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1、2006届硕士学位论文答辩会,鼻咽癌肿瘤干细胞及其表面标志物的初步研究,研究生：邵世宏 导 师：姚运红 副教授 广东医学院病理教研室 2006年6月11日,研究背景以及国内外研究现状,干细胞具有自我更新、高度增殖和分化能力，分为胚胎干细胞和成体干细胞，在胚胎发育和维持组织器官结构及功能完整性过程中起到重要的作用。现在发现，人体各种组织中都存在干细胞，包括以前认为的不可再生组织，如心肌和神经组织等,研究背景,成体干细胞具有可塑性，在体外培养超过45个月便会发生癌变。干细胞是突变的靶细胞，突变的干细胞即为肿瘤干细胞，其不断增殖分化形成异质性群体的肿瘤。肿瘤可能是一种干细胞疾病，是干细胞在长期的自我
2、更新过程中累积损伤导致干细胞生长增殖分化失去调控，而停滞在分化的某一阶段无限增殖所形成的异常的组织或器官。,研究背景,肿瘤干细胞是肿瘤异常增殖、侵袭、转移、耐药以及复发等的根源 目前，已经根据细胞表面分子标记从脑肿瘤、慢性粒细胞性白血病和乳腺癌中分选出各自的肿瘤干细胞,肿瘤干细胞是肿瘤治疗失败复发的根源,研究目的,研究鼻咽癌中是否存在少部分细胞为肿瘤干细胞 研究E-cad、CD44H、-cat和EBERs在鼻咽癌发生发展和转移中的作用;探讨各指标与鼻咽癌干细胞的关系探讨针对肿瘤干细胞的治疗方法在鼻咽癌治疗中的可行性,为临床上鼻咽癌的治疗提供一个新的方向。,技术路线,临床病理部分,技术路线,临床
3、病理部分,鼻咽粘膜慢性炎,鼻咽癌淋巴结转移灶,鼻咽癌,CD44H、-cat和E-cad的表达,IHC,EBERs的表达,ISH,技术路线,实验病理部分,CNE-2Z细胞,裸鼠移植瘤成瘤率及其生长情况,CD44H、-cat和E-cad的表达,EBERs的表达,克隆形成能力,接种裸鼠,IHC,ISH,结果和讨论,临床病理部分,组 别 N E-cadherin CD44H-catenin Positive(%)Positive(%)Positive(%),鼻咽粘膜慢性炎 19 19(100.0)2(10.52)17(89.47)鼻咽癌 33 18(54.54)25(75.76)16(48.48)鼻咽
4、癌淋巴结转移 28 7(25.00)27(96.43)22(78.56),E-cadherin、CD44H和-catenin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌及鼻咽癌淋巴结转移组织中的表达,2检验：E-cad、CD44H和-cat的表达在鼻咽粘膜慢性炎组和鼻咽癌组间比较，差异均有显著性(P0.05)，2值分别为15.850，12.076和9.952。E-cad、CD44H和-cat的表达在鼻咽癌组和鼻咽癌淋巴结转移组间比较，差异均有显著性(P0.05)，2值分别为5.467，5.146和5.838。,临床病理部分,结果,临床病理部分,鼻咽癌中E-cadherin和-catenin表达的相关分析,E-ca
5、dherin-catenin 正常表达 异常表达-3 12+14 4,Spearman相关分析：-catenin异常表达和E-cadherin失表达具有相关性，r=0.555，P0.001,结果,结果,空白对照(SPx200),E-cad在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性表达（SP400）,结果,E-cad在鼻咽癌中的阳性表达（SP200）,E-cad在鼻咽癌淋巴结转移灶的阳性表达（SP200）,结果,CD44H在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性表达（SP400）,CD44H在鼻咽癌中的阳性表达（SP200）,结果,CD44H在鼻咽癌淋巴结转移灶的表达（SP200）,-cat在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性表达（SP20
