机层中的蛋白质。沉淀加入其4倍体积的无水乙醇中静止过夜，高速离心收集沉淀。沉淀物经95%、丙
14、酮洗涤数次后，得到仙茅粗多糖21.03g。2.1.2.2双波长测多糖含量（1）葡萄糖标准品溶液的制备将葡萄糖于65干燥至恒重，精密称100.0mg，置100mL容量瓶中，加蒸馏水溶解，定容至刻度，摇匀即得葡萄糖标准溶液（1.0mg/mL葡萄糖）。（2）多糖溶液的配置精密称取仙茅粗多糖100 mg，加25 mL蒸馏水溶解，过滤，滤液转至500 mL容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀即得0.2 mg/mL样品溶液，待用。（3）检测波长的选择将1 mg/mL葡萄糖溶液稀释为0.08mg/mL，分别精密吸取2.0 mL葡萄糖标准溶液和多糖溶液于两个10mL容量瓶中，加入1.0 mL5%苯酚摇匀后，迅速加入5.
15、0mL浓硫酸，充分混合，在室温放置20 min。以2.0 mL蒸馏水代替样品作参比对照。然后在400600 nm范围内进行光谱扫描，以最大吸收波长为主波长，以较平缓处某一波长为基线波长。（4）标准曲线的绘制将1mg/mL的葡萄糖溶液稀释成0.1mg/mL，精密量取该葡萄糖对照品溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8mL分别加入10mL量瓶中定容，用蒸馏水补至2.0mL，另以2.0mL蒸馏水做空白对照。按上述显色方法显色后，分别在主波长和基线波长下测定其吸光度，求两波长处吸光度差值（A主波长A基线波长），以葡萄糖对照品溶液浓度(C，mg/L)为横坐标，吸光度差值(A)为纵坐标
16、，绘制标准曲线。（5）精密度试验精密吸取5份稀释为0.04mg/mL的样品溶液，按标准曲线绘制方法操作，测定吸光度，计算RSD值。（6）稳定性试验精密吸取2.0mL稀释5倍后的样品溶液至10 mL容量瓶中，在室温放置0、20、40、60、80、100min后，按标准曲线绘制方法操作测定吸光度，计算RSD值。（7）加标回收率试验取分别精密吸取2.0 mL稀释为0.04mg/mL的样品溶液至3个10 mL容量瓶中，各加0.5 mL0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液，按标准曲线绘制方法测定其多糖浓度，计算RSD值。（8）样品含量测定精密吸取0.04mg/mL样品溶液2.0mL于10mL容量瓶中，按标准
17、曲线绘制方法测定吸光度，根据标准曲线的线性回归方程计算仙茅总多糖含量。2.2 结果与分析2.2.1结果2.2.1.1主线和基线波长将葡萄糖对照品溶液和样品溶液分别在紫外分光光度计上于400600nm范围扫描，结果见图2-1。由图2-1可以看出，0.08 mg/mL的葡萄糖用紫外测得在490 nm处A值最大为0.89，0.2mg/mL的样品溶液在489 nm处A值最大为0.56，两者相差1 nm，满足在5 nm之内的条件，选择在490 nm作为主波长，在距离主波长的距离大于20nm以上且较为平缓处选择一波长430 nm作为基线波长。 （1）葡萄糖标准液 （2）样品溶液 图2-1 光谱扫描图2.2
18、.1.2 标准曲线的制作以葡萄糖标准品溶液的浓度为横坐标，测得的吸光度差值为纵坐标作葡萄糖标准曲线，见图2-2。所得线性回归方程为y= 0.0096 x + 0.0225，决定系数 R2 = 0.9993。可见在20-70mg/L浓度范围内线性良好。2.2.1.3精密度试验同一样品溶液液分5 份进行平行检测，结果见表2-3，计算RSD 为0.44% 。说明双波长紫外分光光度度法检测出的数据精密度很高、准确性好。表2-3 精密度试验结果编号A490A430ARSD10.4290.1900.2390.44%20.4350.1930.24230.4470.2090.23840.4330.1980.2
