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1、动物细胞工程,单克隆抗体等,动物细胞工程常用的技术,动物细胞培养,动物细胞核移植,动物细胞融合,是其他动物细胞工程技术的基础。,植物组织培养,植物体细胞杂交,回顾：,植物细胞工程常用的技术手段有哪些？,动物细胞工程,(一).动物细胞培养,(三).动物细胞融合,(四).单克隆抗体,(二).细胞核、胚胎移植,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,单个细胞,加培养液,制成,细胞悬液,培养瓶中培养,部分细胞“癌变”，无限传代,动物细胞培养不能最终培养成动物体,50代细胞,原代培养,传代培养,细胞贴壁,剥离、分瓶,细胞株,细胞,细胞系,动物细胞培养过程：,增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养,
2、去掉组织间蛋白,动物细胞培养过程中几个重要的概念,（1）细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。,（2）接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,动物细胞培养特点：,贴壁生长、接触抑制：,原代培养(primary culture),定义：指将要培养的动物细胞取出后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬液，再将该悬液放入培养瓶中培养。,过程：从动物机体中取出组织 剪碎 加胰蛋白酶 细胞游离 制成细胞悬液 将细胞接种到培养瓶内 培养（1-2天换一次培养液
3、）细胞贴壁生长 长成单层细胞,定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养,传代培养(subculture),细胞株：从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。,细胞系：传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。,细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。,知识点小结：各个新名
4、词之间的联系,遗传物质改变,1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等）3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.27.44、气体环境 O2和CO2（95%空气和5%CO2）,动物细胞培养条件,保证细胞顺利的生长增殖,能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？,动物细胞培养技术的应用,（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。,（4）用于检测有毒物质,（3）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。,（5）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据,（2）作为基因工程的受体细胞,获得细胞,细胞的全能
5、性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,或细胞分泌蛋白,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清促生长因子,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,6、植物细胞和动物细胞培养的比较,多莉羊的培育过程,细胞核移植,材料1:1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？,人-鼠(想像图),灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）,植物、动物细胞融合
6、的比较,2、诱导动物细胞融合的方法,3、动物细胞融合的用途,制备单克隆抗体,：仙台病毒,紫外线,丧失感染活性（不感染细胞）,保留融合活性（诱导细胞融合）,物理法化学法生物法,思考：（1）请概括单克隆抗体的概念（2）根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，思考实验过程与原理？（3）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？制备过程为何要经过两次筛选？,单克隆抗体,提出问题：长期以来，人们为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度
7、低，反应不够灵敏。,1.概括单克隆抗体的概念,单克隆抗体的制备,实验目的:制备单克隆抗体.实验原理：实验材料：小白鼠实验器材：培养皿、针筒等等。实验过程：？,2.根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，回答下列问题：,B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。,单克隆抗体的制备,抗原,小鼠,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,细胞融合，筛选,细胞培养,筛选，继续培养,体外培养,体内培养,单克隆抗体,3、单克隆抗体的应用,（1）作为诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速,（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（2）运载药物,生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）,(“生物导弹”单抗导向，药物为弹头),有梦想，才会有创造！,已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人兔、人鸡、鼠兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌鸡、人胡萝卜 等细胞的融合。,想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。,生物种间杂交想像图,总结：,植物组织培养是植物细胞工程技术的基础。动物细胞培养 是各种动物细胞工程技术的基础。为达到特定的目的，许多细胞工程技术往往需要同时运用。,
