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1、2024实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识预后评估等方面受到临床关注。为促进临床有效选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心（中国医科大学附属第一医院）组织相关领域的学术专家，对外周血细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞亚群精细分型、髓源性抑制细胞和细胞因子的临床应用价值进行了充分总结，并撰写了专家共识，同时对外周细胞免疫功能实验室检测指标和方案或方法给出了推荐和参考方向，以期为实体肿瘤患者的精准诊疗提供帮助。T细胞介导的细胞免疫应答是宿主抗肿瘤免
2、疫最主要的途径，也是肿瘤发生免疫逃逸形成免疫抑制的关键靶点。肿瘤微环境的局部细胞免疫，以及基于脾脏、淋巴结和血循环的外周细胞免疫的功能状态与肿瘤发生发展和治疗转归密切相关。基于外周血的细胞免疫功能检测在筛选免疫治疗受益者、监测免疫相关不良反应（immune-reIatedadverseevents,irAE）及评估肿瘤疗效和预后方面的作用越来越受到临床关注。如何正确选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，目前国内外尚无统一规范。为此，中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心组织在肿瘤免疫监测
3、和流式细胞术分析淋巴细胞亚群领域经验丰富的专家，结合国内外进展，撰写实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测的专家共识，旨在帮助临床合理选择免疫指标评估外周血细胞免疫功能，以辅助实体肿瘤的精准诊疗。鉴于细胞免疫功能在实体肿瘤免疫治疗中的重要价值，共识编写工作组关注细胞免疫应答从启动到发挥效应功能的全过程，针对参与细胞免疫应答的效应细胞、辅助细胞、负向免疫调节细胞等多种细胞亚群和免疫分子进行了临床研究证据的整合，筛选出在肿瘤免疫治疗监测、预后评估中具有指导价值的外周血细胞免疫功能实验室指标，并结合临床检验实践归纳为T淋巴细胞亚群精细分型,髓源性抑制细胞（myeIoid-derivedsuppress
4、orcell,MDSO亚群分析和细胞因子水平检测三大类，并对这些指标的检测方案和临床应用选择作出了推荐。共识形成方法共识发起机构：本共识由中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心共同发起。共识工作组：成立多学科工作组，包括以检验科为主，血液科、肿瘤内科、放疗科等的多学科专家共61位，来自全国31个省、自治区、直辖市的54家医疗机构，包括执笔人、证据收集人和专家组成员。共识目标人群：实体肿瘤患者。共识使用者：检验医师/检验技师；肿瘤相关专业医师。共识制订目的：指导临床合理选择免疫指标评估外周血细胞免疫功能
5、，以辅助实体肿瘤的精准诊疗包括筛选免疫治疗受益者、监测免疫不良反应、评估疗效和预后等。问题的收集和遴选：共识工作组组长及执笔人围绕“实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测”进行文献调研，并在专家组成员中广泛咨询征集共识的主要内容和核心问题，经研究梳理后确定了5个方面（共识制订的目的、共识使用者、检测标志物、检测方案或方法、临床应用）共10个核心问题。文献的检索和筛选：共识工作组组长、执笔人及证据收集人聚焦参与细胞免疫应答的效应细胞、辅助细胞、负向免疫调节细胞等多种细胞亚群和免疫分子在实体肿瘤免疫治疗受益者筛选、免疫不良反应监测、疗效和预后评估等方面的临床意义，通过检索Pubmed梳理国内外临床研
