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1、人耳鼠,“人耳鼠”再出风头 2001年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎与身子一般大小的“人耳”。这只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。,在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。,“人耳鼠”是怎样制作出来的呢？是人的耳朵基因插进老鼠的基因了吗？不是的，这与细胞的研究有关。据“人耳鼠”的制作者曹谊林教授说，人耳是先用一种高分子化学材料聚羟基乙酸做成人耳的模型支架，然后让细胞在这个支架上
2、繁殖生长。等“耳朵”长好后，就在无毛鼠的背上割开一个口子，植入“人耳”并缝合。过一段时间后，“人耳”的支架会自己降解消失，于是“人耳”就“长”在老鼠的背上。,思考与回忆：1、动物细胞全能性特点？随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。3、动物的细胞培养的理论依据（原理）？细胞增殖,动物细胞培养,动物细胞融合,单
3、克隆抗体技术,核移植,动物细胞工程常用技术,其它动物细胞工程的基础,专题2.2动物细胞工程,2.2.1动物细胞培养和核移植技术,一、动物细胞培养的应用和概念：,1、概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.,2、原理：细胞增殖,定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。,胰蛋白酶处理,取出组织,胚胎或幼龄动物器官组织,剪碎,单个细胞,细胞悬液,转入培养瓶内培养（贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。,原代培养,3：过程,图示,原代培养,强调一：细胞贴壁过程,细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在
4、瓶壁上，称为细胞贴壁。,培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,强调二：接触抑制,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,10代细胞,50代细胞,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,（分解弹性纤维）,过程：,接触抑制,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,10代细胞,50代细胞,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,（分解弹性纤维）,过程：,动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。,接触抑制,定义：当原代培养的细胞处于接触抑
5、制后,用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程）,传代培养,细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。,强调：细胞系、细胞株（了解即可，老课本体系）,细胞系：传代50代以后不能再传下去，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。,3、总结：动物细胞培养过程,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,配置细胞悬液,剪碎用胰蛋白酶处理,10代细胞,转入培养瓶,40-50代细胞,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液稀释,传代10代以内，遗传物质不改变
6、，保持正常二倍体核型。,传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变）,为什么用胰蛋白酶处理？,分瓶传代培养,原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制,继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。,细胞株：一般说遗传物质未改变,细胞系：遗传物质已改变,原代培养,4.动物细胞培养的条件:,1）无菌无毒 的环境：,适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.50.5。适宜的酸碱度：,液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。,4）气体环境：,2）营养：,3）温度和pH
7、：,“95空气+5CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH。,对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。,补充合成培养基中缺乏的物质,问题3：为什么用胰蛋白酶处理？,问题1：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？,因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。,问题2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。,动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和细胞
8、外的其他成分酶解，获得单个细胞。,问题4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？,动物细胞培养的最适PH值为，胰蛋白酶作用的适宜PH为，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为的动物细胞培养中无活性。,问题5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？,控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。,问题6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？,问题7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动
9、物个体,问题8、动物细胞培养的原理：,细胞增殖。,问题9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代以内，为什么？,10代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。,5.动物细胞培养技术的应用:,1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物,植物组织培养和动物细胞培养的比较：见导学教程P31表,二、动物体细胞核移植技术和克隆动物,1、定义：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚
10、胎最终发育为动物个体.,3、分类：胚胎核移植、体细胞核移植。,胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。,动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难,2、原理：动物细胞核具有全能性,二、动物体细胞核移植技术和克隆动物,1、定义：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.,3、分类：胚胎核移植、体细胞核移植。,胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。,动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难,2、原理：动物细胞核具有全能性,4、体细胞核移植过程-示动物克隆-无性繁殖,1.）克隆羊多利培育过程：,另一
11、头绵羊的子宫,特别注意：克隆动物性状与供体动物完全一样吗？,不可能！因为：一、供体动物只提供细胞核，而细胞质中的遗传物质（如线粒体DNA）来自于受体卵母细胞.二、生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的影响。,供体,受体,代孕受体,1、写出AB所代表细胞工程名称：a表示：b表示:,2、实施细胞工程时，所需受体细胞大多采用卵母细胞的原因：,体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。,3、多利面部毛色是：根据遗传学原理说明判断依据。,4、若黑面绵羊的基因型为AA,白面绵羊的基因型为aa，则克隆羊的基因型为,核移植,胚胎移植,白色,多利全部的核基因都来自白面绵羊,aa,取供体细胞传代