19、3550.4510.2030.2482.2.1.4 稳定性试验由图2-4的结果可知：平均吸光度差值A0.235，相对标准偏差RSD0.27。试验结果表明在此期间多糖溶液的吸光度基本无变化，该方法100min内测得多糖的稳定性好。图2-4 双波长测多糖稳定性试验结果2.2.1.5 加标回收率试验由表2-5的结果可知，由数据结果计算可知，加标回收率在93.00%98.00%之间，平均回收率95.89%，满足检测要求，RSD值为2.28%。在误差允许的范围内，双波长法测定仙茅总多糖含量的方法可信。表2-5 加标回收率试验编号葡萄糖加入量(mL)A测得量C(mg/L)回收率平均回收率RSD10.5 0
20、.388 38.627098.25%95.89%2.28%20.5 0.383 38.122095.72%30.5 0.372 37.718093.70%注：标准溶液浓度为0.1mg/mL2.2.1.6 样品溶液中多糖含量的测定 水提醇沉真空冷冻干燥后粗多糖为黄褐色粉末（如图2-4），根据标准曲线的回归方程计算样品溶液中多糖含量：40mg/L中测出多糖浓度为23.72mg/L，即100mg粗多糖中含有多糖59.30mg多糖，粗多糖含糖率59.3/100 mg/mg。仙茅粗多糖重量21.03g。由下列公式得：仙茅多糖提取率为6.24%，多糖含量为12.48g。 多糖提取率（）=粗多糖含糖率粗多糖
21、总重量/仙茅粉重量100图2-4 仙茅粗多糖2.2.2 讨论精密度是指在相同条件下重复测定结果彼此相接近的程度，考察的是仪器的精密度。大小用相对标准偏差表示，其值越小说明精密度越越高，由精密度试验得RSD值为0.44%，说明本实验的精密度较好。在该实验条件下偶然误差与系统误差都比较小。稳定性试验（stabilitytest）主要主要考察一段时间内测试的方法、仪器条件、环境等的稳定性。稳定性试验的RSD值为0.27%，说明本试验的的稳定性也较好。将其测定结果扣除样品的测定值，除以加样的量，以计算回收率。实验中测得的平均回收率为95.89%，RSD为2.28%。表明双波长法准确度高，精密性好，回收
22、率高，实验操作简单，稳定性好，可适用于仙茅粗多糖含量的测定。仙茅粗多糖提取率为6.24%，这与五味子多糖的提取23中5.61%相比。结果偏高，主要的原因是不同植物中水溶性多糖的含量和成分不同。与仙茅提取的12.47%相比偏低，可能是因为它测定的是溶液中的多糖含量，也可能是因为在利用水提醇沉法的提取过程中水溶性多糖还未完全溶解于水中。可增加提取时间、次数提取或使用超声波、微波进行辅助提取以获得更多的多糖。还有可能是因为离心时间不够，离心过程中损耗过多而造成的，可增加离心时间和离心转速并在离心的时候降低温度，使多糖在乙醇中尽可能地全部析出。 第3章 粗多糖清除自由基活性3.1 引言近几年自由基的生
23、理功能和毒性的研究越来越引起人们的关注。氧自由基在动脉粥样硬化、白内障和视网膜的损伤过程中起到重要作用。研究表明，自由基被活性氧引发后会使人体内的蛋白与脂质发生链式氧化反应，导致细胞膜和组织受损，以至发生疾病或衰老。适当给予体内源性抗氧化物质或补充外源性抗氧剂，使机体恢复到一定水平24。抗氧剂也是一种食品添加剂，它能延缓或阻止油脂的自动氧化，可以防止食品因氧化而使营养损坏、褪色、褐变等25。抗氧剂广泛运用在食品行业，需求量逐渐增大。其中天然抗氧剂的应用也逐年增加26。本实验采用体外模拟的方法测定多糖对DPPH自由基，超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除作用。考察仙茅多糖的清除自由基活性，以抗坏血
24、酸做阳性对照，发现仙茅中粗多糖具有一定的清除自由基能力，为进一步开发利用仙茅作为天然食品抗氧化剂提供理论基础，具有重要的社会意义和经济价值。3.2 实验材料3.2.1 材料：真空干燥后的粗多糖。3.2.2 药品及试剂：DPPH，无水乙醇，FeSO4，水杨酸，H2O2（36%-38%），95%乙醇，抗坏血酸，Tris，浓HCl，联苯三酚等(纯度见附表2)。3.2.3 仪器：试管架，移液管，100mL容量瓶，紫外可见分光光度计，数显恒温水浴锅，电子天平（具体见附表3）。3.2.4 实验方法3.2.4.1 溶液的配置（1）样品溶液：精密称取1g仙茅粗多糖，加蒸馏水溶解定容至50mL，得20mg/mL
