第44课时动物细胞工程文档资料.ppt

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1、营养葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机 盐和微量元素+血清或血浆等天然成分。温度和pH(36.50.5)和(7.27.4)。气体环境95%空气+5%CO2。提醒 CO2作用调节培养基pH;空气中O2作用细胞有氧呼吸;所用装置CO2培养箱。(2)原理：细胞增殖。(3)动物细胞培养时,一般选取幼龄动物的组织、器官,其细胞的分化程序较低,增殖能力强,有丝分 裂旺盛,容易培养。,(4)在动物细胞培养过程中,一般情况下10代以前 的细胞核型不变,10代以后有些细胞核型发生改 变,50代以后的细胞可能发生癌变。(5)胰蛋白酶在动物细胞培养过程中的作用包括将 组织分散成单个细胞,以及将贴壁细胞从瓶壁上分 离下

2、来,这样做的目的是避免动物细胞的接触抑制 现象。,3.应用(1)生产细胞产品：干扰素、疫苗、单克隆抗体。(2)检测并判断某毒性物质毒性的大小。(3)临床医学研究。拓展提升 动物细胞培养与植物组织培养的比较,对位训练1.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是()A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡 过程中 B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等 C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌 蛋白 D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶 处理,D,2.回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长 到细胞表面 时，细胞会停

3、止分裂增殖，这 种现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成的 细胞层数是。要使贴壁的细胞从瓶 壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是。（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂 停止，进而出现 的现象；但极少数细 胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生 改变而变成 细胞，该种细胞的黏着性降低,细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量。,相互接触,接触抑制,单层（或一层）,胰蛋白,酶,衰老甚至死亡,不死性,减少,（3）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观 察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是。（4）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到 期的细胞用显微镜进行观察。,由于活细胞

4、的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）,中,（5）在细胞培养过程中，通常在 条件下保存细胞。因为在这种条件下，细 胞中 的活性降低，细胞 的速率降低。（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发 生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当 作 进行攻击。,冷冻（或超低温、,液氮）,酶,新陈代谢,抗原,考点二 动物细胞融合与单克隆抗体1.单克隆抗体的操作流程,2.考点解读(1)诱导融合的2种细胞名称及作用 免疫过的B淋巴细胞(浆细胞)产生抗体;骨髓瘤细胞无限增殖。(2)诱导融合与原生质融合的不同方

5、法 动物细胞诱导融合的特有方法灭活病毒诱导。(3)2次筛选的目的及方法 在特定的选择性培养基上,未融合的亲本细胞(浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细 胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融,合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长。这种杂种 细胞的特点是既能迅速大量繁殖,又能产生单一的 特异性抗体。经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所 需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞),需经克隆化培 养和抗体检测,经多次筛选后就可获得足够数量的 能分泌所需抗体的细胞。(4)2个培养提取场所 体外培养培养液提取。体内小鼠腹腔中培养小鼠腹水中提取。,提醒 取相应B细胞前必需先注射相应抗原,形象 地说

6、先“打针”,否则失败。(5)原理：细胞膜的流动性和细胞增殖。拓展提升 植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备的比较,对位训练3.利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗 原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（）A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产 生的血清抗体为单克隆抗体 B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得大量针对SARS 病毒的单克隆抗体 C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱 导融合后的细胞均为杂交瘤细胞 D.利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异 性结合的方法可诊断出病毒感染者,D,考点三 动物体细胞核移植技术与克隆动物1.动物体细胞核移植技术操作流程2.考点

7、解读(1)原理：动物细胞核的全能性(不能说动物细胞 全能性)。(2)卵母细胞选择时期及原因 减中期的卵母细胞,此时具备受精能力,细胞质,中合成与分裂分化有关的物质能刺激融合后重组 细胞进行分裂分化,形成重组胚胎。(3)选卵细胞做受体细胞原因 大,易于操作;卵黄多,营养丰富,为发育提供 充足的营养;激发重组细胞分裂分化。(4)供体细胞：取供体动物的体细胞培养,一般选 用传代10代以内的细胞,因为10代以内的细胞一般 能保持正常的二倍体核型,保证了供体细胞正常的 遗传基础。(5)动物体细胞不能经培养直接发育成完整个体,原因是动物体细胞的全能性受到限制。用体细胞 核移植技术能够得到克隆动物,说明动物