12、培养10代以内的细胞.为什么？,用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（M中期）为什么？,激活方法：激活目的：,促融方法：电刺激,胚胎移植至代孕受体内,妊娠、分娩,2.）核移植流程,供体：优质高产奶牛,受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）,1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。,有人说它三个母亲，对吗？,取供体细胞,取卵母细胞,供体细胞培养,培养到 M中期,卵母细胞去核,供体细胞注入去核的卵母细胞,供体核进入受体卵母细胞,重组胚胎,代孕母牛,生出与供体遗传物质基本相同的个体,2.过程：,4.体细胞核移植技术的应用前景,畜牧生产方面：培育良种动物。保护濒危物种医药卫生方
13、面：生产医用蛋白、器官和组织移植,5.体细胞核移植技术存在的问题,（1）胚胎成活率低（2）动物健康问题（3）克隆动物安全性,专题2.2动物细胞工程,2.2.1动物细胞融合与单克隆抗体,1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。,一、动物细胞融合,细胞杂交：不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。,杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,2、诱导融合的因素生物法：灭活的病毒诱导融合.(动物细胞融合所特有的。这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖
14、蛋白可能还有促进细胞融合的功能。丧失感染性,保留融合活性)化学法：聚乙二醇PEG诱导融合.物理法：电激融合,病毒颗粒黏 附细胞表面,细胞膜连接,细胞膜被 病毒颗粒穿通,细胞融合、形成杂种细胞,二.动物细胞融合,思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,3、动物细胞融合技术的应用,意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。应用：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法,（同左）
15、,灭活的病毒,物理（离心、振动、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,人们获得抗体的传统方法是?将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体这种方法的缺点是什么?效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？B淋巴细胞在体外不能无限增殖。,二：动物细胞融合的成功应用 单克隆抗体
16、的制备,思考,单克隆抗体的制备极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。,动物特异性免疫分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,-Bn）细胞融合三种融合方式:（BB;BG;GG）第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,
17、B2G-BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。提取单克隆抗体。,1、单抗的制备过程要点：,3）为何要进行两次筛选？,4）、如何进行第2次筛选？,培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。,第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。,问题强化：,1）、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,2）、
18、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体,1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点.2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗。生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）,2、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，可大量制备。,3、单克隆抗体的应用,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体
19、的实验方案,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,例3：,具有一定的流动性,C,有丝,不变,抗体能与抗原发生特异性结合的特点,1.动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合B胚胎移植C动物细胞培养D核移植,课堂练习;,在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同,.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓
20、瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A BC D,C,1、科学家用小鼠骨髓细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2.动物细胞融合的目的中最重要的是-（）A.克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同 C.所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞,B,D,4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（）A.
21、由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,例题2（1）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，将抗原注射到小鼠体内，可获得(多选)（）AT淋巴细胞 B效应B淋巴细胞 C抗体 D记忆细胞（2）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，正确的是(多选)（）AB淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台 病毒或聚乙二醇诱导 B融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克 隆抗体 C体外培养时，一个B淋巴细胞可以产生一种抗体，但不 能无限增殖 D单克隆抗体与常
22、规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显,BCD,ACD,再见,1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是-（）A细胞系 B细胞株 C原代细胞 D传代细胞,2、动物细胞工程技术的基础是-（）A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培养,A,D,3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）A.容易产生各种变异 B具有更强的全能性 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力强,D,4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（）A.培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植
23、物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。,A,体验高考(2008宁夏理综),(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面 时，细胞会停止分裂增增殖，这种现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成的细胞层数是。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来，需要使用的酶是。,相互接触,接触抑制,单层,胰蛋白酶,体验高考(2008宁夏理综),(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现 的现象；但极少数可以连续增殖，其中有些会因遗传物质发生改变面变成 细胞，该种细胞的黏着性，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量。,衰老甚至死亡,不死性,降低,减少,1.下列哪项属于克隆（）A将鸡