25、。取2mL于试管中，依次用二倍稀释法将其稀释成20mg/mL、10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL，0.625mg/mL6个质量浓度（2）对照品Vc溶液：称取Vc0.1000mg用少量水溶解，转入容量瓶中定容至100mL。取2mL再用二倍稀释法稀释成1000ug/L，500 ug/L，250 ug/L，125 ug/L，62.5 ug/L，31.25 ug/L，15.125ug/L7个浓度。（3）9mmol/L FeSO4(分子质量152加7个水为278)溶液：精密称取250.2000mg放入烧杯中加50mL蒸馏水溶解，转至100mL容量瓶中用蒸馏水定容。（4）9
26、mmol/L水杨酸（分子质量138.12）：精密称取124.308mg放入烧杯中，加少量乙醇溶解置于100mL容量瓶中，定容至刻度。（5）8.8mmol/LH2O2（分子质量34）：根据37%的浓度稀释。（6）0.16 mmol/L DPPH（分子量394.3）乙醇溶液：精密称取3.1544mg DPPH于50 mL容量瓶中，用70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀即得。（7）50.0mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.2）：Tris分子量为121.1，精密称取0.6060 g Tris(三羟甲基氨基甲烷)于100 mL容量瓶中，用50 mmol/L HCl溶解并定容至刻度，用Na2CO
27、3溶液调节其pH到8.2，摇匀即得。（8）3.0mmol/L邻苯三酚(分子质量126.1)溶液：精密称取18.9150mg邻苯三酚于50mL容量瓶中用10mmol/L HCL溶解并定容至刻度。3.2.4.2 粗多糖和Vc清除羟基自由基试验实验原理： H2O2与亚铁离子混合产生羟基，在体系内加入水杨酸捕捉，羟基会产生有色物质，且在510nm波长条件下有最大吸收值。向10mL的具塞试管加入配置好的一定浓度样品2ml，再依次加入9mmol/L FeSO4 2ml，9mmol/L水杨酸-乙醇2mL，8.8mmol/L H2O2 2ml后混匀, 于37水浴中加热30 min，在510 nm 下测定样品吸
28、光度( Ai)。加入2 mL蒸馏水于体系中代替8.8 mmol/L H2O2，测定得样品本底吸光度( Aj)。将体系中的样品改为加入2 mL蒸馏水，测定得参比对照吸光度( Ao )。其中样品吸光度每个质量浓度做3 个平行，取平均值，以Vc作阳性对照, 按公式计算清除率： K(% )=Ao -(Ai-Aj)/Ao 100%3.2.4.3 粗多糖和Vc清除DPPH 实验原理：DPPH是一种稳定的自由基，在有机溶剂中呈紫色，在517 nm处有较大吸收，当加入具有抗氧化能力的物质后，一部分自由基就会被清除掉，使该波长下吸收强度减弱，由此来判断该物质的抗氧化活性。取3 ml样品溶液于具塞试管中，加入3
29、ml DPPH溶液，25 水浴加热20 min后，在517 nm测定样品吸光度（Ai）。向3 ml蒸馏水代替DPPH测得样品本底吸光度（Aj）。用3 mL蒸馏水替代样品测参比吸光度（Ao）。其中每个样品浓度做3个平行试验取平均值。以Vc作阳性对照，按公式计算清除率：K(% )=Ao-(Ai-Aj)/Ao100%3.2.4.4 清除超氧离子采用邻苯三酚自氧化法。原理：在一定条件下，邻苯三酚能够自氧化产生超氧离子，320 nm 波长下有较大吸收，加入一定量的抗氧化剂可对超氧离子产生不同的抑制作用，进而导致吸光度的改变。取50 mmol/L Tris-HCl（PH8.2）缓冲液4.5 mL于具塞试管