8、体细胞的 细胞核具有全能性。(6)该过程用到的技术手段：动物细胞培养、动物 细胞融合、早期胚胎培养和胚胎移植。(7)核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本不 同原因 克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本。所以 与植物组织培养不同(只来自于一个亲本),克隆动 物遗传物质来自2个亲本。,在发育过程中可能发生基因突变,染色体变异导 致性状改变。外界环境条件的影响引起不可遗传的变异。3.应用及存在问题(1)应用：加速家畜遗传改良进程、促进优良畜群 繁育、保护濒危物种、克隆器官用于移植等。(2)存在问题 成活率低;克隆动物的健康问题;克隆动物 食品的安全性问题。,对位训练4.下列哪项不属于体细胞核移植技术

9、的应用（）A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 B.保护濒危物种 C.获得组织器官异体移植的供体 D.大量产生紫杉醇,D,5.下列有关体细胞核移植技术的说法，不正确的是（）A.体细胞核移植技术在多种动物中获得了成功，成功率非常高 B.克隆技术的各个环节有待于进一步改进 C.大多数克隆动物还存在一些遗传和生理缺陷类 的健康问题 D.克隆动物食品的安全性问题仍然存在争议,A,解题思路探究思维误区警示易错分析对克隆与组织培养、试管动物(婴儿)区分不清,纠正训练 试管婴儿、试管苗和克隆羊这三者可以说是现代 生物科技的杰出成果,下列对其生物学原理及技术 的叙述,正确的是()A.都属于无性生殖 B.

10、都利用了细胞工程的某些技术 C.都不会发生基因重组 D.都体现了已分化的细胞具有全能性,解析 试管婴儿的原理为有性生殖,但该过程需要 动物细胞培养和胚胎移植等技术;试管苗是植物组 织培养的结果,体现了细胞的全能性;克隆羊利用 了核移植技术,体现了动物细胞核的全能性。在三 项成果中,试管婴儿培育的第一步是体外授精,而 参与受精的精子和卵细胞在经减数分裂形成的过 程中会发生基因重组,综合以上分析,只有B项叙述 正确。答案 B,知识综合应用重点提示 1.通过“动物细胞培养在实践上的应用检测某有毒物质毒性的大小”的考查,提升“具有对一些生物学问题进行初步探究”的能力。典例分析1.(2009江苏卷,32

11、)动物器官的体外培养技术对于 研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。下图是一个新生小鼠 的肝脏小块培养装置 示意图。请回答下列 问题。,(1)肝脏切成小薄片,这有利于肝脏细胞。(2)气室中充入5 CO2气体的主要作用是。(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长,但 要注意选择抗生素的,以保证抗生 素对肝脏无害。(4)有机物X有毒性,可诱发染色体断裂。利用上图 所示装置和提供的下列材料用具,探究肝脏小块对 有机物X是否具有解毒作用。材料用具：,肝脏小块,外周血淋巴细胞,淋巴细胞培养液,植物 凝集素(刺激淋巴细胞分裂);显微镜,载玻片,盖玻 片,玻璃皿,滴管;吉姆萨染液(使染色体着色),有

12、机物X溶液等。实验过程：在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴 细胞,取4等份,备用。利用甲、乙、丙、丁4组上图所示装置,按下表 步骤操作(“”表示已完成的步骤)。,上表中还需进行的操作是。培养一段时间后,取4组装置中的等量培养液,分 别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中继续培养。一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显 微镜下观察,并对比分析。若丙组淋 巴细胞出现异常,而甲组的淋巴细胞正常,则说明。,解析 肝脏是动物体内最大的消化腺,还有造血和 解毒功能。将肝脏切成小薄片,可使肝细胞直接接 触培养液,有利于肝细胞吸收氧气和营养物质、排 出代谢废物。向培养液中充入5%CO2,有利于维持 培养液