6、0）,结果,-cat在鼻咽癌中的异常表达（SPX200）,-cat在鼻咽癌淋巴结转移灶中的异常表达（SPX400）,临床病理部分(ISH),鼻咽癌癌旁组织 38 0(0)38(100.0)鼻咽癌 38 32(84.21)6(15.79),EBERs在鼻咽癌癌旁组织及鼻咽癌中的表达,组 别 N EBERs Positive(%)negative(%),2检验：EBERs的表达在鼻咽癌组和鼻咽癌癌旁组织组比较，差异有极显著性(P0.001)，2值为55.273.,结果,EBERs的阳性对照（ISH200）,EBERs在鼻咽癌癌旁组织中阴性表达（ISHX200）,结果,EBERs在鼻咽癌中的阳性表达
7、（ISH200）,临床病理部分,CD44H高表达、-catenin 异常表达和E-cadherin低表达与鼻咽癌的发生发展和转移有关。EBERs与鼻咽癌的发生有关，但不是鼻咽癌发生的必需条件。CD44H、-catenin 和E-cadherin在鼻咽癌中均为异质性表达，各种不同标记的癌细胞生物学特性有待进一步研究E-cadherin失表达与-catenin异常表达有关，机制有待进一步研究。,讨论,结果和讨论,实验病理部分,结果,空白对照（SP400）,-cat在CNE-2Z细胞中异常表达（SPX200）,结果,CD44H在CNE-2Z细胞中的同质性阳性表达（SP200）,E-cadherin在
8、CNE-2Z细胞中的异质性表达（SP200）,结果,空白对照（SP400）,CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中 CD44H 异质性表达（SP400）,结果,CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中E-cad的异质性表达（SP400）,CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中-cat的异常表达（SP400）,结果,CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中EBERs的阴性表达（ISH400）,EBERs在CNE-2Z细胞中的阴性表达（ISH200）,结果,CNE-2Z细胞克隆形成率为（71.884.52）组织块培养法对15例经临床病理证实的鼻咽癌新鲜组织进行原代培养，14例有癌细胞长出，随着培养时间的推移，细胞数量逐渐减少，最后仅剩余极少
9、量细胞存活,实验病理部分,鼻咽癌组织中除了一小部分细胞具有无限增殖能力以外，大多数细胞不能无限增殖。CD44H和-cat在CNE-2Z细胞系中均为同质性阳性表达，E-cad为异质性表达，EBERs为阴性表达。裸鼠移植瘤中CD44H、-cat和 E-cad均为异质性表达，EBERs为阴性表达，CD44H阳性细胞可分化产生CD44H阴性细胞。CNE-2Z细胞系中含有大量鼻咽癌干细胞。鼻咽癌细胞CNE-2Z的生长增殖及转移成瘤不需要EBERs的参与，EBERs可能仅参与或促进鼻咽癌的发生发展。,讨论,小结,鼻咽癌中仅有极少部分细胞能在体外存活并生长增殖，这部分细胞高表达CD44H蛋白，可能是鼻咽癌干
10、细胞。CNE-2Z细胞同质性表达CD44H蛋白，可能含有极高比例的肿瘤干细胞。EBERs参与了鼻咽癌的发生发展，但不是必需条件，不能做为分选鼻咽癌干细胞的标志。CD44H阳性的细胞具有极高的克隆形成、转移成瘤和分化能力，CD44H可能成为鼻咽癌干细胞的表面标志。,致谢,感谢导师姚运红副教授三年来在学习、生活上给予的关怀与帮助。在此，谨向精心指导和培育我的导师致以最诚挚的谢意！感谢教研室唐慰萍教授、陈小毅教授、孙宁教授、胡新荣教授、姜汉国副教授、卢庆林副教授、赵颖海副教授在课题设计、实验进展和论文完成过程中给予的宝贵指导和帮助！感谢邓惠华高级实验师、蔡琼珍、李飞虹、罗泊涛、熊晖、揭伟、唐加步、唐泽立、姜蕊、包刚病理教研室全体老师；感谢附院病理科黄应桂主任及全体老师！感谢农垦人民医院耳鼻喉科潘志红主任、吴健雄老师在临床取材中所给予的帮助和支持！在此还向师姐余健华，师兄曹璋、赵同伟在实验中给予的帮助表示我衷心的感谢！感谢我的同窗好友和师弟师妹们在实验中所给予的关心和帮助，和他们渡过的美好时光永远值得我怀念！感谢我的家人对我学业的理解和支持！,敬请各位老师同学批评指正!,
