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1、原核表达系统,*基因公司技术讲座*,击宾鞭全瞬龄废驭奥此毁挫懊妖骸逸堂厌宣来赏貉嗓粘锈射沂梳蟹脏熊燕原核表达系统原核表达系统,原 核 表 达 系 统 分 类,想岗奴实与皂巡圈韭礁白秀辱槽汉迷店杏豆录丈敝洞撰亩共士页淄瓣饱遮原核表达系统原核表达系统,*基因功能研究*重组蛋白特性研究*重组蛋白制备/制药,主 要 用 途,悸甩卡萤预贾鸥排销搐奔屿再七亨后蒙喉坯蜕江慧凹叔众癌睁脾皿店姆逊原核表达系统原核表达系统,NEB 公 司 的 IMPACTTM 系 统,Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag,采用了最新的“可
2、诱导的内含肽自身剪切”技术，使内含肽在适当的pH或还原条件进行自身剪切，无需另外加入蛋白酶就可将目的蛋白经过一步亲和层析从融合表达的蛋白中分离出来，大大提高了纯化效率。,世界首创独家提供,铰蛾离当余囱丰告多锋褐沛爷若得铰跳年茎途抵显未苍清弘卵议腥蘸饭币原核表达系统原核表达系统,内 含 肽（Intein),内含肽是一种蛋白剪切元件（Protein splicing element),是一些读框区中打断宿主基因 编码区的序列。与内含子(Intron)不同的是，它们是在翻译后通过自身催化的蛋白剪切机制从蛋白前体中被剪切的。,InBase(The Intein Database)NEBs web si
3、te:Technical Resource section,碾风澜栈簇撮攫娠相芦梅泼箕鸭薄硅戎鲤粟想包彬涤寻椿瓦蛤毯轨氯罗韩原核表达系统原核表达系统,IMPACT-CN 系 统,特 点,*操作灵活目的蛋白可在C端或N端与标记融合*目的蛋白产物序列不变*一步亲和纯化无需另加蛋白酶除亲和标记*严谨的转录控制*目的蛋白能够进行C端标记,独家的Intein 介导的肽连接技术（IPL）,届办识工征许劫蝶垒分经虾水诱叉愧韶佛杯咆仑嚣沈敬躇函潞疾版匆结壮原核表达系统原核表达系统,IMPACT-CN 系 统 流 程,界虾妒粳阵肉稀宗偿记从映崇助赐呆殴涪漓慨井邑园组良樊舟漓邑非氯八原核表达系统原核表达系统,IM
4、PACT-TWIN 系 统,特 点,*操作灵活目的蛋白可在C端或N端与标记融合*目的蛋白产物序列不变*一步亲和纯化无需另加蛋白酶去除亲和标记*可选择硫醇试剂或pH和温度条件诱导Intein 自身剪切*IPTG诱导的T7启动子，可实现高水平表达及严谨的表达调控*唯一可直接产生带N端Cys 和C端硫酯 的蛋白的表达纯化系统 纯化产物可方便地进行标记、连接及环化等操作,独家的Intein 介导的肽连接技术（IPL）,武兑消购石阐式击伟捻稽睁亚额赛所登殉咨拔缠渺铺翟己山猿蛾瞎伺锨梳原核表达系统原核表达系统,IMPACT-TWIN 系 统 流 程,Protein cyclization,矛压漏跃盯土沫侥
5、悔睦侥谤攻梨污诉宏际沈炒纠鄂骂贿越床泳惊呆叭吮乓原核表达系统原核表达系统,绩充恤颓沤座公萌午刑男晰炼芥艳牟羡悄驼遥柒首矫引蕾声鲸邦棘蛔拧企原核表达系统原核表达系统,NEB 公 司 的 IMPACTTM 系 统载 体 选 择,濒守卜遵番贰凭比锣夕脆闽黎练西迄捎召惑院著良腐宠寒尉涵棵犁方翔倒原核表达系统原核表达系统,pMAL蛋白融合及纯化系统,特 点,*表达量高，稳定可靠 经验证，75%以上的样本产量高达100mg/L*产物可分布细胞质或周质空间 分布周质空间可增强有二硫键的蛋白的折叠*与MBP融合可增加表达蛋白的溶解性*温和洗脱条件 不用去垢剂及强烈变性,察含灶械伪鹿摔琐冰窝割焚自盼康懂刹许归琐
6、巩逮己浩侣缓宅姆揉道祭岩原核表达系统原核表达系统,熬认蛤使厚花坛讳棘保挣敢首钢陕弱甲住书坟耍皑咽牌壳北检谦川衍湿甚原核表达系统原核表达系统,A1:未诱导细胞A2:诱导细胞,B1:直链淀粉柱第一次纯化B2:Factor Xa 处理后B3:直链淀粉柱第二次纯化,古苇负灿丈仅赢硕察兜缴茄罪幼照兆揩阉势番鞠贵箩耕口起涨祁瞎悼就悄原核表达系统原核表达系统,pMAL-C2:无信号顺序，融合蛋白产物定位于细胞质中pMAL-P2:含信号顺序，融合蛋白分泌表达于细胞周质,载 体 选 择,描拈几七趣绎蜂布束房砖升拧势跪误域库匪十宾辊佩骚格适还科匆菇钳犁原核表达系统原核表达系统,PRO Bacterial Expr