13、的pH。添加抗生素可抑制细菌生长,但不能 用错、用多,否则会伤害甚至杀死肝细胞。答案(1)吸收氧气和营养物质、排出代谢废物(2)维持培养液适宜的pH(3)种类和剂量(4)向乙(或丁)组装置中放置肝脏小块 染色 体形态和数量 肝脏小块对有机物X具有解毒作用,重点提示 2.通过“基因工程和细胞工程有机结合”的考查,提升“把握所学知识的要点和知识点之间内在联系”的能力。典例分析2.(2009山东理综,35)人类在预防与诊疗传染性疾病过 程中,经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原 体为RNA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,其疫苗生 产和抗体制备的流程之一如下图：,请回答：(1)过程代表的是。

14、(2)过程构建A基因表达载体时,必须使用 和 两种工具酶。(3)过程采用的实验技术是,获得的X 是。(4)对健康人进行该传染病免疫预防时,可选用图 中基因工程生产的 所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时,可从疑似患者体内分 离病毒,与已知病毒进行 比较;或用图 中的 进行特异性结合检测。,解析(1)中心法则中,对于少数的以RNA为遗传物 质的病毒,其遗传信息的传递过程需要补充的过程 有RNA的逆转录和RNA的复制的过程,图中过程正 代表的是逆转录的过程。(2)基因工程的步骤是：目的基因的提取 构建 基因表达载体 导入受体细胞 目的基因的 检测和表达,其中构建基因表达载体中需要限制酶 来切割以

15、获取目的基因,同时需要相同的限制酶切 割载体以获取与目的基因相同的黏性末端,再通过 DNA连接酶连接目的基因和载体。,(3)过程是将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的过 程,获得的叫杂交瘤细胞,其具备了瘤细胞的无限 增殖的特性和B淋巴细胞的产生抗体的特性,从而 制备单克隆抗体。(4)本题考查了免疫预防的操作过程,以及欲确诊 疑似患者而采取的方法。本题中提示该RNA病毒表 面的A蛋白为主要的抗原,故而可选用通过基因工 程生产的A蛋白制备疫苗;确诊时为判断该病毒是 否为题目中的RNA病毒,可以进行核酸序列的比对,也可以利用单克隆抗体具备特异性,利用抗A蛋白,的特异性单克隆抗体通过能否特异性结合判断,病

16、毒表面是否有A蛋白的存在,进一步进行检测是否 为目的RNA病毒。答案(1)逆(反)转录(2)限制性核酸内切酶(限制酶)DNA连接酶(两空 可以互换)(3)细胞融合 杂交瘤细胞(4)A蛋白 核酸(基因)序列 抗A蛋白的单克隆 抗体,定时检测组题说明特别推荐 学科内综合题1、7；实验探究题 6。,1.下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解,请据图回答下列问题：(1)请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制 备过程的顺序连接起来。,(2)在单克隆抗体制备过程中,之所以选用B淋巴细 胞和骨髓瘤细胞,是因为它们融合后的杂交瘤细胞 具有、的特性。(3)由图示可看出,单克隆抗体的制备过程运用了 和 等动

17、物细胞工 程技术手段。解析 首先把小鼠骨髓瘤细胞与经特定抗原免疫过 的小鼠B淋巴细胞进行融合获得杂交瘤细胞,然后筛 选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,最后分别在 体外或体内培养杂交瘤细胞,即可获得单克隆抗体。,答案(1)(2)能迅速大量地繁殖 产生特异性抗体(3)动物细胞融合 动物细胞培养,2.2007年诺贝尔生理学或医学奖分别授予美国人马 里奥卡佩基、奥利弗史密斯和英国人马 丁埃文斯。3位科学家的获奖原因是其研究为“基因靶向”技术的发展奠定了基 础。所谓“基 因靶向”技术(人们大都称之为基因“敲除”技术)是指利用细胞脱氧核糖核酸(DNA)可与外源性DNA 同源序列发生同源重组的性质,定向改造

