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1、复方树莓酒对高脂饮食喂养的WISTER大鼠肝脂肪变性保护作用的初步研究 张明，刘明，傅青松，夏玉军（青岛大学医学院，山东，青岛，266017）【摘要】目的 观察复方树莓酒对高脂饮食喂养的Wister大鼠肝脂肪变性的保护作用。方法 取Wister大鼠30只，其中正常对照组10只，给与正常饲料喂养；高脂饮食组10只，给与高脂饲料喂养；高脂饮食并复方树莓酒灌胃组10只，在给与高脂饲料喂养的同时，每天复方树莓酒1ml灌胃。连续喂养5周后，将动物用乌拉坦腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，测其血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等含量；取部分肝组织制作病理切片，HE染色观察肝脂肪变性情况。结果 与正常对照组比
2、较，高脂饮食组、高脂饮食并复方树莓酒灌胃组大鼠体重、血糖、血浆中的TC、TG等普遍增高，高脂饮食组升高最为明显；光镜下观察，正常对照组肝细胞形态、结构、排列正常，高脂饮食组、高脂饮食并复方树莓酒灌胃组组则可见多处脂质沉积，但以单纯高脂饮食组为重，与生化检测结果一致。结论 高脂饮食饲料可导致大鼠脂肪肝；复方树莓酒对高脂饮食喂养的Wister大鼠肝脂肪变性具有保护作用。【关键词】高脂饮食；大鼠；肝；脂肪变性；复方树莓酒；保护作用。随着大众生活水平的提高和生活习惯的改变，人们越来越处于高脂肪高热量食物的包围之中。肝脏是脂肪代谢的主要场所，长期高脂膳食会导致肝细胞发生脂肪变性，非酒精因素引起的脂肪肝的
3、发病率呈逐年上升趋势，且发病年龄明显趋于年轻化，这已成为全球性的公共健康问题。树莓为蔷薇科悬钩子属植物，树莓浆果富含多种维生素、SOD、花青色、鞣化酸等极其珍贵的营养成份和药物成份。本实验试图通过高脂饮食建立肝脂肪变性的动物模型，验证以树莓浆果为主料的复方树莓酒对高脂饮食环境下肝脂肪变性的保护作用。一、 材料与方法1.1实验动物 Wister大鼠30只，购自青岛市药检所（图1）。图1. Wister大鼠1.2 饲料配制 普通喂养饲料购自青岛市药检所；高脂饲料配制：10%猪油+10%蛋黄粉+4%胆固醇+1%胆酸+75%普通饲料1（图2）；复方树莓酒：由烟台沁园春生物技术发展股份有限公司提供。图2
4、.自行配制的高脂饲料1.3 动物分组 正常对照组10只，给与普通饲料喂养；高脂饮食组10只，给与高脂饲料喂养（图3）；高脂饮食并复方树莓酒灌胃组10只，在给与高脂饲料喂养的同时，每天固定时间复方树莓酒1ml灌胃（图4）。 图3. 大鼠喂养 图4.复方树莓酒1ml灌胃1.4 动物处置 连续喂养5周后，将动物用乌拉坦腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，测其血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等含量；取部分肝组织制作病理切片，HE染色观察肝脂肪变性情况。二、结果2.1 大鼠体重比较大鼠喂养过程中不同时间点称重(图5)，结果见表1.正常高脂树莓图5.不同组大鼠 表1. 不同时间点大鼠体重（mg, XSD）初
5、始 一周末 二周末 三周末 四周末 正常组 221.451.87 233.492.68 241.532.84 250.533.17 280.752.76高脂组 220.361.56 271.634.82 302.964.43 351.453.57 375.533.64树莓组 222.121.48 241.433.25 280.453.37 305.453.79 320.672.83以高脂饲料组体重增加最为明显，树莓酒组次之，三组间差异有显著性（P0.01）2.2 血生化指标连续喂养5周后，将动物用乌拉坦腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，生化检测，结果见表2，3.表2.大鼠血糖变化(mmol/L, X
6、SD）正常组 高脂组 树莓组6.393.24 10.103.85 8.613.51以高脂饲料组为最高，树莓酒组次之，三组间差异有显著性（P0.01） 表3.大鼠血甘油三脂（TG）等指标变化(mmol/L, XSD）甘油三脂(TG) 低密度胆固醇(LDL) 高密度胆固醇(HDL) 正常组 0.350.14 0.6350.21 0.8550.26 高脂组 0.430.17 0.6870.22 0.6970.31 树莓组 0.330.15 0.6470.27 0.7870.28 TG以高脂饲料组为最高，树莓酒组最低，三组间差异有显著性（P0.05）； LDL以高脂饲料组为最高，树莓酒组次之，三组间差
