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1、第一章 遗传物质的分子结构性质和功能,核酸与蛋白质一样，是一切生物机体不可缺少的组成部分。核酸是生命遗传信息的携带者和传递者，它不仅对于生命的延续，生物物种遗传特性的保持，生长发育，细胞分化等起着重要的作用，而且与生物变异，如肿瘤、遗传病、代谢病等也密切相关。因此，核酸是现代生物化学、分子生物学和医药科学的重要基础之一。,核酸与遗传,早在1868年，瑞士人F.Miescher从细胞核中分离得到一种酸性物质，即现在被称为核酸的物质。1928年，英国Fredrick Griffith等第一次用实验方法证实DNA是生命遗传的基础物质。1953年，Watson和Crick提出的DNA双螺旋模型真正使人
2、们相信DNA才是遗传物质。,大部分生物的遗传物质是DNA，但是也有些生物是以RNA作为遗传物质如：烟草花叶病毒中分离得到的RNA也能够侵染植物，如果用RNA酶处理，就失去侵染能力，而分离的蛋白部分则没有这种侵染能力。,第二节 核酸的结构,一、核酸的一级结构多聚核苷酸是由四种不同的核苷酸单元按特定的顺序组合而成的线性结构聚合物，因此，它具有一定的核苷酸顺序，即碱基顺序。核酸的碱基顺序是核酸的一级结构。DNA的碱基顺序本身就是遗传信息存储的分子形式。生物界物种的多样性即寓于DNA分子中四种核苷酸千变万化的不同排列组合之中。而mRNA(信息RNA)的碱基顺序，则直接为蛋白质的氨基酸编码，并决定蛋白质
3、的氨基酸顺序。,C值：在每一种生物中，其单倍体的基因组DNA总量是特异的，称之为C值。C值矛盾：某生物的C值与进化的复杂程度不一致就称为C值矛盾（C-value paradox）例如一些植物的基因组DNA含量比人类还要高几十倍，这显然是无法解释的，这就是C值矛盾。,二、DNA的二级结构,1953年，J.Watson和F.Crick 在前人研究工作的基础上，根据DNA结晶的X-衍射图谱和分子模型，提出了著名的DNA双螺旋结构模型，并对模型的生物学意义作出了科学的解释和预测。,1DNA双螺旋结构的特点,DNA分子由两条DNA单链组成。DNA的双螺旋结构是分子中两条DNA单链之间基团相互识别和作用的
4、结果。双螺旋结构是DNA二级结构的最基本形式。,DNA双螺旋结构的要点,（1）DNA分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链)组成。两条链沿着同一根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反，即其中一条链的方向为53，而另一条链的方向为35。,（2）嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成90角。,DNA双螺旋结构的要点,（3）螺旋横截面的直径约为2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为3.4 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为34 nm。,DNA双螺旋结构的要点,DNA双
5、螺旋结构的要点,（4）两条DNA链相互结合以及形成双螺旋的力是链间的碱基对所形成的氢键。碱基的相互结合具有严格的配对规律，即腺嘌呤（A）与胸腺嘧啶（T）结合，鸟嘌呤（G）与胞嘧啶（C）结合，这种配对关系，称为碱基互补。A和T之间形成两个氢键，G与C之间形成三个氢键。在DNA分子中，嘌呤碱基的总数与嘧啶碱基的总数相等。,2DNA双螺旋的稳定性,DNA双螺旋结构在生理条件下是很稳定的。维持这种稳定性的因素包括：两条DNA链之间形成的氢键；同一条链中的相邻碱基能够形成一种堆积力，称为碱基堆积力,DNA的二级结构分为两大类,右手螺旋：A-DNA B-DNA C-DNA D-DNA左手螺旋：Z-DNA,
