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1、P53、p27及mdm2在胃肠道间质瘤中的表达P53、p27及mdn2在胃肠道间质描中的表达作者：李红伟纪祥瑞赵洁丁力王建伟【摘要】目的探讨P53、p27和ndn2蛋白在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及其与GIST生物学行为的关系，为预料该肿瘤的侵袭潜能供应理论依据和可能的预料指标。方法收集68例手术切除的GIST标本,应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中P53、p27和ndm2蛋白的表达，井结合病理形态学及生物学行为评价进行统计学分析。结果68例GlST中P53、p27和mdm2蛋白阳性表达率分别为75%.54.4遇和27.94%op53阳性表达率在极低度侵袭危急性(V1.R).低度侵袭危急性
2、(1.R)和高度侵袭危急性(HR)组三组间，细胞核分裂数10/50HPF和10/50HPF两组间的差别均有统计学意义(P0.05),在肿痛直径5cm和5cm两组间差异有高度统计学意义(PV0.01)：p27阳性表达率在V1.R、1.R和HR组间比较有统计学意义(PV0.05),在肿瘤直径5cm和5cm两组间差别有高度统计学意义(P0.01)；mdn2阳性表达率在细胞核分裂数10/50HPF和10/50HPF两组间比较差别有统计学意义(P0.05)结论P53、p27和mdn2蛋白表达与GIST的发生、发展有关，检测P53、p27及mdm2表达可以作为GIST生物学行为评价的有效指标。【关键词】胃
3、肠道间质瘤：p53；p27；mdm2；免疫组织化学【AbstractObjectiveToinvestigatetheexpressionofpSB,p27andmdm2proteiningastrointestinalstroma1tumor(GIST),anddiScussthcrelationshipbetweentheirexpressionandc1incopatIiologicalcharacteristics.McthodsInimunohiStochcmicalstainingwasusedtodeteettheexpressionofp53,p27andmdm2in68cas
4、esofGIST.TheirrelationswithhistomorphoIogyandbiologicalbchaviorwereana1yzedstatistically.ResultsIn68casesGIST,thepositivityofp53,p27andmdm2proteinwere75%,54.4l%and27.9zl%respectively.TheexpressionofpsBproteinwasinverselycorrelatedwiththefletchcrdegree,morphologicvariant(P0.05)andtumordiameter(PO.01)
5、ofGIST.Theexpressionofp27proteinwasinverselycorrelatedwiththefletcIierdegree(PO.05)andtumordiameterofGIST(PO.01).Theexpressionofmdm2proteinwasinverse1ycorre1atedwithlhcmorpIiologicvariant(PO.01)ofGIST.Conc1usiOnThesedatashowstheexpressionofp53,p27andmdm2arereIatedtotheontogenesiSandprogressionofG1ST
6、.p53p27andmdm2maybcprognosticindicatorsinGIST.Keywordsgastrointestinalstromaltumor,p53.p27,mdm2,immunohistochemistryp53是目前探讨最为广泛深化的抑癌基因之一，而mdm2为近几年发觉的一种（小鼠）双微体癌基因，二者表达的相关性日益受到关注。p27属CDKI基因（细胞周期素依鸵性激酶抑制剂）,是CDK的负性调控因子，也是一种抑癌基因。CDKI其蛋白的低表达与多种肿瘤的不良预后亲密相关。胃肠道间质瘤（GIST）是一种并非少见、特征为CKIT突变阳性的间叶源性肿瘤，它主要发生在胃肠道，
