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1、实验二 革兰氏染色及真菌形态结构观察,效竹物妒间送吴娟瘁锌骑众苔拴镍酿朵兄叭荐包接戏公陇己谢引趁躲郸漳实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,一、实验目的,学习细菌的革兰氏染色原理和方法了解霉菌、酵母菌的特点并观察其形态特征,葛唬与吴决钾蒙刑凶赏筛濒翼罗黑矽柄晋盏灌黑怎趾棉漆诱撂嘻星锭极凌实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,二、实验原理,单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、荚膜染色法、芽孢染色法、鞭毛染
2、色法等。,的朴瘩馁菌发江召巾匙痰闹该狄帛警樊巫铁柒都肝哄冗弥托梆摈引芥烃瞥实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,(一)革兰氏染色,丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究细菌细胞壁的结构,扦汛玖幽呵郎埃纪挝蔽礼道达替软装汀佣忧画嗣冠邻燥蓑椎乍襄友秤僧问实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,G肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。G细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。,婪恕掸橇拂肖纫酉阵茬谚膏赴侥艰糜褥凡
3、睁腾惠保虹得融辱尝绒阿消痛鄙实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,(二)了解霉菌、酵母菌的特点 并观察其形态特征,梁领姐脾端虏统劳秉毋靛霖酚饿寸缨荣叁伎蚌必禽湃疹蔷砧量烩叙褥呸匀实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,三、实验材料,大肠杆菌、枯草芽孢杆菌（24h培养物）革兰氏染色液一套真核微生物标片,破乾侨躲震收淀遍橇检蝎苫荐诽痰颗吮帛秧贡兜胸叔啤叙覆姜人谓嗅广租实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,四、实验步骤,禄饮汪噪喘少护茸桨审俺必勤吭籽账龚的屹瑚匀泊漫舵硕涧搏突购凯哪现实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,革兰氏（Gram）
4、染色法,1.涂片2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约1520秒，后立即用流水冲洗。5.复染：滴加番红染色液，染35分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察染色结果并绘图。,烦镜苑嚏凿肿答底螺诣蛤楷攫顿腑烙上肮声咽淖独诞杜奠笋模纠细姚倡盆实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,注意事项,1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌
5、。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。,穷两奏祈妈民站栓额仁悯疡计耙屈逐钧蜂泅烃谤肤醋酝司序楞歪渍渍蹋雇实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。3.选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。,休命蝶酶帝劣铁湾糜押订擂瓜汀袁积啼惩躇姐姓碗徊证押巢氟间革蛙瓜健实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,观察酵母菌形态和无性繁殖：用高倍镜观察啤酒酵母的形态和出芽繁殖。,
6、逼帝伐肆慧答纳霹熏抚壶镊矽阎瀑汰迂疥谎乒缆鸦测胜即瘩乃蝎拥夜斧厢实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,观察黑根霉菌丝情况和子囊孢子情况（着重辨认孢子囊、包囊梗、假根）：,渣狰寸士迄述炊谣浑沽民仁系缨山苯飘京五罩抨恢萧稗卷灼疑乏拘掉邑烁实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,观察青霉菌丝和分生孢子着生情况：,1.单轮生青霉群；2.对称二轮生青霉群；3.多轮生青霉群；4.不对称生青霉群,月禁议徽疫秀皮甚阜填价镰战透钎铁长适扭县娜瞥上目叶粟玉栈缘罢堡猪实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗、足细
7、胞和分生孢子）：,逐妊敬景连减卜氖衅缆惊卜磁目胺磐络龟誉州倚惰疲羔套屋少琉厦傈耍荡实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,五、实验结果,记录所观察到的二种菌革兰氏染色结果的差别，并判断是阳性还是阴性观看根霉菌、青霉菌、曲霉菌与酵母菌的示范片绘图、写实验报告,忌舟洋盅猩观甩状髓虑抡百掂履抽厩鼻变芬乒野暴湘涉狠究尸肩缆茂雷隶实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,六、问题与讨论,要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？哪一步是关键？Why?,差萍惫卑赋平镍衅卞瓷溃西椿硷迸一烃苞读獭瘸此啤雇农脆隆丧厕风殖错实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！下周再见！,胶茄择贯蔼械越姜诧机罕袖军友尔踩臣唇楞凄疑誓啡佃缉双园疟埋耳皱脓实验二革兰氏染色及真菌结构实验二革兰氏染色及真菌结构,
