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1、1,南京大学医学院附属鼓楼医院顾光煜,全自动生化分析仪基本知识与工作原理,2,一、自动生化分析仪的分类,根据反应装置：连续流动式、离心式和分立式根据反应介质：液相化学、干式化学根据反应通道：单通道、多通道根据自动化程度：全自动、半自动 根据仪器的复杂程度：小型、中型和大型根据分析系统试剂开放程度：封闭系统、开放系统,3,1.连续流动式生化分析仪,比例泵空气分段透析器管道式，携带污染,4,5,2.离心式全自动生化分析仪,几乎“同步分析”随机任选式（早期的必须按项目顺序）比色杯人工清洗？（一次性）,6,3.分立式生化分析仪,目前使用生化分析仪主要此种类型。比色杯 袋式仪器可以自动制作比色杯 比色杯
2、可以兼作反应杯 比色杯不能作流动比色池（半自动）,7,4.干式生化分析仪 干片分：扩散层、试剂层、指示剂和支持层。利用“反射光度法”和“差式电位法”检测。以液体样品中的“水”为溶剂。理论基础：KubelkaMunk理论。,8,5.半自动生化分析仪,光源（石英卤素灯）常用“干涉滤光片”分光微量流动比色池。终点法项目通常在“仪器”外孵育，时间和温度的准确性常影响测定结果。,9,例1临床上所指的封闭式全自动生化分析仪主要是A 质控物封闭B 试剂封闭C 环境封闭D 仪器封闭E 技术人员封闭,10,例2全自动生化分析仪可分为小型、中型、大型，其依据是：A 单通道和多通道数量B 仪器可测定项目的多少C 测
3、定程序可否改变D 仪器的复杂程度、功能和单位时间测试数量E 是否可以同步分析,11,例3全自动与半自动生化分析仪共同之处为A 取样B 加试剂混合C 检测波长D 孵育反应E 清洗系统,12,例4干化学式自动生化分析仪所用的光学系统为A 分光光度计B 原子吸光仪C 反射比色计D 固定闪烁计数器E 免疫比浊计,13,例5关于分立式全自动生化分析仪的比色杯的阐述，错误的是：A 比色杯可以是反应杯B 比色杯可以自动制作C 比色杯可以是流动比色池D 比色杯可以是石英玻璃E 比色杯可以是硬质塑料,14,二、自动生化分析仪的安装与准备,1.工作环境 空间、电源（UPS)、避免直射阳光、环境温度和湿度、电磁辐射
4、、化学品。2.水 蒸馏水、去离子水、反渗透水。3.纯水等级：一般二级 二级纯水微生物含量：最大每毫升菌落数103。,15,例6临床生化实验室一般采用NCCLS所规定的二级纯水，其微生物菌落（CFU/ml)应低于A 1B 10C 100D 1000E 100000,16,例7临床生化实验室用水一般采用：A 一级水B 二级水C 三级水D 次级水E 自来水,17,三、全自动生化分析仪 基本结构及工作原理,1.样品系统 专用样品杯和直接用采血试管凝块和气泡检出功能自动冲洗功能样品预稀释、后稀释、加倍、标准原液系列稀释等不同的稀释方式。,18,2.试剂系统冷藏功能液面感应及气泡检出双试剂与多试剂试剂瓶的
5、防蒸发与死体积试剂条码,19,3.条形码系统三组成部分：扫描系统、信号整形、译码器黑条白空相间的条码符号光电转换元件常用条码类型：Code39,Code128等,20,4.反应系统4.1 反应盘4.2 混合装置 多用特氟隆不沾涂层的搅拌棒4.3 温控装置 理想的温度波动应小于0.13种方式：空气浴、水浴、恒温液间接加热强生干化学仪用空气浴恒温,21,5.清洗系统 一般先用碱性液冲洗、再用酸性液冲洗、最后用去离子水冲洗。6.管路系统 管路系统的老化或长期使用后反应废物的沉积阻塞常造成反应结果的重复性差。,22,7.比色系统7.1 光源 卤素灯波长300800nm 氙灯 波长285750nm使用寿
6、命1000h左右，光源能量对340nm影响最大。7.2 比色杯 常用石英、硬质玻璃、优质塑料 光径0.50.7cm。,23,7.3 单色器 朗伯比尔定律 滤光片、棱镜、光栅分光 多采用光栅分光 多采用后分光测量技术光源 比色杯 单色光器 检测器7.4 检测器 发光二极管8 程序控制系统,24,9.携带污染常规清洗不能完全消除携带污染9.1 常见原因 共用系统 保养不当（污垢、老化）清洗液使用不当 排列顺序不合理9.2 计算 小于0.3%为正常9.3 常见组合,25,例8自动生化分析仪比色分析常用的检测器是A 固定闪烁计数器B 硒电池C 镍氢电池D 二极管E 光电倍增管,26,例9自动生化分析仪
7、的光源能量降低对单色光影响最大的波长是A 340nmB 405nmC 450nmD 500nmE 630nm,27,例10自动生化分析仪清洗加样针主要为了A 提高分析精密度B 提高分析准确度C 防止交叉污染D 提高反应速度E 提高分析的灵敏度,28,例11大多数全自动生化分析仪比色杯的光径是A 0.50.7cmB 0.81.0cmC 1.11.9cmD 2.03.9cmE 4.0cm,29,例12,30,例13,31,例14全自动生化分析仪比色杯的材料常采用A 光学玻璃或一般塑料B 普通玻璃或硬质塑料C 隔热玻璃或普通塑料D 石英玻璃或优质塑料E 优质塑料或普通玻璃,32,例15目前全自动生化
