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1、NT-proBNP生物学基础和化验室指标的应用,潘柏申教授,内容概要,NT-proBNP生物学基础利钠肽家族脑钠肽BNP的生理功能脑钠肽BNP的分泌和释放BNP和NT-proBNP的清除NT-proBNP化验室指标的应用影响NT-proBNP的检验前因素 影响NT-proBNP的检验因素 影响NT-proBNP的分析因素,利钠肽家族（6种心血管型肽）,ANP（心房利钠肽，28肽）ANP存在于成人的心房，胚胎和新生儿的心室组织和肥大的心室。在慢性心力衰竭等情况下，心房压增加时，心房对其延展作出反应而分泌ANP。BNP（B型利钠肽，32肽）主要存在于心脏中；心房、更主要的心室肌细胞是BNP的主要来
2、源。最近发现心脏成纤维细胞等也可以产生BNP。CNP（C型利钠肽，22或53肽）CNP主要在中枢神经系统和血管组织合成。不同于ANP和BNP，心脏组织中几乎没有CNP。Urodilatin（U型利钠肽，32肽）由肾脏以旁分泌的方式分泌，具有利钠利尿作用。DNPVNP,利钠肽家族（3种NP受体）,NP受体A：作为鸟苷酰环化酶配对受体起生物学效应NP受体B：作为鸟苷酰环化酶配对受体起生物学效应 NP受体C：作为短的细胞质主受体起清除肽分子和可能的调节细胞增生作用,利钠肽家族在种群中的分布非常保守,硬骨鱼，两栖动物，爬行动物，鸟类：内分泌和旁分泌都能在心和脑中被发现哺乳动物（人类，猫，牛，狗，家鼠，
3、大鼠，羊和猪）：内分泌和旁分泌都能在心和脑中被发现软骨鱼（软骨鱼纲）：只发现了CNP一些硬骨鱼：ANP，CNP，VNP鲨鱼和盲鳗：CNP,NPs功能的进化,调节渗透压,容量调节,排钠激素,水钠排泄的减容激素,鱼类,哺乳动物,人类BNP的基因表达,BNP基因位于人类1号染色体，与ANP基因（居于BNP上游约约8千个碱基）呈前后串联关系 5端上游非翻译区序列有3个外显子和2个内含子。BNP基因的外显子1编码了5端非翻译区和部分pre-proBNP（26个-氨基酸信号肽和最初的18个BNP前体氨基酸）。外显子2编码了氨基酸45-129外显子3编码了5末端氨基酸（130-134氨基酸）和3”侧端富含A
4、TTTA非稳定基序的非翻译区,利钠肽的加工和分泌（5A figure 1）,J Am Coll Cardiol 2007;49:11931202,B型利钠肽（BNP）基因的重要调节因子（5A table1）,AP-1活化蛋白-1；cAMP环磷腺苷；CaMK钙/钙调节蛋白依赖蛋白激酶-；GSK3糖原合成酶激酶-3；MAPK丝裂原激活蛋白激酶；MCAT肌-CAT结合点；MKK6丝裂原激活蛋白激酶激酶6；NF-AT活化T细胞的核因子；PI3K磷脂酰肌醇3-激酶；PKC蛋白激酶C；SSREs剪切压力反应元素；TRETPA-反应元素,Hypertension 1996;27:715722.Peptide
5、s 2005;26:944 956.,利钠肽的生物功能（1）,利钠肽的生物作用（2）,对心血管的作用促进血管内液体转移至血管外，静脉扩张；增加尿钠排泄和降低心脏前负荷；抑制脑和外周交感神经系统，抑制自主神经释放儿茶酚胺，降低中枢神经系统交感输出信号，防止血压升高；降低迷走神经输入阈值，促进副交感兴奋性，抑制通常伴随前负荷下降而出现的心动过速反射和血管收缩；,正常心脏,心衰,BNPNT-proBNP,脑钠肽的合成与释放,ANPNT-proANP,脑钠肽的演变,B型利钠肽和NT-proBNP的清除,BNP的清除 BNP通过受体介导与NP受体C结合被清除 BNP能通过血流中中性肽链内切酶的活性所清除