30、中，25 预热20 min，分别加入1 ml样品溶液和0.4 mL3 mmol/L 的邻苯三酚溶液，振荡混匀后，于25水浴5 min，加入1ml10mmol/L 的HCl终止反应，立即在320 nm 波长处测定吸光度(Ai)，每个浓度做3个平行实验。样品本底组(Aj)用同体积的蒸馏水代替邻苯三酚。参比对照组(Ao)用同体积蒸馏水替代样品溶液。以Vc为阳性对照，按以下公式计算清除率。K(% )=Ao-(Ai-Aj)/Ao100%3.2.4.5 统计学处理 采用SPSS15.0统计分析软件，进行回归分析，选取可信度为95%，计算IC50。3.3 结果与分析3.3.1 仙茅多糖对羟自由基(OH)的清
31、除作用仙茅粗多糖对羟基自由基的清除结果见图3-1.由图3-1可知，仙茅粗多糖对羟基自由基有一定的清除作用，其清除作用随浓度升高而增强，浓度达到10mg/mL后清除作用趋于平缓，其IC50达4.27mg/mL，95%置信范围为2.542mg/mL-7.654mg/mL。仙茅多糖对羟基自由基的清除作用弱于Vc（IC50=0.10mg/mL）。Vc的清除作用强，较低于1mg/mL的浓度下清除率达90%以上，IC50为0.099mg/mL，95%置信范围为0.071mg/mL-0.142mg/mL。图3-1 清除羟基自由基3.3.2 仙茅多糖DPPH的清除作用仙茅粗多糖对DPPH的清除结果见图3-2。
32、由图可知，粗多糖在0-10mg/mL范围内随着浓度的增加，清除DPPH的能力逐渐增强，浓度大于10mg/mL之后，多糖对自由基的清除率有上升趋势减缓，计算得粗多糖对DPPH的半清除率IC50为5.332mg/mL。置信区间：3.141mg/mL-10.582mg/mL。随着Vc的浓度增加，清除DPPH的能力里明显增强，在2mg/mL的浓度条件下，清除率达到90%以上，通过统计软件SPSS计算得Vc对DPPH的半清除率IC50为0.027mg/mL,置信区间：0.021mg/mL-0.034mg/mL。图3-2 清除DPPH3.3.3 仙茅多超氧阴离子自由基(O2-)的清除作用仙茅粗多糖对超氧离
33、子的清除结果见图3-3，由图可知随着抗坏血酸的浓度增加，清除O2-的能力里明显增强，通过统计软件SPSS计算得抗坏血酸对DPPH自由基的半清除率IC50为0.144mg/ml。95%的置信度范围：0.108mg/mL-0.190mg/mL。在一定浓度范围内随着粗多糖的浓度增加，清除O2-的能力逐渐增强，但随着浓度继续增加时，清除率不再增加，对超氧阴离子自由基的清除率有下降趋势，通过统计软件SPSS计算得粗多糖对O2-的半清除率IC50为4.983mg/mL。95%的置信度范围：3.907mg/mL-6.531mg/mL。图3-3 清除超氧自由基3.4 讨论由以上结果可知，在一定浓度范围内随着粗
34、多糖浓度的增加，清除三种自由基的能力逐渐增强。当粗多糖的浓度增大到一定浓度时，清除能力增长趋势相对变缓，难以达到高的清除率，可能是由于提取的粗多糖含有杂质（杂质吸收波长与自由基形成的有色物吸收波长相近）的影响，也可能是由于在自由基引发剂存在的条件下，多糖与单糖类似也可以自动氧化产生新的有机自由基之故。本实验采用双波长分光光度法对两个吸收峰的组分进行测定，避免了多糖颜色造成背景深或溶液浑浊对试验结果的干扰，抵消了试验条件变化对测定结果的影响，从而提高了准确度。结论本实验使用水提醇沉法提取仙茅中的多糖类化合物，采用双波长法测定多糖的含量。分别采用DPPH自由基法，邻苯三酚法和Fenton法测定提取
35、的多糖类化合物的抗自由基能力。结果表明：仙茅经过水提醇沉真空冷冻干燥后粗多糖含量偏低，多糖对DPPH自由基、超氧阴离子自由基(O2-)、羟自由基(OH)有一定的清除作用。且在一定浓度范围内清除率随浓度的增大而增大，当粗多糖的浓度增大到一定浓度时，清除能力增长缓慢。当仙茅多糖浓度为70mg/mL时，对DPPH、OH、O2-的清除率分别达到78.53%、68.55%、74.35%，表明仙茅多糖具有一定的清除率。仙茅中的多糖类化合物作为一种潜在的具有抗自由基活性的物质，有待进一步的研究。参考文献1 李隆云,陈大霞,秦松云等.仙茅属植物7个国产种的SRAP遗传关系研究.J中国中药杂志.2008.33.
