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1、实验八 肠道杆菌,实验目的：观察大肠杆菌，伤寒杆菌在SS琼脂平板和在EMB琼脂平板生长状态。观察大肠杆菌，伤寒杆菌在双糖含铁斜面的菌落特点。五糖发酵试验。吲哚试验。,一、肠道鉴别培养基1、SS琼脂培养基：这种培养基除含有基本的营养物质外，还含有乳糖和中性红指示剂(遇酸变红，遇碱变黄)。是否能够分解乳糖是鉴别肠道致病菌和非致病菌的重要依据之一。通常非致病菌能分解乳糖产酸产气，而致病菌则不能分解乳糖。,观察大肠杆菌和伤寒杆菌在SS琼脂培养基上的生长现象：大肠杆菌分解乳糖产酸产气，使指示剂变红，故菌落为粉红色。伤寒杆菌不分解乳糖，则不变色，为橙黄色菌落。,2、EMB(伊红-美蓝)琼脂平板培养基：在无
2、糖琼脂内加入乳糖，加热溶化，冷至50。加入经高压灭菌的伊红及美蓝溶液，摇匀后倾注平板。现象：因大肠杆菌能分解乳糖，使指示剂变色，呈现紫黑色有金属光泽的菌落。而伤寒杆菌则不变色。,3、双糖含铁培养基：分上、下两层：上层为固体斜面培养基：除基本成分外，另加有乳糖、酚红指示剂(遇碱变红，遇酸变黄)和硫酸亚铁。(PH值7.6)下层为半固体培养基，含葡萄糖和酚红指示剂。,分别接种大肠和伤寒杆菌在双糖含铁培养基上，观察现象：大肠杆菌：试管由红变黄，有气泡，有动力。伤寒杆菌：上层仍为红色，下层由红变黄，有黑色沉淀，有动力。,硫化氢试验：有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化氢气体，可与培养基中的硫酸亚铁生成黑色沉淀，为硫化氢试验阳性。,二、吲哚试验(靛基质试验)原理：有些细菌能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(无色)，向其中加入吲哚指示剂(对二甲基氨基苯甲醛)，可与吲哚结合生成玫瑰吲哚而呈红色，为吲哚试验阳性。蛋白胨水培养基：蛋白胨、蒸馏水、氯化钠，调PH值7.2即可。大肠杆菌的吲哚试验阳性。,三、五糖发酵管试验成分：蛋白胨、水、氯化钠、酚红指示剂和各种糖类五糖：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖现象：大肠杆菌各管均呈黄色，有气泡 伤寒杆菌的2、5管不变色可用于致病与非致病菌的鉴别,
