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1、实验十一：血型鉴定及交叉配血,医学检验学院检验基础实验室,实验内容,一、红细胞悬液的制备二、ABO血型鉴定（试管法）和Rh血型鉴定三、交叉配血（盐水介质和聚凝胺介质）,临床中：,待测,制成红细胞悬液，待测,一、红细胞悬液制备,常用浓度：1%、2%、5%、10%。方法：抗凝血 移去上层血浆待测 洗涤：剩余的红细胞中加5ML NS，混匀，洗涤，弃上清，此步骤重复3次，最后一次上清应清亮并全部弃去。配制悬液。（根据要求浓度）如：5%：洗涤后压积红细胞1滴+19滴NS，混匀,二、ABO血型鉴定：,（一）、正定型（二）、反定型,二、ABO血型鉴定（盐水介质）：,一、正定型原理：用特异性血型抗体检测被检R
2、BC,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检RBC膜上有无与特异性血型抗体相对应的抗原，进一步判定血型。,二、ABO血型鉴定：,一、正定型方法：1、试管法：,加标准血清1滴（-A-B）,加红细胞悬液1滴（5%）,混匀，离心 观察结果,1000r/min,1min,-A,-B,二、ABO血型鉴定：,正定型判定结果：试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（）；如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微
3、镜下观察。注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血,二、ABO血型鉴定：,二、反定型：原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体，进一步判定血型。,二、ABO血型鉴定：,二、反定型方法：1、试管法：,加待测血清2滴,加标准红细胞悬液1滴,混匀，离心 观察结果（方法同正定型）,1000r/min,1min,-A,-B,二、ABO血型鉴定：,结果判定：,正定型,反定型,二、ABO血型鉴定,凝集强度的判断见实验指导表格注意：1、正反定型一致才能确定结果；2、所用器材必须清洁干净，避免溶血，专型专用；3、控制离心速度和
4、时间，防止假阳性和假阴性；4、抗原抗体比例要适当；5、溶血时，注意结果的判定；6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。,Rh（D）血型鉴定,原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否出现凝集判断是否有D抗原的存在。,Rh（D）血型鉴定,加抗D血清1滴,加红细胞悬液1滴（5%）,轻轻摇动玻片混匀，2min内判断结果，有凝集（），无凝集需按照说明书进一步实验确认是否为阴性,Rh（D）血型鉴定,注意事项：1、按照试剂说明书操作2、先加血清，后加RBC悬液，可通过视觉判断以免出现漏加抗D试剂导致的假阴性结
5、果3、观察结果时，应轻轻捻动试管，若用力摇动，可认为破坏弱凝集，误判为（一）性。,三、交叉配血,概念：供血者的血浆、红细胞与受血者的红细胞、血浆混合，观察有无凝集反应。方法：盐水介质法、聚凝胺介质法、微柱凝胶法、抗人球蛋白法、酶介质法。,交叉配血：,主侧：受血者血浆+供血者红细胞 Ps：patient serum Dc：donor cell 次侧：供血者血浆+受血者红细胞 Ds：donor serum Pc：patient cell,受血者,献血者,Ps,Pc,Ds,Dc,主侧,次侧,3%-5%1%,一、盐水介质法,原理：ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC抗原特异性结合时，在盐水介质中出
6、现肉眼可见的凝集。通过判断是否凝集，判断是否有血型不合的情况,（一）盐水介质法,操作：1、取两只小试管，标明主和次侧2、主侧：受血者血浆2滴，献血者红细胞1滴 次侧：献血者血浆2滴，受血者红细胞1滴3、混匀，离心，1000r/min,离心1min4、观察结果：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（）；如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。,（二）聚凝胺介质法,原理：聚凝胺是一种高价阳离子多聚物，在液体中可产生负电荷，中和红细胞表面的负电荷，减轻细胞间排斥力，缩短红细胞距离，在离心力作用下，可使红细胞发生发生可逆性、非特异性凝集。低离子液可降低可增强抗原、抗体间的吸引力，促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。离心后加入再悬液（枸橼酸钠），可中和聚凝胺的正电荷，正常红细胞表面恢复表面的负电荷，使非特异性凝集散开，而特异性的抗原抗体结合引起的凝集仍然存在。,操作步骤,按照说明书进行,谢谢！,