6、生物体内正常的DNA为B-DNA；转录时的DNA-RNA杂交链为A-DNA，对基因表达有重要意义；左手螺旋Z-DNA不能推翻右手双螺旋模型，而是其有益的补充和发展，通过B-DNA和Z-DNA之间的相互转化，可以影响聚合酶能否与模板链结合而调节转录起始活性。,三、DNA的三级结构,DNA的三级结构即在DNA双螺旋结构基础上，进一步扭曲所形成的特定空间结构。也就是超螺旋结构，分为正超螺旋和负超螺旋,拓扑异构酶（topoisomerase）：为催化DNA拓扑学异构体相互转变的酶之总称。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中，切断一个链而改变拓扑结构的称为型拓扑异构酶，通过切断二个链来进行的称为型拓扑异构酶
7、。拓扑异构酶：1切口，解旋拓扑异构酶：2切口，超螺旋,二、RNA的结构,单链线性分子，局部双螺旋也具有高级结构有些RNA具有催化活性，称为核酶（ribozyme）,第三节 核酸的功能,一、DNA的功能及基因治疗结构基因：编码蛋白质中氨基酸序列的基因调控基因：调节基因选择性表达的基因基因治疗：利用分子生物学技术，校正基因结构和功能异常，阻止病变的进展，杀灭病变细胞或抑制外源病原体基因的复制，而治疗疾病的方法。基因治疗分为体外和体内治疗两种方式。,二、RNA的功能,1.hnRNA和mRNA的功能 mRNA的原是转录物是分子量极大的前体，在核内加工过程中形成分子大小不同的中间产物，称为核内不均一RN
8、A，hnRNA。真核生物由DNA转录成RNA的过程发生在细胞核内，而翻译过程则发生在细胞质中。原核生物因为没有核膜，所以其转录核翻译过程几乎是同时进行的。,mRNA(信使RNA),约占总RNA的5%。不同细胞的mRNA的链长和分子量差异很大。它的功能是将DNA的遗传信息传递到蛋白质合成基地 核糖核蛋白体。,Messenger RNA,tRNA(转移RNA),约占总RNA的10-15%。它在蛋白质生物合成中起翻译氨基酸信息，并将相应的氨基酸转运到核糖核蛋白体的作用。已知每一个氨基酸至少有一个相应的tRNA。RNA分子的大小很相似，链长一般在73-78个核苷酸之间。,Transfer RNA,tR
9、NA的功能：1.与活化的AA形成氨酰tRNA（AAtRNA）tRNA分子上决定其携带氨基酸种类的区域被称为副密码子。能够携带同一种AA的tRNA称为同功tRNA。2.将AA携带到核糖体上在蛋白质合成中起着原料运输“车辆”的作用。3.具有反密码子，可以识别mRNA上的相应的密码子，将AA合成到蛋白质适当的位置中,rRNA(核糖体RNA),约占全部RNA的80%，是核糖核蛋白体的主要组成部分。rRNA 的功能与蛋白质生物合成相关。,Ribosome RNA,snRNA、scRNA、iRNA、gRNA真核细胞内存在许多种类的小分子RNA，其大小为100至300个核苷酸，这类小分子RNA按其在细胞内的
10、位置可分为：核内小RNA（snRNA）和胞浆小RNA（scRNA）。起始RNA（iRNA）DNA生物合成的后滞链合成时，需要一个短的RNA片段作为引物，长约10个核苷酸，是由DNA引发酶所合成的，这一通用引物称为起始RNA。指导RNA（gRNA）RNA编辑过程中的模板。,端粒酶RNA、核酶端粒：真核生物染色体末端的蛋白质DNA结构，其功能是完成染色体末端的复制，防止染色体融合、重组或降解。端粒酶：一种自身携带模板RNA的逆转录酶，催化端粒DNA的合成。端粒酶RNA：作为合成端粒DNA模板的核RNA，是端粒酶的组成部分，对端粒酶的结构和催化活性是必须的。核酶：和通常的蛋白质酶一样，可以催化各种生
11、化反应。,第四节 核酸的变性、复性与杂交,(1)核酸的变性核酸的变性是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程。变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。能够引起核酸变性的因素很多。温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的变性。,RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。利用紫外吸收的变化，可以检测核酸变性的情况。例如，天然状态的DNA在完全变性后，紫外吸收(260 nm)值增加2540%.而RNA变性后，约增加1.1%。这种现象称为增色效应.,DNA变性