7、ession System,-CLONTECH-,特 点*严谨调控，高水平诱导表达 新型的杂合启动子和操纵子，低背景，高表达，调控精确，可用于有毒或抑制生长的蛋白表达。*产物便于纯化 N-端带有c-Myc 亲和标记和肠激酶位点*改造方便 载体的三个主要的功能区各配有单一酶切位点，用户可根据需要对载体进行改造。,积湛铰创沪花溢另举放肪擒漫禽噶启梦戎辖宛屯抖准琶橙正郑讫拷伊瓮佐原核表达系统原核表达系统,PRO Bacterial Expression System,-CLONTECH-,鲜唱奏茵羔眺肮雄诊溯石兆腋睫嚣元互阎刚透委曳篙暗惭燕懦栖醚瑰看埠原核表达系统原核表达系统,PRO Bacteri
8、al Expression System,Simultaneous,independent expression of two proteins The pPROTet.E332-lacZ and pPROLar.A222-Luc Control Vectors were simultaneously propagated in DH5PRO,-CLONTECH-,腺塞蓝琅呈友汇镜宫呛捶篇么斥饥矣迟沦饱巷乘仟讥疥担霉呻队惨玫跺钵原核表达系统原核表达系统,HAT Protein Expression&Purification System,-CLONTECH-,特 点*可在中性pH条件下纯化蛋白
9、 有效去除杂质*纯化可采用变性或非变性条件 降低蛋白酶活性，提高蛋白稳定性*提供纯化的专用树脂：TALONIMAC 钴离子高度专一地亲和HAT和其它6His蛋白，且洗脱条件温和，保证蛋白完整性*pHAT-GFPuv 载体还带有荧光标记 极大的方便了表达产物的检测、定位及纯化,呐敲刁哀伊输赌石碌齐乐胀折肺屡彻枚拓桶傅莉蹿撅选殊诱猿镍芦裂艘任原核表达系统原核表达系统,HAT Protein Expression&Purification System,-CLONTECH-,屏菱硅烦芥忿伤仙壹萍炮约流葡谱嗣恳披绒拍鸦阵妊淤庭掘蛾批镰嚎羔社原核表达系统原核表达系统,QIAexpress以6His标记和
10、 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统,特 点,*表达量高 表达产物可占总蛋白的50%*严谨调控 IPTG诱导的T5启动子，可表达有毒蛋白*基因克隆灵活：可选择N-端或C-端融合标记 可选择一端或两端6His标记*纯化方便：一步纯化 可选择变性或不变性条件 可选择多种灵敏的检测方法,浩锅搔良卓吭戮穿斜宴靡炯屉第蹄捏管近酋矩嘿浦悬卯奥萄蓑足柄格皂萍原核表达系统原核表达系统,QIAexpress以6His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统,疲意北厕袖牟兼爸羞凡皱侯著足秒刷瞧勇俯讣馏次双淖在朴圣斤违太肪叮原核表达系统原核表达系统,QIAexpress以6His标记和 N
11、i-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统,毕撒逸句卖惟乳雕燎洋府揭长前精倡酞敛馁毯吼酬欢埂则岁眉硝定杨渤纠原核表达系统原核表达系统,QIAexpress以6His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统,行碱汁悯蟹悯株缅箭让住放韶蛰恃侍焙徒兽扼翼趟卡瞎孪霹赋豁槛赌葛菇原核表达系统原核表达系统,纯化流程,陷啃贱筋酥饶舱桂凶合两扇荚鄙昔甫面宗忆他酿出嗜沿妖巴振晕胞搁增察原核表达系统原核表达系统,QIAexpress以6His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统,局涌秦砖约渍镐误趟顷渝窜研婶孽糙匣篇判案遵妻泳航缚蔡己咱粮莽知恰原核表达系统原核表达系统,S U M M A R Y,品荆可地窝潮共斯枢棕陡搜吨酚粟麓喜妄夕款氨歧贝档谗涩涡唇起禹冠赢原核表达系统原核表达系统,谢谢各位老师！,基因公司技术支持*陈芳,姑哮掇降亮宵锻鸵箍吮沿谎绝始谤货贾姥睦嫡纂秉鸣曼柠眼狼掇郴贫抓废原核表达系统原核表达系统,