18、生物某一 基因的技术。借助这一从上世纪80年代发展起来 的技术,人们得以按照预先设计的方式对生物遗传 信息进行精细改造。有了“基因靶向”这一高精,度瞄准镜,科学家就可以精确瞄准任何一个基因,使其失去活性,进而研究该基因的功能。请回答下 列问题：(1)“敲除”一种基因需要分两步来完成：第一步 是利用化学“剪刀”,例如用某种酶切除哺乳动物 染色体中有某种功能的基因。第二步是用修改过 的基因取代原有基因。这里的“某种酶”应该是 酶。用修改过的基因取代原有基 因时还需要 酶。(2)假如要“敲除”小鼠的胰岛素基因,请设计出 实验步骤。,给出一种检验胰岛素基因是否被“敲除”的方法。(3)利用细胞工程也可获

19、得可供老鼠移植之用的“敲 除排斥基因”的老鼠,其过程大致如下图所示：促进卵细胞融合最常用的试剂是。,重组细胞培养成胚胎的过程所用的培养基,从物 理性质上看属于,培养基中 至少要加入水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生 素、促生长因子、微量元素和 等 物质,同时要创造适宜温度、pH和无菌条件,其中 需要无菌环境的原因是。,解析(1)限制性核酸内切酶是基因“剪刀”,DNA 连接酶是基因“针线”。(2)“敲除”一种基因需 要分两步来完成：第一步是利用限制性核酸内切 酶切除哺乳动物染色体中有某种功能的基因。第 二步是用修改过的基因取代原有基因。基因探针 可检验目的基因。(3)灭活的病毒或聚乙二醇是动 物细

20、胞融合最常用的试剂。动物细胞培养基的成 分有水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、动 物血清等,需在无菌条件下进行。,答案(1)限制性核酸内切 DNA连接(2)用限制性核酸内切酶切除小鼠胚胎干细胞中的 胰岛素基因,用修改过的基因取代胰岛素基因 用 胰岛素基因探针检验胰岛素基因是否被“敲除”(3)灭活的病毒或聚乙二醇 液体培养基 动 物血清 细菌等微生物生长繁殖快,消耗营养物质 多,同时产生有害代谢产物,毒害动物细胞,3.如图表示用于预防和治疗禽流感的单克隆抗体生 产过程,请回答下列问题：(1)若A细胞是小鼠的骨髓瘤细胞,则B细胞取自 体内的B淋巴细胞,促进d过程的 诱导剂是。(2)假设仅考虑两个

21、细胞的融合,则可形成 种 类型的C细胞,因此需用 筛选出,具有 特点的D细胞用于 培养。D细胞的名称是。(3)在细胞培养所用的培养基中除需要加入糖、氨 基酸、促生长因子、无机盐和微量元素外,通常还 需加入 等一些天然成分。(4)目前注射禽流感疫苗是预防禽流感的一种措 施。决定禽流感病毒在人体细胞中增殖变化的物 质是,而决定其抗原特异性的 物质位于病毒的 上。,解析 解答本题的关键是正确理解单克隆抗体的 制备过程和原理,结合体液免疫的原理,认识到只 有能分泌抗体的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞结合后得 到的杂交瘤细胞才能产生抗体,B淋巴细胞与骨髓 瘤细胞融合得到的细胞不一定都能产生抗体。决 定某一生物具

