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1、专题2 微生物的培养与应用,课题2:土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,【课题目标】,研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。,【研究对象】,土壤中能分解尿素的细菌,【达到目的】,（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 样的细菌,【研究思路】,（一）筛选菌株,原理：,人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。,回答：1、在该配方中，为微生物生长提供碳源和氮源的是什么物质？2、绝大多数的微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，请分析该培养基是否对微生物有选择作用？如果有，是如何
2、进行选择的？,葡萄糖、尿素,有选择作用，,选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,【统计菌落数目】,常用方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法，还可以用过滤膜法,1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）,原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表 面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。,为了保证结果的准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。,计算公式：每克样品中的菌落数=（某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
3、涂布平板所用稀释液体积）稀释倍数,设置重复组，目的是增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1ml接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为是结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布培养，计算出菌落平均数,操作,2、显微镜直接计数法,（1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。（2）方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个（或16个）
4、中格，每个中格再被分成16个（或25个）小格，每个计数室都由400个小格组成。（3）操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数45个中格中的细菌数，并求出每个小格所含的细菌数，再按计数公式求出每毫升样品中所含的细菌数。（4）计算公式每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数X400X10000X稀释倍数（5）缺点：不能区分死菌与活菌。,3过滤膜法,以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。,思考题,1.想一想，如何从平板上的菌落数推测
5、出每克样品中的菌落数？,答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。,A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同；二是由于培养基污染或操作失误。,（三）设置对照,究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。,另一种方案：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,实验方案有两种,一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,四、实验案例,实验的具体操作步骤如下:1.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。,土壤中某样品细菌的分离与计数,