6、 BNP能被包括肾脏在内的高血流量器官通过被动排泄（或局部区域内由中性内切酶降解）所清除 NT-proBNP的清除 缺乏主动清除机制 在高血流量的器官床内被清除（肌肉，肝脏，肾脏等）机制研究显示肾脏对NT-proBNP和BNP的清除能力相等,NPs生物学的小结,NP系统在物种间高度保守并有着复杂的基因调节机制。proBNP1-108和NT-proBNP1-76没有或几乎没有生物学活性，BNP3-32的生物学活性较BNP1-32弱。BNP通过多种机制被清除，包括受体清除，中性内切酶降解和由多种器官被动清除。有多种器官可能以被动方式清除NT-proBNP。机制研究显示肾脏对NT-proBNP和BN
7、P的清除能力相等,NT-proBNP化验室指标的应用,影响NT-proBNP的检验前因素 影响NT-proBNP的检验因素 影响NT-proBNP的分析因素,影响NT-proBNP的检验前因素,影响BNP和NT-proBNP的检验前因素,NT-proBNP的检测可以在各种不同的标本中进行，包括EDTA化血浆、血清和肝素化血浆。但EDTA化血浆中测得的NT-proBNP较在血清或肝素化血浆中低（根据方法的不同可能低10%-13%）BNP检测只能用硅化玻璃管采样，NT-proBNP分析的血样可以抽进玻璃或塑料管中而不会改变其稳定性 检测前的非规律运动对BNP和NT-proBNP的影响尚未有报导姿势
8、对于NT-proBNP值并没有太大的影响 没有发现NT-proBNP有持续的昼夜节律变化。但在心衰患者中有报道发现BNP的一个较小但重要的昼夜节律变化。在不同的储存条件下血清或血浆NT-proBNP的浓度都较稳定，如室温下保存7天，4 保存10天，-20 或更低温度下保存若干个月。BNP在室温条件下甚至在冷冻情况下都不稳定,室温下在EDTA化血浆中NT-proBNP的短期和长期稳定性优于BNP（11A figure1),Clin Chim Acta 2003;338:107115.,2-80C在EDTA化血浆中NT-proBNP的短期和长期稳定性优于BNP（11A figure1),Clin
9、Chim Acta 2003;338:107115.,-200C在EDTA化血浆中NT-proBNP的短期和长期稳定性优于BNP（11A figure1),Clin Chim Acta 2003;338:107115.,影响NT-proBNP的检验因素,现有NT-proBNP检测的方法间的最大偏倚只有20，偏倚主要是由于不同检验者采用的不同方法，较容易校正（13A figure2A）,Clin Chem Lab Med 2005;43:12631273.,BNP检测方法均基于不同的认证标准，使用针对原始BNP分子不同部分的抗体，且定标器也不同，同一样本通过不同的方法检测BNP结果的差异可能40
10、。（13A figure2B）,Am J Clin Pathol 2005;123:439445,影响NT-proBNP的分析后因素,年龄和性别是影响正常人群NT-proBNP数值的因素（14A figure1）,Clin Biochem 2004;37:210216Eur Heart J2005;26:2269 2276.,BNP和NT-proBNP的生物学变异,对连续检测中的差异是否有显著意义进行解释时，需要考虑到整体的生物学变异 一组得到良好控制的HF患者中，NT-proBNP 的1周参考变异值为23一组得到良好控制的HF患者中，BNP 的1周参考变异值为43NT-proBNP浓度的最低
11、生物学变异出现在NT-proBNP1300ng/L时。,NT-proBNP化验室指标应用的小结,NT-proBNP在临床实验室检测非常方便，在各种温度下都稳定，并可使用多种标本种类。如果检测NT-proBNP的不同方法采用同等的抗体和定标器，所得的结果的一致性好，不同检测方法的检测差异降至最小。NT-proBNP即时床边诊断仪器已上市；这些仪器与自动化NT-proBNP检测法的结果值能达到一致。NT-proBNP的参考值在女性中较高，然而在两种性别中其均随年龄而升高，在患者中评估NT-proBNP水平时只应考虑年龄这一因素，而不是性别。在评估NT-proBNP值变化的显著性时，还应考虑其生物学变异。在分析稳定型心衰患者时，其生物学变异为2540。,