22、有某一性状的根本因素是该生物的 遗传物质(DNA或RNA)。由单个杂交瘤细胞经过克 隆(无性繁殖)形成细胞群,再由细胞群产生化学性 质单一、特异性强的抗体,即单克隆抗体。当骨髓 瘤细胞与B淋巴细胞进行融合后,两两融合的细胞 有三种类型,即瘤瘤细胞、B淋巴B淋巴细胞、,瘤B淋巴细胞。单克隆抗体的制备过程中还用到 了动物细胞培养技术,在动物细胞培养的培养基中 一般添加动物血清、血浆。禽流感病毒能在人体 内迅速增殖分化,从根本上来说这是由禽流感病毒 的遗传物质RNA决定的。答案(1)感染禽流感病毒的动物或人 聚乙二醇 或灭活的病毒(2)3 选择培养基 既能无限增 殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞(3

23、)血清、血浆(4)禽流感病毒的RNA 衣壳,4.眼虫是一种含有叶绿体的原生动物,此现象引起人 们的探究兴趣。某同学提出问题“动物细胞与植 物细胞之间可以实现杂交吗？”他尝试设计出下列具体的实验方案。结合实验方案 回答：实验原理：根据眼虫的特点,动物细胞和植物细胞 之间在理论上是可以实现杂交的。实验步骤如下：,(1)中选的植物材料细胞中,必须有的细胞器是。(2)过程所用的酶是 和。,(3)过程除了用电激之外,还可以用、等做诱导因素。(4)如果让动植物杂交种批量培养生产,可以用 技术。(5)动植物杂交种细胞是否有细胞壁？。理由是。解析 动、植物细胞最主要的区别是动物细胞无 细胞壁和叶绿体。该实验的

24、原理是根据眼虫的特 点,因此植物材料中应含有叶绿体,由于动植物杂 交种细胞分裂形成的胚胎是在母体子宫内发育,因,此应不含有细胞壁。图中过程是酶解法去壁,应 选用纤维素酶和果胶酶。过程是诱导融合过程,除物理法外,还可用聚乙二醇、灭活的病毒等。答案(1)叶绿体(2)纤维素酶 果胶酶(3)灭活的病毒 聚乙二醇(振荡、离心、生物或 化学因素等)(4)动物细胞培养(5)无 因为胚胎在母体子宫中完成胚胎发育,5.如图为细胞融合的简略过程,请据图回答：(1)若A、B是植物细胞,在细胞融合之前已用 处理,除去了;A、B 到C的过程中,常用的物理方法是,融合完成的标志是。,(2)若A、B是植物细胞,则形成的D细

25、胞还要应用 技术把D培养成植株。(3)若A、B是动物细胞,一般取自,然后用 使其分散开来;从 A、B到C的过程中,常用的但不用于植物细胞培养 的手段是,所形成的 D称为。(4)若该过程是制备单克隆抗体,A为小鼠B淋巴细 胞,在获得此细胞之前,小鼠已被注射了。由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程称为。这种细胞既能无限繁殖,又能分泌。图中B为。,(5)若该过程仍是制备单克隆抗体,在A、B到C的过 程中,所形成的C有 种(只考虑两个细 胞的相互融合),用来培养的D细胞应该是。从中选择出它的方法是 培养。获得D后,常用的培养方法有 和。解析 植物细胞融合前要用纤维素酶和果胶酶去 掉细胞壁,成为原生质体;

26、细胞融合成功的标志是 形成新的细胞壁,杂种细胞通过植物组织培养可培 育成杂种植株;若培养动物细胞,一般取胚胎或幼 龄动物的器官或组织,用灭活的病毒诱导融合效,果很好。用经过免疫产生的B淋巴细胞和骨髓瘤细 胞融合为杂交瘤细胞,它既能无限增殖,又能产生 特异性抗体。(5)小题的第一个空为3种细胞,原因 是已限定了条件“只考虑两个细胞的相互融 合”,则产生AA、BB、AB融合的3种细胞。若没有括 号中所限定的这个条件,则至少有5种细胞形态,除 上述3种外,还有未融合的A、B细胞。答案(1)纤维素酶和果胶酶 细胞壁 电刺激、振动、离心 产生新的细胞壁(2)植物组织培养,(3)动物胚胎或出生不久的幼龄动

