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1、预备性实验操作,主要的预备性实验操作,手术术前准备、消毒、缝合麻醉电极的制作切片固定染色灌流,手术的术前准备（洗涤与消毒）,手术器械的洗涤：玻璃制品，金属器械。玻璃制品：超声清洗、泡酸24h、自来水清洗、蒸馏水清洗、烘烤。金属器械：酒精消毒液体消毒：过滤、蒸气消毒。个体的消毒：手，清水洗、消毒液泡、蒸馏水洗。,消毒缝合,消毒液种类：碘、75%酒精、过氧乙酸、O3、紫外线、加热。机体消毒：备毛、碘消毒、75%酒精脱碘，由内向外同心圆。术中消毒：青霉素、链霉素。术后消毒：消炎粉、碘、酒精。缝合：肌肉：连续缝合；皮肤：间断缝合。,麻醉,麻醉剂：水和氯醛、戊巴比妥钠、乌拉坦（致癌）、乙醚。麻醉程度麻醉
2、剂的选择,电极,电极的种类金属电极：不锈钢、银、金玻璃电极碳纤电极拉电极：加热,切片,切片的目的：位置的确定、染色、记录、生化实验（原位杂交）、电镜观察。切片的厚度：单细胞记录：0.5mm，定位：mm.切片的保存：树脂封片,固定,固定液：甲醛、多聚集醛、戊二醛、蛾酸脑的固定液：多聚甲醛，蔗糖。固定时间：h更长,固定的目的,迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转为不溶性物质，以保持其原有状态。使组织内各种成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。,使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏。使不同的组织成分对
3、染料有不同的亲和力，经过染色处理后易于辨认。防止细胞过度收缩或膨胀，以致失去其原有形态结构。使组织块硬化，便于制作薄片。,蒸气固定：以锇酸、甲醛蒸汽固定。用于血液、细胞涂片，某些薄膜组织。灌流固定：通过心脏将固定液输入血管中，达到固定全身或某个局部脏器的目的。,染色,染色法：,2.Cajal 氏法,Ramon Y.Cajal（1852-1934）西班牙人。神经组织学家、摄影家。1903年创立Cajal法，是对Golgi 法的改进，称“快速Golgi 法”。Cajal 发展了神经元学说，针对Golgi 法的网状学说，提出神经元之间的联络不是连续的，而是接触的；在其接触面上，有颗粒状的粘合物乃至特
4、殊的传递物质。,神经原纤维,树突,细胞核,3、Nissl 法 Franz Nissl（18601919）德国人，病理组织学家。1892年创立Nissl 染色法，并以发现Nissl体和Nissl 变性等而闻名。,尼氏小体,核仁,细胞核,4、Weigert氏法 Karl Weigert（1843-1904），德国病理学家。1884年发明了髓鞘染色法。用金属化合物对神经组织进行媒染,再以苏木精染色，是显示神经髓鞘的优秀方法。,HE染色,三、操作步骤：,1、配制冲洗液、固定液。2、麻醉动物。3、手术：在剑突处横向剪开，并沿肋骨两侧向上打开胸腔；打开心包膜，剪开左心室，将灌流针头插入心脏主动脉（弓）中，并固定。4、放开冲洗液输液管上的止水夹，开始灌流，同时剪开右心耳放血。5、待肝脏色变浅，流出液为透明时，开始用固定液固定，直到动物僵硬为止。6、灌流结束后，取出所需脑组织放入30%蔗糖固定液中进行后固定和保存，待以后切片用。,谢谢！,
