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1、,妇科感染常见病原菌及检测方法,妇科感染常见疾病,阴道病/阴道炎尿道炎子宫颈炎盆腔感染 子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症,妇科感染实验室检查的意义,很多妇科感染症状、体征有很多相似之处。临床诊断本身既不敏感，也不特异。实验室诊断可以：明确病原微生物，使治疗更具针对性；提高患者治疗依从性；使患者更有可能遵从性伴侣告知。,病例一,患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符,外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。考虑什么病？进一步做什么检查？,阴道炎,正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌及厌氧菌，形成正常的阴道菌群。任何原因将阴道菌群生态平衡打破，可形成条件致
2、病菌，引起阴道炎。,阴道粘膜生态系统,阴道炎,临床常见有：细菌性阴道病、念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎。,吴文湘,廖秦平.阴道炎的诊治进展J.中国实用妇科与产科杂志,2009(12):949-952.,阴道炎相关病原实验室检查,病例1,患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符,外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。,医生：根据病史及临床表现可初步诊断为阴道炎。取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送检，以明确病原学诊断。,念珠菌性阴道炎,主要病原菌为：白色假丝酵母菌 约占80%-90%光滑假丝酵母菌 热带假丝酵母菌 近平滑假丝酵母菌,约占10%-20%,念珠菌性阴道
3、炎的实验室诊断,1.pH 4.5,2.盐水湿片+10%KOH,3.培养,4.DNA杂交探针,盐水湿片和10KOH,检出孢子及假菌丝即可确诊。,培养,复发病例或有症状，但盐水/KOH 镜检阴性时考虑培养。,DNA 杂交探针,不需要活的微生物需要特殊转运管仅针对白色假丝酵母菌FDA 批准仅用于有症状女性阴道分泌物,细菌性阴道病(BV),阴道正常菌群（乳酸杆菌）减少，而其他条件致病菌大量繁殖。主要致病菌有：阴道加德纳菌、动弯杆菌、普雷沃菌等厌氧菌和支原体等。,Fredricks D N,Fiedler T L,Marrazzo J M.Molecular identification of bact
4、eria associated with bacterial vaginosis.J.New England Journal of Medicine,2005,353(353):1899-911.,阴道加德纳菌,为革兰阴性或染色不定的球杆菌，有细胞壁，无鞭毛，不形成荚膜和芽孢。兼性厌氧最适温度：时35-37 最适PH：,阴道加德纳菌,革兰染色：大小：0.5m 1.5-2.5m形态：具有多形性，呈小杆状或球状排列：呈单个或成双排列,动弯杆菌,为厌氧菌革兰阴性弧菌形态：呈弧形，两端尖细排列：呈单个或呈双排列,细菌性阴道病的实验室诊断,1.pH 4.5,2.盐水湿片+10%KOH,3.定量革兰染色N
5、ugent评分,4.DNA杂交探针,线索细胞,盐水湿片,线索细胞是诊断BV的最敏感特异的指标。,胺试验,将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴10KOH，可闻到氨味或鱼腥样气味，即胺试验阳性。,定量革兰染色 Nugent评分,定量革兰染色是BV 诊断最特异的检查。,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌革兰染色,定量革兰染色 Nugent评分,阴道加德纳菌革兰染色,定量革兰染色 Nugent评分,动弯杆菌革兰染色,定量革兰染色 Nugent评分,线索细胞革兰染色,定量革兰染色 Nugent评分,分数解释标准：0-3 分 正常 4-7 分 中介 7-10 分 细菌性阴道炎,定量革兰染色 Nuge
6、nt评分,乳酸杆菌0分，上皮细胞周围非常清楚。评分：0分,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌0分，少量杂菌，见白细胞和菌丝。评分：1分 诊断：BV阴性，但诊断为VVC,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌2分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分，动弯杆菌 1分。评分：6分 诊断：BV中间型,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌3分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分，动弯杆菌 4分。评分：10分 诊断：BV,阴道毛滴虫,阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体为 8-45m，呈梨形或椭圆形，无色透明，大小为白细胞的2-3倍。,毛滴虫性阴道炎的实验室诊断,1.pH 4.5,2.盐水湿片,3.快速抗原检查,4