27、物的器官或组织 胰蛋白酶 用灭活的病毒诱导杂种细胞融合 杂 种细胞(4)抗原 克隆(细胞培养)特异性抗体(单克隆 抗体)骨髓瘤细胞(5)3 杂交瘤细胞 用特定的选择培养基 培养 基中培养 小鼠腹腔内增殖,6.现有甲、乙两种可能有一定致畸、致癌作用的化 学物质,利用动物细胞培养的方法能够鉴定它们是 否有毒性,并比较二者毒性的强弱。请完成下列实 验报告。.实验材料：小白鼠胚胎。.药品用具：胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动 物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分 裂高倍显微镜照片。,.实验原理：,根据这些变异细胞占

28、全部培养细胞的百分数(以下 称Q值),可判断该化学物质的毒性。.实验步骤：(1)制备细胞悬液 把小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎,转入锥形瓶中,加入胰蛋白酶液处理,使胚胎组织离散成单个细胞,再加入动物细胞培养液,制成细胞悬液。(2)进行细胞培养 取A、B、C三个洁净的培养瓶,。,(3)制作临时装片 当细胞繁殖到大约第8代左右时,同时从细胞培 养箱中取出三个培养瓶,用胰蛋白酶液处理,使培 养的细胞从瓶壁上脱落,再加入动物细胞固定液迅 速杀死细胞,并将细胞固定在不同的分裂时期。静置一段时间后,分别从各培养瓶底部吸取适量 的细胞悬液。滴在与培养瓶有相同编号的载玻片 中央,加12滴适宜浓度的 染 色,35

29、min后,盖上盖玻片,制成临时装片。,(4)镜检和统计 把临时装片放在显微镜下,按照 的顺 序观察,寻找处于 期的细胞,并与 对 比以确认发生上述变异的细胞,同时统计该期变异 的细胞占细胞总数的百分数(Q值)。.实验结果：.实验结论：。,答案.将有毒物质加入细胞培养液后,培养的 动物细胞会发生染色体数量和结构变异(答出有毒 物质使细胞发生变异).(2)分别加入等量的细胞悬液 向A、B两 个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙,并将 培养瓶摇匀;C瓶不作处理,作为对照 把3个培 养瓶放在37(或适宜温度)的细胞培养箱中培养(3)龙胆紫溶液(4)先用低倍镜后用高倍镜 有丝分裂中 小白鼠 正常体细胞

30、有丝分裂高倍显微镜照片.甲、乙两种化学物质均有毒性,且乙的毒性比 甲的毒性大,7.2008年2月26日,广西水牛研究所科研人员利用克 隆胚胎冷冻技术,使一头杂交母水牛顺利产下一头 冷冻胚胎移植的体细胞克隆雌性水牛犊,取名“盼 盼”。它的出生经历了一个严密复杂的科学操作 过程：,(1)当克隆牛“盼盼”性成熟后进行减数分裂时,其初级卵母细胞内可以形成 个四分体。(2)、过程主要采取 技术才能 获得细胞群或囊胚,此时在培养液中常加入的物质 有葡萄糖、氨基酸、维生素、和 等。(3)过程中,诱导形成重组细胞常见的方法,除电 激融合外,常见的还有。(4)科研人员获得的耳纤维细胞取自于1日龄的河 流型摩拉水牛,原因是此时获取的细胞、。,(5)根据项目专家介绍,水牛克隆胚胎冷冻技术的 研究成功,有利于水牛克隆技术的推广应用,其重 要意义在于。答案(1)25(2)动物细胞培养 无机盐 动物血清(3)灭活病毒(或聚乙二醇)处理(4)分化程序低 分裂能力强(5)便于胚胎的异地运输,可以长时间保存优良种 水牛的遗传资源(答案合理即可),返回,