6、究证据。文献检索策略和筛选流程见图1o图1文献检索策略和筛选流程图共识的提出和形成：在充分评价所得国内外证据的基础上，共识工作组组长及执笔人通过共识会议完成了“专家共识讨论稿”。通过函审形式由全体专家组成员对讨论稿的内容提出修改意见和建议，再由执笔人修改形成了“专家共识修改稿”，并提出了10条专家共识。共识编写工作组组长编制了“实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识修改稿的专家评审意见表“，通过函审形式由全体专家组成员进行评审。本共识对证据等级与推荐等级的定义和具体表述见表1、2o参考德尔菲法就推荐意见达成共识。根据评审结果，由执笔人修改形成“专家共识审核稿”，通过函审形式提交给全体专家
7、组成员做最后审核。共识工作组组长及执笔人根据反馈意见和建议完成修改、补充后形成“实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识“，通过共识会议定稿，包含10条专家共识共17项实验室检测指标的临床应用选择建议。共识已在“国际实践指南注册与透明化”平台完成注册和计划书提交，注册号为PREPARE-2023CN306。表1本专家共识的证据分级gIasme*自BRB来自18较高的回S性观察性斫交；膜号TSS机对蟀Ift庞斌蛉或为检BJW=性研究OfiIHB来自a较皿财照I施斌若或类闺如SMMl现分的究；而ITmH量8的SlBHl队列研究；fWCl三三5三;再例报苫；专家共识表2本专家共识的推荐分级而砺定
8、义一强此承共jRHAaii三ff持且专家JE率280%:比蒙共去巡证18支持且专家？E290%中此条共识加城3支特且80%专家准淳率270%;此条共识寿8证JB支持且90%专茨推算奉280：此条共mMR三三持且专JKEm290%劣此款共阴睥田B支挎目80%专家？荐霞23：比索堀MCtBiiBH支持且90%专家E率280%不忖R?此条共识存A、证JB支挎但京雍尊率70%;2t条共次有C级证JH三J但专知E率80%T淋巴细胞亚群精细分型T淋巴细胞亚群精细分型是指对T细胞功能亚群、分化亚群以及功能表型（如活化表型、增殖表型、衰老表型和耗竭表型等）进行评估。利用流式细胞术检测代表不同亚群和功能表型的特
9、定分子标志物，对其进行定量检测。一、检测指标(一)功能亚群1.细胞毒性T细胞(cytotoxicTcell,Tc细胞)：TC细胞又名CD8+T细胞，是杀伤肿瘤细胞最主要的效应细胞，以CD3+CD8+为分子标记。2 .辅助性T细胞(helperTcelI,Th细胞)：Th细胞又名CD4+T细胞，辅助CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能，以CD3+CD4+为分子标记；CD4+T细胞活化后分化为不同的效应亚群，Th各亚群之间的平衡有助于抗肿瘤免疫应答强度和免疫稳态的维持，其中Thl亚群产生的细胞因子IL-2对CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能至关重要。3 .I型NKT细胞(invariantnat
10、uralkiIIerTcelI,iNKT细胞)：iNKT细胞通过激活CD8+T细胞、促进CD8+T和CD4+T细胞的免疫记忆、调节免疫抑制细胞如MDSC的功能等促进细胞免疫应答，以CD3+CD16+CD56+V24+VB11+或CD3+CD16+CD56+Vc24+Jc18+为分子标i己。4 .调节性T细胞(reguIatoryTcell,Treg细胞)：Treg细胞是CD4+T细胞的免疫负向调节亚群，通过接触性抑制和分泌免疫抑制因子等途径抑制CD4+T和CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能，从而抑制细胞免疫应答，以CD3+CD4+CD25+CD127-/1ow或CD3+CD4+CD25+Fo
11、xP3+为分子标记。(二)分化亚群1.初始T细胞(naveTcelI,TN细胞)：TN细胞是未受到抗原刺激的静息细胞，介导初始免疫应答的启动，TN细胞的比例是反映细胞免疫动员储备能力的指标，以CD45RA+CCR7+CD95-或CD45R0-CD62L+CD95-为分子标记。2.记忆T细胞（memoryTcell,TM细胞）：TM细胞介导记忆免疫应答，随着分化进程进一步分为：（1）T记忆干细胞（Tmemorystemcell,TSCM细胞），以CD45RA+CCR7+CD95+或CD45R0-CD62L+CD95+为分子标记；（2）中央记忆T细胞（centraImemoryTcell,TCM细