12、的特征,DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将引起DNA变性的温度称为熔点，用Tm表示。一般DNA的Tm值在70-85C之间。DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关。G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G,C含量，可通过经验公式计算：（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44,DNA变性,当DNA的稀盐溶液加热到80-100时，双螺旋结构即发生解体，两条链彼此分开，形成无规线团。DNA变性后，它的一系列性质也随之发生变化，如紫外吸收(260 nm)值升高,粘度降低等。,(2)核酸的复性,变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔
13、合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复。DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性。分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性也与它本身的组成和结构有关。,DNA复性,(3)核酸的杂交与应用,核酸的杂交是指序列互补单链的RNA和DNA，或异源DNA、异源RNA之间，根据碱基配对原则，借助氢键相连而形成双链杂交分子的过程。核酸的杂交在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义。,核酸的杂交,核酸杂交的应用,核酸探针的定义：带
14、有检测标记的能够与靶分子特异性的相互作用的一段核酸分子。Southern印迹（DNADNA）Northern印迹（DNARNA）原位杂交（探针组织或细胞中的DNA或RNA）,第五节 病毒核酸,一、病毒的基本概念二、病毒核酸的一般特征,一、病毒的基本概念,病毒就是一类由蛋白质外壳和DNA组成的专属性的细胞内寄生物，不能进行独立的能量及遗传物质代谢，只能依靠寄主繁殖的非细胞生物。,二、病毒核酸的一般特性,有环形的也有线形的有正链（能起mRNA的作用）及负链之分病毒核酸分子量差别很显著病毒核酸利用率很高，同一段病毒核酸可以编码出几种不同的多肽链病毒核酸的基因结构与其所寄生的真核生物相似，而不是与原核
15、生物相似。是不连续的，具有内含子。,核糖核酸病毒(RNA virus)，又称RNA病毒，其遗传物质为RNA，相较于DNA病毒，的RNA病毒都具有高变异性，因为它们缺乏具有修正错误的DNA聚合酶。植物病毒，除少数例外（如花椰菜花叶病毒Caulif-lower mosaic virus），几乎都是RNA病毒。,双链核糖核酸病毒The dsRNA Viruses 囊状噬菌体科(Cystoviridae)呼肠孤病毒科(Reoviridae)双核糖核酸病毒科(Birnaviridae)整体病毒科(Totiviridae全病毒科)金色病毒科(Chrysoviridae):金色病毒属(Chrysovirus
16、)分体病毒科(Partitiviridae)低毒性病毒科(Hypoviridae):低毒性病毒属(Hypovirus),正链核糖核酸病毒The positive-sense ssRNA Viruses,光滑病毒科(Leviviridae):光滑噬菌体科 二顺反子病毒科(Dicistroviridae)微小核糖核酸病毒科(Picornaviridae):小核糖核酸病毒科 随伴病毒科(Sequiviridae伴生病毒科)豇豆镶嵌病毒科(Comoviridae)马铃薯Y病毒科(Potyviridae)杯状病毒科(Caliciviridae):嵌杯病毒科 肝炎病毒科(Hepeviridae)星状病毒科