36、(2)31-32.2 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志M.第16卷.第1分册.北京:科学出版社.1982.3.3.3 仙茅老年人的良药.农训学.中医中药.4 黄有霖.仙茅的研究进展J.中药材,2003;26(3):225-8.5 四川植物志编委会.四川植物志(第1卷).成都:四川人民出版社,1979.34.6 周文化,唐冰,钟秋平.短梗霉多糖的微生物发酵及其在食品工业中的应用J.食品与机械杂志,2004，20(5):5659.7 吴东儒.糖类的生物化学M.北京:高等教育出版社,1987.8 陈泉生，陈万群，杨士琰.仙茅的药理研究J中国中药杂志，1989年：618620 9 熊皓平,杨
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38、品工业科技.Vol.32,No.03,2011.15 王锐,何嵋,袁晓春等.桑葚多糖体外清除自由基活性研究J.安徽农业科学0517-6611（2012）-0075-02.16 薛长辉,端允.双波长测定山丹中总黄酮含量J.技术食品工程.1673-7199(2009)10-0144-03.17 张志军,李淑芳,魏雪生.灵芝多糖清除自由基活性的研究J.食品研究与开发.2012,3（3）33.18 柳钟勋,左增艳,林赴田,等.ASDP/ASDE3作为乙型肝炎基因工程疫苗新型复合佐剂的效果及安全性J.病毒学报,1992,8(4):309-313.19 张倩,江萍,秦礼康等.多糖功能的研究进展J.贵州农业
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40、:科学出版社，1999:17718026 HalliwellB，GutteridgcJMC，CrossCEJournaloflaboratoryClinicalMedicine，1992，119：558致谢首先，感谢学校这四年来对我的培养，让我学到新的知识理念。能在进入社会后有一个新的起点台。其次，我要感谢我的老师对我本次毕业论文实验和写作的指导及帮助，老师对我在整个过程中不知不解的点都悉心解释，在实验方案优化、论文写作修改中也都尽心尽责。也谢谢同学们对我的帮助，让我能顺利完成论文的。谨以本论文献给关心和帮助我的所有老师、同学，祝大家身体健康，万事如意！最后，向各位参加答辩评审的老师表示衷心的
41、感谢。附录：附录1：缩略词表英文缩写英文全称汉语全称DPPH1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl1，1-二苯基-2-三硝基苯肼BHTbutylated hydroxytoluene2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚Tristrihydroxymethyl aminomethane三羟甲基氨基甲烷ODtrihydroxymethyl aminomethane吸光度SPSSStatistical Product and Service Solutions“统计产品与服务解决
42、方案”软件PGprostaglandin前列腺素RSDrelative standard deviation相对标准偏差IC50半数清除率BHAButyl hydroxy anisd丁基羟基茴香醚附录2：实验试剂试剂名称规格生产厂家无水乙醇分析纯AR级上海有机化工试剂研究所95%乙醇分析纯AR级上海有机化工试剂研究所抗坏血酸分析纯AR级成都科龙化工试剂厂联苯三酚分析纯AR级成都科龙化工试剂厂浓硫酸分析纯AR级成都科龙化工试剂厂水杨酸分析纯AR级成都科龙化工试剂厂FeSO4分析纯AR级成都科龙化工试剂厂H2O2分析纯AR级36%-38%成都科龙化工试剂厂正丁醇分析纯AR级西陇化工有限公司丙酮分析
43、纯AR级北京益利精细化学品有限公司氯仿分析纯AR级四川西陇化工有限公司乙醚分析纯AR级成都联合化工试剂研究所Tris分析纯AR级NOVON浓Hcl分析纯AR级成都科龙化工试剂厂DPPH分析纯AR级日本和光纯药工业株式会社（wako公司）葡糖糖分析纯AR级天津博迪化工股份公司附录3：实验仪器仪器名称仪器型号生产厂家数控恒温水浴锅HH4型金坛市正基仪器有限公司循环水式多用真空泵SHB-郑州长城科工贸有限公司多功能粉碎机文岭市百乐粉碎设备厂电磁炉IH-S196A富士宝精密电子天平MP2002上海舜宇恒平电热恒温鼓风干燥箱DHG-9140A上海齐欣科学仪器有限公司紫外可见分光光度计TU-1901北京普析通用仪器有限责任公司减压旋转蒸发仪RE-52AA郑州南北仪器设备有限公司离心机5810R型德国艾本德股份公司（Eppendorf&AG）冰箱BCD-568W海尔真空冷冻干燥机LG-5A上海市离心机机械研究所有限公司