12、胞），以CD45RA-CCR7+或CD45R0+CD62L+为分子标记；（3）效应记忆T细胞（effectormemoryTcell,TEM细胞），以CD45RA-CCR7-或CD45R0+CD62L-为分子标记；（4）终末分化效应记忆T细胞（terminaIIydifferentiatedeffectormemoryTcelI,TEMRA细胞），又称终末分化效应T细胞（terminallydifferentiatedeffectorTcell,TTE细胞），以CD45RA+CCR7-或CD45R0-CD62L-为分子标记。TSCM细胞、TCM细胞和早期TEM细胞主要介导记忆免疫应答；晚期TE
13、M细胞和终末分化的TEMRA细胞主要发挥效应功能，但其增殖能力差，存活时间短。TM细胞亚群的比例是反映细胞免疫记忆储备能力的指标。（三）功能表型1.活化表型：推荐检测HLA-DRCD38,HLA-DR在T细胞活化晚期稳定性表达；CD38在TN细胞中是组成性表达的，在静息记忆细胞中表达下调，在活化T细胞中表达升高。2 .增殖表型：推荐检测Ki-67,Ki-67为一种核蛋白，在细胞分裂中发挥重要调控作用，在G1-M期表达水平升高，但在GO期不表达或低表达。3 .衰老表型：推荐检测CD28CD27CD57,CD28是T细胞活化必须的协同刺激分子，CD27是T细胞的一种共刺激分子，CD57是T细胞分化
14、至终末期的标记。在T细胞分化中，分化早期阶段TN、TSCM和TCM细胞一般表达CD28和CD27,存活时间长；终末分化阶段TEMRA细胞丢失CD28、CD27并伴随CD57的表达，提示免疫衰老，存活时间短；中晚期分化阶段的TEM细胞具有异质性，其中CD28+CD27+/-TEM细胞生存时间长，主要发挥记忆作用；而CD28-CD27+/-TEM细胞衰老程度高，生存时间短，偏效应作用。TN细胞若缺乏CD28,将不能启动初始免疫应答，提示T细胞无能；TM细胞分化过程中，CD28表达下调，提示T细胞衰老。CD28+T细胞的比例是反映细胞免疫储备能力的指标；CD28-T细胞的比例是反映T细胞无能和衰老的
15、指标，结合CD27和CD57用以鉴别衰老T细胞，CD28和CD27表达下调、CD57表达上调提示T细胞衰老。4 .耗竭表型：以高表达抑制性受体且增殖能力、生存能力和效应功能下降为特征，推荐检测的抑制性受体以程序性死亡分子1（programmeddeath-1,PD-D为主，辅以细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4/淋巴细胞激活基因-3/T细胞免疫球蛋白黏蛋白3,同时结合活化表型和增殖表型综合评估。二、检测方案推荐T淋巴细胞亚群精细分型涉及的分子标志物数量较多，推荐同时标记多种抗体进行淋巴细胞亚群精细分型分析。结合临床常规开展的TBNK淋巴细胞亚群检测，本共识推荐T淋巴细胞亚群精细分型检测方案（表3和图
16、2）o表3流趣球雨游崛传撤8分里标志物组合方宴BlCD3CMCD25CD12710三612CMS3CD4aCD45RACCR7CD9SFOl3CD3SHlADRKCD57CD3CD4aCD45RAOR7CD28a7FDlaKWTtlVlCMSCD3CMsCD1278ig三S2CMCMCMSRACCR7PO-I8M7(D27CD28小CD3CD4CMSRACCR7PD-!3CD8HUWRCD38事OBCMCWKACCR7CD57aCW5CD28违”滋雷般豉刷善者丫蜜酰”?）莉胡应同时嵋认峋ft宾桐侬POL）:,再晰小可吟克臧：bSMH,T*45*rwwaCM4iAa*a)nb*aMS*a3*a)
17、19aX2Oa56CD16HlAORCD33*CDnb*CDlS*a14a4S*CD3a)19a)20CD56CD16XAWCD33*O1lb*a15*CDM*B45-B3CD，B20a“an6MAE633.B】IbPlSBM图4流式细胞术鉴定全血髓源性抑制细胞亚群的设门流程1 .通过前向角散射(forwardscatter,FSC)和侧向角散射(Sidescatter,SSO组合设门1,圈出总细胞群体，同时去除细胞碎片和死细胞。2 .111内通过前向角散射面积(forwardscatter-area,FSC-A)和前向角散射高度(forwardscatter-height,FSC-H)组合圈