17、(Astroviridae)野田病毒科(Nodaviridae)四病毒科(Tetraviridae)西红柿丛矮病毒科(Tombusviridae),反链核糖核酸病毒The negative-sense ssRNA Viruses,单股反链病毒目(Mononegavirales)副黏液病毒科(Paramyxoviridae):麻疹病毒 副黏液病毒亚科(Paramyxovirinae)肺炎病毒亚科(Pneumovirinae)肺病毒亚科 炮弹病毒科(Rhabdoviridae)杖竿状病毒科 纤维病毒科(Filoviridae),第六节 反义核酸,一、反义核酸概述反义核酸是指能与特定mRNA精确互补
18、、特异阻断其翻译的RNA或DNA分子（antisense nucleic acid）。利用反义核酸特异地封闭某些基因表达，使之低表达或不表达，这种技术即为反义核酸技术。它包括反义RNA、反义DNA和核酶(ribozymes)三大技术。,反义核酶作为一种基因下向调节作用因子，在抑制一些有害基因的表达和失控基因的过度表达上发挥着重要作用。,二、反义核酸的作用原理,反义核酸目前有三种来源：一是利用固相亚磷酰胺法人工合成的短小反义寡聚核苷酸antisense oligodeoxy nucleotides,AONs)；,二是更具有实用价值的人工表达载体，包括单个基因和多个基因的联合反义表达载体，它是利用
19、基因重组技术将靶基因序列反向插入到载体的启动子和终止子之间，通过转录可源源不断产生反义RNA分子；三是天然存在的反义核酸分子，但目前分离纯化尚存在困难。,三、反义核酸的作用特点,反义核酸作为基因治疗药物之一，与传统药物相比具有诸多优点。1)高度特异性：反义核酸药物通过特异的碱基互补配对作用于靶RNA或DNA，犹如“生物导弹”。2)高生物活性、丰富的信息量；反义核酸是一种携带特定遗传信息的信息体，碱基排列顺序可千变万化，不可穷尽。,3)高效性：直接阻止疾病基因的转录和翻译。4)最优化的药物设计：反义核酸技术从本质上是应用基因的天然顺序信息，实际上是最合理的药物设计。5)低毒、安全：反义核酸尚未发
20、现其有显著毒性，尽管其在生物体内的存留时间有长有短，但最终都将被降解消除，这避免了如转基因疗法中外源基因整合到宿主染色体上的危险性。,根据宿主病变的不同，基因治疗的策略也不同，概括起来主要有下列几种：（一）基因修正（二）基因替代（三）基因增强（四）基因抑制和（或）基因失活,四、基因治疗的策略,四、反义核酸的应用,自1978年反义核酸概念提出，到1998年10月第一个反义核酸药物在美国问世，标志着反义核酸理论已趋于成熟。人类基因组计划的进展为反义核酸技术的发展奠定了坚实基础。,新一代反义核酸药物获得FDA 批准,2004 年12 月中上市的Eyetech 公司用于抑制老年人眼疾的Macugen。
21、它是一个经20 kD PEG 修饰，含28 个碱基的合成寡核苷酸药物pegaptanib sodium(PEG-28 b Oligonucelotide aptamer)。它是VEGF 拮抗物，可抑制老年人因新血管形成引起的眼斑恶化乃至眼盲。相信新的技术将陆续给寡核苷酸药物带来更广阔的应用市场。,抗 肿 瘤 研 究,现代医学认为,导致肿瘤的根本原因在于基因的异常变化,因此要治疗肿瘤也应该从“治本”出发,这恰恰是反义技术的特点,可以人工设计一段与致癌基因互补的反义核酸以将致癌基因封闭。1989 年 Rivera利用人绒毛膜促性腺激素的反义 RNA成功地使人肺癌细胞的致病力消失。,抗 病 毒 研 究,国外在 HIV等方面,国内在 HBV等方面都作了大量工作,并取得了很大进展。体外研究,Goodarz等发现针对 HBV 基因 S区的 4 个位点（SP2 启动子转录 mRNA 帽区、Pre-s2基因内部、S基因翻译起始区、S基因起始区下游10个碱基区）的ASON对乙型肝炎表面抗原 HBsAg 有明显的抑制作用,其中以 S基因翻译起始区的作用最强,抑制率高达96%。,