8、分析仪最常用的光栅分光方式为A 前分光B 中分光C 后分光D 前中后分光E 前后分光,33,例16干式生化分析仪保持恒温的方式是A 空气式恒温器加热B 水浴式循环直接加热C 恒温液循环间接加热D 金属直接加热E 反应液直接加热,34,例17全自动生化分析仪的试剂与样品的混合装置类型为A 搅拌棒B 加温C 机械振荡D 加样针E 加混合液,35,例18 某实验室全自动生化分析仪近两天发现部分结果明显不稳定，仪器自检正常，测定过程没有错误报警，如果是交叉污染因素，首先应考虑为A 清洗剂的类型是否正确B 清洗用水是否符合要求C 管路冲洗是否彻底D 反应杯是否需更新E 用校准品对仪器进行重新校正。,36
9、,例19 340nm波长属于A 可见光 B 紫外光C 红外光D 近红外光E 远红外光,37,例20,38,例21,39,四、全自动生化分析仪常用分析技术,1.光谱分析技术单波长、双波长甚至多波长主波长，特有波长；副波长，为消除干扰而设单波长易受溶血、黄疸、脂浊的干扰；双波长可消除上述干扰，减少杂散光、噪音干扰常用双波长 比浊 340/700nm；Hb 340/380；NADH 340/380、340/405；ALP 405/476；Trinder 520/600。,40,1.1 波长选择的三个条件待测物质的光吸收最大吸收峰宽而钝常见干扰物在该波长下光吸收最小1.2 吸收光谱分析 Lambert
10、-Beer定律,41,1.3 散射光谱分析散射光谱分析法 光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度的定律方法。透射比浊法散射比浊法 目前，全自动生化分析仪主要采用透射比浊法。,42,2.电化学分析技术是利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化的分析方法。基本公式：能斯特（Nernst)方程。测量电极与参比电极K+电极 颉氨霉素；Na+玻璃电极；Cl-银氯化银电极；CO2 气敏电极,43,例22,44,例23,45,例24,46,例25,47,例26,48,例27,49,例28钠电极属于A 晶体电极B 气敏电极C 玻璃电极D 酶电极E 膜电极,50,例29很多分析仪都采用双波
11、长或多波长的光路技术，是为了减少A 试剂的干扰B 样品中黄疸、溶血、脂血的干扰C 仪器光源的波动D 批间差异E 批内差异,51,例30,52,例31,53,例32,54,五、全自动生化分析仪常用测定项目的反应原理,终点分析法连续监测法干化学分析法电化学分析法,55,1.常用分析方法 连续监测法的定义 终点法定义 零级反应期 一级反应期,56,2.NAD(P)H系统指示的反应还原型NAD(P)H在340nm有吸收峰；氧化型NAD(P)则没有。,57,2.1 利用NAD(P)HNAD，吸光度下降的：ALT AST LD-P UN K+酶法 TCO2酶法,58,2.2 利用NADNAD(P)H，吸光
12、度升高的：CKCK-MBTBALD-LGlu-HKTBA,59,3.Trinder反应Glu-GOD肌苷肌氨酸氧化酶法尿酸GPO-PAPT-Ch,HDL/LDL-Ch,60,4.苯衍生物指示反应ALPGGTNAG,61,5.免疫透射比浊法型胶原TnIHs-CRP，LP(a)尿微量白蛋白，前白蛋白胱抑素C载脂蛋白,62,6.离子选择电极法K+Na+Cl-TCO2,63,7.常见受溶血影响较大的项目K+LDHCKASTALTMg,64,8.终点法反应的项目Glu-GOD，肌苷肌氨酸氧化酶法，尿酸，TG-GPO-PAP，T-Ch，9.速率法反应的项目ALT，AST，ALP，GGT，TBA，CK,LD
13、，Glu-HK，UN，NAG，,65,9.其他9.1 反应底物 ALT L丙氨酸-酮戊二酸 ALP 磷酸苯二钠9.2 用全血标本：糖化血红蛋白,66,例33,67,例34,68,例35,69,例36,70,例37,71,例38,72,例39,73,例40,74,例41,75,例42,76,例43,77,例44,78,例45,79,例46,80,例47关于ALT测定中，叙述正确的是A L-丙氨酸与-酮戊二酸为反应底物B NADH在氧化还原反应中起作用C 第一步反应中的L-丙氨酸将进入下一步反应D 在偶联反应中，生化仪将在455nm处检测吸光度下降速率E LD主要作用于第一步反应,81,例48若遇
14、到溶血标本时，受影响较小的项目是A LDL-CB LDHC CKD ASTE ALT,82,例49在下列反应中，需要谷氨酸脱氢酶的是：A 酶速率法测定尿素B 葡萄糖氧化酶法测定C 肌苷酶法测定D 尿酸酶法测定E 胆固醇酶法测定,83,例50血清前白蛋白测定，临床上常用的方法是A 溴甲酚绿法B 凯氏定氮法C 双缩脲法D 免疫比浊法E 磺柳酸法,84,例51酶法测定甘油三酯常用的方法是A 终点法B 速率法C 免疫比浊法D 化学修饰法E 固定时间法,85,例52自动生化分析仪中连续监测法的读数方式A 在一定的时间范围内连续读各吸光度值B 反应尚未开始和反应终点时各读取吸光度值C 终点附近读两个检测点取均值D 在终点附近读取两点，计算两点吸光度的差值E 每经过比色窗口即读取一个吸光度,86,例53全自动生化分析仪上测定血清（浆）载脂蛋白的方法为：A 免疫扩散法B 免疫火箭电泳法C 免疫透射比浊法D 酶法E 免疫散射比浊法,87,例54酶活性浓度测定不考虑下列哪些因素影响A pH和离子强度B 底物浓度C 激活剂D 反应温度E 抑制剂抑制反应的类型,88,谢 谢！,