24、的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞 D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系,D,2.（多选）美国杜克大学医疗中心的一个研究小组利用成年猪的动脉血管细胞和模拟胚胎环境的新型生物反应器,成功地在实验室里培育出新的动脉血管，这种血管的外形和功能都与真的血管一样,这一研究成果是生物组织培养领域的重大进展。下列关于以上技术的叙述中，正确的是（）A属于“克隆”B可能要利用去核卵细胞C关键是激发血管细胞的全能性 D关键是激发血管细胞发育成血管的潜能,ABD,3.从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵
25、细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状（）A、难以预测 B、像甲 C、像乙 D、像丙4.生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是（）A将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体B将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体D将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体,B,C,5.下图所示为用两栖动物卵所做的实验图解，据图回答下列问题：,蝌蚪肠上皮细胞核中含有青蛙发育所
26、需的_，重新组合的细胞相当于蛙的_ 细胞，经过_ 和_形成组织和器官。,全部基因,受精卵,细胞分裂,细胞分化,本实验结果说明_具有全能性，图中A过程采用的技术手段称做_。,动物体细胞核,核移植技术,1、基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞AAAaa BAaBb CAabb DBBbb2、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞A.B.C.D.3、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是A、融合的原理 B、融合的优点 C、融
27、合的诱导手段 D、融合的过程,C,C,C,4.科学工作者用绿色和红色荧光材料，分别标记人和鼠的细胞膜上的蛋白质。当两个标记细胞融合成一个细胞后，起初一半膜发出绿色荧光，另一半膜发出红色荧光，一段时间后，两种颜色的荧光点均匀分布，如图所示。请分析回答：,该实验结果说明了细胞膜，这是因为若在两个细胞融合成一个细胞后，将融合细胞置于0条件下再保持40min，则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧光，另一半膜发红色荧光，这说明,具有一定的流动性,构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质大都是可以运动的,膜的流动性受温度影响，在低温下分子的运动受抑制,1、下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称为
28、(),A、抗体、T淋巴细胞 B、抗原、T淋巴细胞C、抗体、B淋巴细胞 D、抗原、浆细胞,D,2、关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是A、可以制成诊断盒用于疾病的珍断 B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C、可以利用基因工程技术生产 D、可以在生物体内生产，不能体外生产3、“生物导弹”是指A、单克隆抗体 B、带有特定药物的单克隆抗体C、杂交细胞 D、B淋巴细胞,D,B,4.单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是A特异性强、灵敏度高 B与抗癌药物结合可制成“生物导弹”C体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体D由效应B细胞与骨髓瘤细胞融
29、合而成的杂交瘤细胞分泌,C,5.下图为细胞融合的简略过程（只考虑两个细胞的融合）请据图回答：,I若A、B是基因型分别为rrHH、RRhh两个烟草品种细胞的花粉，且这两对基因位于非同源染色体上，由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于800勒克斯时，都不能生长。实验开始时必须用 除去不利于原生质体融合的物质。实验中除获得杂种细胞外，还有基因型为 的融合细胞。,纤维素酶和果胶酶,rrHH、RRhh,设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，方法：将杂种细胞培养成杂种植株依据的理论基础是。II若该过程是制备治疗“SARS”病毒的单克隆抗体，A为人B淋巴细胞（染色体组成为
30、2AXX=46），B为鼠骨髓瘤细胞（染色体组成为2AXX=40）用单克隆抗体制成“生物导弹”主要利用了抗体的 特性。A细胞来自于，杂种细胞C共有 个染色体组。杂交瘤细胞在体外培养时与植物组织培养的主要区别是培养基要用 培养基。（物理状态），培养基中除了添加必要的营养物质为还需加入。,置大于800勒克斯光照下培养，收集分化的 细胞团,细胞的全能性,抗体与抗原结合，发挥特异性免疫效应,非典患者,4,液体,动物血清,6.右图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解回答问题：,给小鼠注射抗原的目的是_。在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有_ 的特性。由图中
31、可看出，单克隆抗体制备过程运用了_和_的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是可用_。动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有_。,获得能产生相应抗体的B细胞,既能无限增殖，又能产生特定抗体,动物细胞融合,动物细胞培养,灭活的病毒,动物血清,在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散开，以利于细胞融合，可用_处理离体组织细胞使之分散开。图中有两次筛选过程，其中步骤的目的是筛选出_，步骤的目的是筛选出_ _。,胰蛋白酶,杂交瘤细胞,能产生特定抗体的杂交瘤细胞,已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能
32、被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：（1）试管中除融合的杂种细胞外，还有 种融合细胞。（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出 杂种细胞，并说原理。方法：。原理：,培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞,加入氨基嘌呤后,使D合成的途径阻断,所以仅D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖,再见,思考与探究,2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？,动物细胞培养不需经过脱分
33、化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。,3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为34 t。（1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。,可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传
34、物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。,该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出现近亲繁殖而引起种质衰退。,（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？,从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。,4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。,研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。,