7、.DNA杂交探针,5.培养,6.核酸扩增实验,盐水湿片,革兰染色,快速抗原检查,检测阴道毛滴虫特定的抗原已有商品化试剂最优试验条件并不需要活的微生物,培养,核酸扩增试验,APTIMA Trichomonas vaginalis(ATV)test（Gen-Probe,Inc.San Diego,CA）是近期FDA 批准的检查，既可用于女性TV 的筛检，也可用于诊断。可以使用多种标本类型。一些实验室也可通过比对，验证自己的PCR方法。,病例二,患者，女性，40岁，已婚，阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。考虑什么病？进一步做什么检查？,子宫颈炎
8、,子宫颈可因各种致病因素的侵袭而发生炎症，有急性和慢性两种。,尿道炎,是指尿道黏膜的炎症。多为致病菌逆行侵入尿道引起。,尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查,尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查,病例二,患者，女性，40岁，已婚，阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。,医生：根据临床表现初步诊断为宫颈炎。取宫颈内拭子，嘱病人立即送检（注意保温），以明确感染病原体。,淋病奈瑟菌,革兰染色 为革兰阴性双球菌，似肾形或咖啡豆状，常成双排列，凹面相对。急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细胞内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外。简便、快速，可做出初步诊断。
9、仅对男性患者进行涂片革兰染色。,淋病奈瑟菌,细胞内革兰阴性双球菌对GC 特异性达95,细胞外革兰阴性双球菌对GC 特异性达10-29,培养,诊断淋病的重要手段接种到选择培养基，置于36、含5-10%CO2，湿润环境中培养。如果床边直接接种标本到选择培养基，加CO2 药片形成气体环境，培养敏感性会更好。,培养,初代培养生长缓慢，24小时后可形成灰色/湿润、半透明的小菌落（直径0.5-1mm）。氧化酶阳性、触酶阳性、葡萄糖产酸试验阳性且仅分解利用葡萄糖。,图片by陈东科,核酸扩增试验,已有商品化试剂盒。优点是快速、准确，缺点是试验设备要求高。淋病奈瑟菌DNA 在感染成功治疗后，在标本中仍可保留3周
10、之久，所以不能作为治疗评估指标。,杂交探针,目前FDA 已有批准的GC的杂交试验试剂盒。不可针对尿标本。,病例三,病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛，化脓性宫颈分泌物。考虑什么病？进一步做什么检查？,盆腔炎,盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾病的总称。包括：子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症 盆腔腹膜炎,盆腔炎致病菌,盆腔炎,外源性病原体,内源性病原体,主要为性传播疾病病原体：淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、支原体等,来自于原寄生于阴道的正常菌群，包括：需氧菌和厌氧菌,内源性病原体,需氧菌及兼性厌氧菌：金黄色葡萄球
11、菌、链球菌、大肠埃希菌、阴道加德纳菌等厌氧菌：脆弱拟杆菌、消化链球菌、普雷沃菌、真杆菌等 感染特点：容易形成盆腔脓肿、感染性血栓静脉炎，脓液有粪臭并有气泡,盆腔炎相关病原实验室检查,病例三,病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛，化脓性宫颈分泌物。,医生：根据临床表现初步诊断为急性盆腔炎。进一步送检至少一套血培养，抽取脓肿置于厌氧容器尽快送检，并取宫颈内拭子送检，必要时取子宫内膜活检，以明确感染病原体。,盆腔炎相关厌氧菌培养流程,分离培养,挑取菌落,需氧培养,厌氧培养,厌氧培养,生长,不生长,生长,专性厌氧菌：做第二
12、次耐氧试验,形态染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱,厌氧（+）,需氧（-）,兼性厌氧菌,标本,肉眼观察染色镜检,直接涂片染色镜检,在接种时做涂片，革兰染色并镜检：观察脓细胞的有无及特殊情况，细菌与细胞之间的相关性。观察有无细菌，微生物的类型和大概的数量以及有无芽孢、形状和位置、着色及菌体特征。大致推断微生物的种类，如梭菌、放线菌、拟杆菌、消化球菌和消化链球菌等。,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,拟杆菌、普雷沃菌属,产气荚膜梭菌，破伤风梭菌,双歧杆菌属，真杆菌属乳酸杆菌属，放线菌属,消化链球菌属，消化球菌属,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,革兰阴性杆菌，两端钝圆着色深，中间着色浅不均匀，且
13、有空泡，长短不一拟杆菌,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,革兰阳性粗短两端钝圆杆菌，无芽孢，中性粒细胞也很少且变形破碎，标本来自战伤或肢体严重肿胀者产气荚膜梭菌,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,革兰阳性杆菌，菌体有分枝，呈棒状或栅状排列放线菌,革兰阴性厌氧菌鉴定（CLSI M35-A2）,革兰阳性厌氧菌鉴定（CLSI M35-A2）,商品化的鉴定试剂,我们使用的是商品化的厌氧菌鉴定卡API 20A和ANC,病例三,该患者脓液涂片见革兰阴性杆菌，染色不均，两端圆而深染，中间不着色或染色较浅，似为空泡。,病例三,脓液培养：在厌氧血平板上生长良好，形成圆形、微凸、光滑、边缘整齐、半透明、灰白色，不溶血的菌落。需养平板上不生长。,病例三,API鉴定卡鉴定为脆弱拟杆菌,谢谢!,