18、出单个细胞群体(112),去除粘连细胞。3 .112内利用CD45和SSC,圈选CD45+细胞群。4 .利用CD45和SSC,反向设门排除嗜碱性粒细胞。5 .利用淋巴细胞系标志物(CD3、CD19和/或CD20)和SSC圈选淋巴系标志物阴性细胞群。6 .利用CDl6、CD56和SSC圈选CD16-CD56-细胞群，以排除中性粒细胞及NK细胞。7 .利用HLA-DR和FSC7选HLA-DR-细胞群。8 .利用嗜酸性粒细胞的高自发荧光特性（荧光通道可选择V500-CPE-CF594PEPerCPPE-Cy5.5等），结合SSC圈选阴性群体，以排除嗜酸性粒细胞。9.利用CD33和CDllb圈选CD3
19、3+CD11b+细胞群为总MDSCo1。利用CD14和CD15,圈选CD14-CD15+细胞群为PMN-MDSC,CD14+CD15-细胞群为M-MDSC,CD14-CD15-细胞群为e-MDSCo上述方案为首选推荐，CD56-细胞群也可以在第5步中和其他淋巴细胞一并排除，实验室可根据自身条件进行调整，在荧光通道有限的系统中如八色平台，CD45抗体的荧光检测通道可与检测嗜酸性粒细胞自发荧光的通道一致，在步骤4利用CD45和SSC,反向设门同时排除嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。六色平台实验室可以仅检测总MDSC水平。实验室宜根据自身检测系统的配置，合理选择和搭配荧光抗体、进行正确的补偿设置、抗体滴
20、定设置和对照设置，优化方案。二、临床应用选择（一）基线水平辅助评价细胞免疫功能状态，评估预后在多种实体肿瘤中，外周血MDSC及其亚群的比例和绝对数显著升高38,39,40,41,42,43,监测外周血MDSC的基线水平可辅助评价细胞免疫功能状态，评估预后。不同来源的肿瘤，发生改变的MDSC亚群可能不同，如结直肠癌患者外周血以PMN-MDSC亚群升高为主42,而肝细胞癌以M-MDSC亚群升高为主38o外周血MDSC及其亚群的水平与多种实体肿瘤的分期、转移或复发呈正相关，可能是实体肿瘤发展的风险因素39,40,41；在NSCLC,结直肠癌等多种实体肿瘤中与患者的预后呈负相关42,43,44,45。
21、此外，外周血MDSC及其亚群的基线水平还可作为免疫治疗相关伴随诊断指标，用于辅助筛选免疫治疗的潜在受益者。MDSC是肿瘤对ICI出现抵抗的重要原因，其不仅具有强大的抑制细胞免疫应答的能力，还可以直接促进肿瘤血管生成、诱导缺氧。在使用ICl治疗的黑色素瘤、NSCLC等多种实体肿瘤患者中，基线时外周血低水平的MDSC,尤其是M-MDSC亚群与ICl治疗的临床获益和良好预后相关46,47,48,49,50,51,52,53。共识6推荐监测实体肿瘤患者外周血MDSC及其亚群的基线水平，用于辅助评价细胞免疫功能状态、评估预后、筛选免疫治疗受益者（证据级别：A；推荐级别：中）。（二）动态监测辅助判断疗效，
22、评估预后监测肿瘤患者常规治疗前后MDSC及其亚群水平变化的趋势，可以辅助判断疗效，评估预后。在转移性结直肠癌和胃癌中，常规治疗后MDSC及其亚群水平降低与临床获益和/或良好预后呈正相关；相反，其水平升高与良好预后呈负相关42,46o共识7建议监测实体肿瘤患者常规治疗前后外周血MDSC及其亚群水平的变化，用于辅助判断疗效、评估预后（证据级别：B；推荐级别：弱）。细胞因子水平监测一、检测指标和方法推荐细胞因子是介导抗肿瘤细胞免疫应答和肿瘤免疫抑制的重要介质，细胞因子水平监测应涵盖参与不同生物学过程的多种类型，包括免疫激活因子如IL-2、IL-12、干扰素(interferon,IFN)-等、免疫抑
23、制因子如ILT0、转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGF)-B、IL-8等、促肿瘤因子如IL-6、IL-8和促炎性因子如肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)-IL-IB、IL-6等。由于细胞因子分泌蛋白的特性，利用流式细胞术结合流式微球阵列技术可对外周血细胞因子进行定量检测，也可以根据实验室条件选择其他方法(如化学发光)。由于不同方法学的检测结果具有一定差异，在不同时间点对同一患者细胞因子水平进行监测时，建议使用同一方法学和同一标本类型。某些细胞因子如IL-8,在血清标本中容易随着时间的变化出现升高，建议标本类型首选抗凝血浆，并且在离体