7、异有显著性（P0.05）；HDL以正常组最高，树莓酒组次之，三组间差异有显著性（P0.05）.2.3 组织学检查取部分肝组织，常规石蜡包埋，制作病理切片，普通HE染色，光镜下观察肝脂肪变性情况，正常对照组肝细胞形态、结构、排列正常；高脂饮食组、高脂饮食并复方树莓酒灌胃组则可见多处脂质沉积，但以单纯高脂饮食组为重（见图6，7，8）。图6. 对照组HE染色，200倍显微镜下图像，空白为脂肪图7. 高脂饮食组HE染色，200倍显微镜下图像，空白为脂肪图8. 树莓组HE染色，200倍显微镜下图像，空白为脂肪三、讨论3.1 高脂饮食与肝脂肪变性一般而言，在病理学的意义当中，当肝细胞内的脂质超过肝湿重的5
8、%，或组织学上每单位面积有1/3 以上的肝细胞脂肪变性时，称为脂肪肝。通常情况下，脂肪肝分为酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝。前者有酗酒引起，本文不再加以讨论；后者最早由Ludwig在1980年命名，指与过量饮酒无关的临床综合征，主要病理改变是肝细胞弥漫性脂肪变性和脂肪堆积，随病情的发展可表现为单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纤维化和脂肪性肝硬化等。毋庸置疑的是，较长时期的高脂饮食几乎可以肯定引发肝脂肪变性。要鹏等1证实，适当的高脂高胆固醇配比饮食可在四周内快速造成实验动物的肝脂肪变性。本实验中单纯高脂饮食组大鼠在第五周时，组织学既显示肝脏明显的脂肪变性征象。脂肪肝的成因非常复杂，牵涉到多个代谢途径。
9、与高脂饮食引起胰岛素抵抗、介导脂肪酸进入肝脏细胞的结合蛋白和转运蛋白异常、脂肪酸代谢关键调控因子及其控制的关键酶功能发生异常、脂质过氧化等多信号多因素，均可造成脂肪酸代谢紊乱，脂质在肝脏异常累积。 3.2复方树莓酒对高脂饮食喂养的Wister大鼠肝脂肪变性的保护作用树莓又名红莓、托盘，学名“覆盆子”。果实为空心聚合果，多为红色，也有黑色、紫色、黄色果实。在北温带、亚热带分布广泛。蔷薇科悬钩子属亚灌木，上个世纪盛产于北美、欧洲。进入21世纪，智利、中国成为新兴产业国。树莓是天然鞣花酸含量最丰富的抗癌性食物；是天然超级抗氧化剂花青素、SOD含量最高的抗氧化食物之一。国际营养大师，美国营养与减肥专家
10、、全球销量第一的权威营养专著地球上最健康的150种食材的作者乔尼.鲍登教授认为：树莓（覆盆子）是世界上最好的花青素和鞣花酸来源之一。除了有显著的抗氧化功能，还可导致癌细胞自体消亡，却不影响正常细胞。覆盆子花青素具有抑制坏氧化酶cox的能力，可治疗关节炎，并且没有副作用。哈尔滨医科大学刘明教授的研究证实：覆盆子鞣花酸可有效治疗原发性肝癌。日本名古屋市立大学岗岛研二教授发现覆盆子所含羟基苯基丁酮可促进毛发生长。日本熊本县立大学铃松教授的研究证实，覆盆子酮能促进人体基础代谢，降低皮下脂肪含量，有助于防止肥胖和降低高血脂。美国威斯康辛大学、加州大学戴明思分校的研究报告指出，覆盆子的鞣花单宁酸、生育三烯
11、酮可避免低密度脂蛋白固醇氧化，有利于防治高血脂和心脏病，降低动脉硬化的伤害。美国哈佛大学的研究报告指出覆盆子鞣花单宁酸，具有类疫苗的功能，可抑止幽门杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌，防治肠胃疾病。芬兰科学院的研究证实：经常食用覆盆子是防治妇女泌尿道感染的最好方法。还有强健子宫壁，松弛子宫与治疗小肠痉挛及减少经血的功能，也能治疗坏疽及促进指甲、头骨、末梢及皮肤的健康。韩国中央医科大学的研究表明：覆盆子所含是美容肤的最佳成分，对氧化类脂的形成，消除一氧化二氮以及防治紫外线诱发的皮肤红斑、抑制、排斥黑色素形成的作用，比常用的熊果苷更强更快。2011年墨西哥健康科学研究所宣布，该所的实验证明，食用覆
12、盆子果粉可大大减少尼古丁危害。对二手烟受害者，是最有效的食品性防护。树莓酮是树莓中的主要芳香类化合物，结构与具有减肥和改变脂质代谢功能的辣椒素和辛弗林相似。Morimoto C等学者研究发现，树莓酮可预防高脂饮食诱导的小鼠体重以及肝脏和内脏脂肪组织（附睾，腹膜后，肠系膜）重量的增加，也可减少肝脏甘油三酯含量，其作 用机制可能在于树莓酮提高去甲肾上腺素诱导的脂肪细胞分解。孟宪军等研究也发现，树莓酮对高脂饮食喂养的单纯性肥胖大鼠具有减肥作用，即树莓酮通过调解糖脂代谢紊乱、改善瘦素抵抗和胰岛素抵抗等综合作用来降低肥胖大鼠体重。日本学者发现，24名健康女性每天服用200mg树莓酮，连续服用6 周，然后检测其体内的脂肪含量。结果表明，每个实验对象的基础代谢量平均提高了8.9%，体重人均减少了1.3%，体内脂肪含量平均下降约1%，腰围平均 减少了1.5cm，但臀围没有变化，认为树莓酮减少内脏脂肪的效果比其促使皮下脂肪减少的效果更加明显。复方树莓酒是以树莓为主要原料炮制而成，尽管其中所含有的树莓酮、花青素、SOD等生物活性成份的具体数量尚未得知，但在本研究中，我们观察到辅以一定量的复方树莓酒，可以有效降低实验动物高脂饮食环境下所致的肝脂肪变性，其具体的生物学过程尚需进一步探讨。 参考文献：（略）
