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1、细胞的芽孢染色法,一、实验目的及要求,学习并掌握细菌的芽胞染色法,初步了解芽孢杆菌的形态特征。,二、实验原理,芽胞又称内生孢子,能否形成芽孢及芽孢的形状、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。芽胞壁厚,透性低,不易着色,一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色(芽胞呈无色透明状),而一旦染上色后又难以脱色。芽胞染色法根据芽胞特点设计,除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽胞着色。当染芽胞时,菌体也会着色,然后水洗,芽胞染上的颜色难以渗出,而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽胞呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽胞,便于观察。,三、实验器材,1.菌
2、种:枯草芽孢杆菌。2.染色剂:5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液3.仪器、材料:二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。,四、实验方法(SchaefferFulton氏染色法),1.制片:常规方法涂片、干燥、固定。2.染色:(1)涂片上滴加35滴5%孔雀绿水溶液。(2)用试管夹夹住载玻片一端,微火加热,自载玻片上出现蒸汽时,计时5min。加热过程中切勿使染料蒸干,及时补加染液。待玻片冷却后,用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。(3)0.5%碱性番红复染2min,水洗。(4)制片干燥后油镜观察。芽孢呈绿色,菌体红色,五、实验报告,绘图标识枯草芽孢杆菌及芽孢形态,芽孢的着生位置。六、思考题1为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色?2试设计实验如何鉴定某一产芽孢菌株的芽孢形态、着生位置及所属分类地位。,