24、4h内及时检测或及时分离血浆保存后检测。检测的细胞因子宜包括IL-2、IL-6、IL-8、ILT0、ILT2、IL-IB、TNF-Ci、IFN-、TGF-B等，推荐多项细胞因子联合监测，综合评估。二、临床应用选择(一)辅助评价细胞免疫功能状态，评估预后多种实体肿瘤患者外周血中免疫抑制细胞因子和促肿瘤细胞因子IL-6、IL-8、IL-10、TGF-B等水平增高54,55,56;免疫激活细胞因子如IL-12水平下降56o同时，在多种实体肿瘤中，外周血免疫抑制细胞因子和促肿瘤细胞因子如IL-6、IL-8、IL-Io等的基线水平与肿瘤分期、肿瘤大小、疾病进展等呈正相关，与患者预后呈负相关54,55,5
25、6,57。共识8推荐联合监测实体肿瘤患者基线时外周血参与不同生物学过程的多种类型的细胞因子包括IL-6、IL-8、ILT0、TGF-B、ILT2等的水平,尤其是免疫抑制细胞因子和促肿瘤细胞因子IL-6、IL-8,用于辅助评价细胞免疫功能状态、评估预后（证据级别：A；推荐级别：强）。（三）辅助ICl疗效监测，评估预后在ICI治疗的多种实体肿瘤中，外周血免疫抑制细胞因子和促肿瘤细胞因子基线水平与预后呈负相关，以IL-6为主；同样，治疗过程中免疫抑制细胞因子和促肿瘤细胞因子降低或保持在低水平，与持续临床获益和良好预后相关，以IL-6、IL-8为主9,58,59,60o共识9对于ICI治疗的实体肿瘤患
26、者，推荐动态监测外周血免疫抑制细胞因子和促肿瘤细胞因子的水平，尤其是IL-6、IL-8,用于辅助筛选免疫治疗潜在受益者、监测疗效、评估预后（证据级别：A；推荐级别：强）。（四）辅助监测iME发生在多种实体肿瘤中，外周血免疫激活因子如IL-2、IL-12,促炎性因子IL7B等的基线水平与irAE的发生呈正相关；治疗过程中促炎性因子水平升高与irAE的发生亦相关，以IL-6为主61,62,63,64o细胞因子风暴是一种危及生命的irAE。IL-6是发生细胞因子风暴的关键因子，T细胞过度活化后释放IFN-Y和TNF-,促进多种免疫细胞大量释放IL-6,同时以正反馈方式继续活化T细胞，从而出现细胞因子
27、TNF-Ci、IFN-、IL-2、IL-IB、IL-IO等大量释放，导致多器官功能障碍。在报道出现细胞因子风暴的PD-1/PD配体I（PDIigand1,PD-L1）抑制剂免疫治疗的肿瘤患者中，几乎均出现外周血IL-6水平的增高，大多伴随其他细胞因子如TNF-Q、IFN-、IL-10等的增高65,66,67,68。共识10对于ICl治疗的实体肿瘤患者，推荐动态监测细胞免疫功能相关细胞因子包括IL-6、IL-2、IL-IB、IL72等的水平，用于预测irAE;出现IL-6水平大幅增高，并伴有其他细胞因子如TNF-CI、IFN-.IL-2、IL-IB和L-10的增高，应警惕细胞因子风暴的发生（证据
28、级别：A：推荐级别：强）。综上，本共识对外周血细胞免疫功能实验室检测指标在实体肿瘤中的临床应用选择建议见表5。Q：IW-n叱-1mtxa*MH*fb*cdsdam三9*v./型ORKDCftMXRwww结语和展望宿主细胞免疫功能与实体肿瘤的发生发展和治疗转归密切相关，但基于外周血的细胞免疫功能评估用于指导肿瘤免疫治疗监测尚处于起步阶段。本共识根据国内外研究数据，对外周血细胞免疫功能监测在实体肿瘤诊疗中的应用进行了归纳，提出T淋巴细胞亚群精细分型，MDSC亚群分析和细胞因子水平监测三类指标，并就其检测标志物、检测方案或方法及临床应用作出推荐，以期指导临床合理选择免疫指标，综合评估外周血细胞免疫功能，辅助实体肿瘤的精准诊疗。但是，受现有研究规模限制以及各研究间结果差异，本共识尚不适合推荐统一的参考区间和临界值，建议实验室建立和/或验证个性化的参考区间及评价体系，必要时设立与年龄相关的参考区间。随着循证证据的完善和单细胞测序、T细胞受体测序等检测技术的成熟应用，更多的外周血细胞免疫标志物如T细胞受体多样性、Th亚群平衡性等将有望应用于临床。树突状细胞对于细胞免疫应答至关重要，但其主要通过淋巴导管在淋巴结和肿瘤组织中循环，外周血含量低，肿瘤引流淋巴结更适合作为其检测标本。基于外周血细胞免疫功能评估参数的复杂性，建立外周血细胞免疫功能综合评估模型将具有更好的应用前景。