7、但也可发生在其他腹腔盆腔部位，其临床生物学行为表现困难，部分呈明显良性过程,部分呈确定的恶性表现。有关P53、p27及mdm2在GIST中的表达，目前国内少见报道。因此，检测GIST中P53、p27及mdm2的蛋白表达，分析其与临床病理特征的关系，了解P53、p27及mdm2在GIST发生、发展中的有指导作用。1材料与方法1.1材料来源收集青岛高校医学院附属医院病理科20052008年手术切除的GIST肿瘤组织蜡块共68例，临床和病理资料完整：其中男32例（47.06%）,女36例（52.94%）,中位年龄59.8岁（33103岁）；病变部位分布：胃34例（50%）,肠20例（29.41%）,
8、其他14例（20.59%）O肿瘤直径大于5cm34例（50%）,小于5cm者34例（50%）：按组织学分型:梭形细胞型50例(73.52%),上皮样细胞型9例(13.24%),混合细胞型9例(13.24%)；按肿瘤核分裂像数10/50HPF55例(80.88%),核分裂像数10/50HpFI3例(19.12%)按Fletcher分级标准1,7例(10.29%)为极低度侵袭危急性(V1.R)、20例(29.41$)为低度侵袭危急性(1.R)、14例(20.59%)为中度侵袭危急性(IR)、27例(39.71蛤为高度侵袭危急性(HR)e全部组织标本均经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋、制成4m厚连
9、续切片4张：常规苏木素伊红染色1张：P53、p27及mdm2免疫组织化学染色3张。选取15例取H胃肠道肿瘤大体标本肿瘤远端组织作为正常比照组。1.2免疫组化试剂来源及染色方法鼠抗人p53单克隆抗体工作液、鼠抗人p27蛋白单克隆抗体工作液、鼠抗人mdm2单克隆抗体原液0.1ml、PV二步法检测试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采纳PV法进行免疫组化染色，用已知阳性片和磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗分别作为阳性和阴性比照。P53、p27及mdm2免疫组化试验均需热修复，mdm2免疫组化试验一抗浓度1：10001.3结果判定标准p53和p27蛋白在GIST的表达定位于肿瘤细
10、胞的细胞核，mdm2蛋白的表达定位于肿瘤细胞的细胞核和细胞浆。出现棕黄色颗粒或弥漫的棕黄色为阳性细胞。记分参照RemmeleandStegnerde的IRS（Immunoreactivescore）法2,即3个参数半定量计数方法：依据染色强度、阳性细胞数和两者计分的乘积进行推断，分为阴性一、弱阳性+、中强阳性+、强阳性+。每张切片随机选取10个高倍镜视野，计数阳性细胞数：阳性细胞数居为0分：阳性细胞数6%25%为1分；阳性细胞数26%50%为2分；阳性细胞数51%75%为3分：阳性细胞数75%为4分。阳性细胞的着色强度：淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两积分相乘，0分为阴性（一），14
11、分为弱阳性（+）,58分为中度阳性（+）,912分为强阳性（+）。1. 4统计学分析免疫组化结果采纳SPSSll.5统计学软件进行数据处理，采纳卡方检验，校正卡方检验及精确检验法分析P53、p27及mdm2蛋白表达与GIST临床病理指标的关系。PVO.05表示差别有统计学意义。2. 结果2.IP53、p27及mdm2蛋白表达68例GISTp53阳性者51例（75%）,p27阳性者37例（54.41%）,mdm2蛋白表达阳性者19例(27.94%).在比照组中，p27蛋白表达阳性率为93.33%(14/15),p53和mdm2均呈阴性表达。p53和mdm2在GIST中的表达阳性率显著高于比照组(
12、P0.01；P0.05),p27在GIST中的表达阳性率显著低于正常比照组(PV0.01)免疫组化结果见图13。3. 2p53、p27及mdm2蛋白表达与临床、病理特征的关系。2.2.Ip53与GIST临床病理特征的关系：68例中，p53阳性表达率在GIST的Fletcher分级中，其V1.R1.R组分别与HR组比较差异有统计学意义(P5cm两组的阳性率分别为58.82%和91.18%,差别有高度统计学意义(PV0.01)(表1)；细胞核分裂数10/50HPF和10/50HPF两组的阳性率分别是69.09%和100%,差别有统计学意义(P005):与肿瘤的组织学分型，部位和有无坏死的差别无统计
13、学意义(P0.05)。2.2.2p27与GIST临床病理特征的关系：68例中，p27阳性表达率随肿瘤侵袭危急程度的增加而有降低的趋势，其V1.R和1.R组分别与HR组比较差异均有统计学意义(P5cm两组的阳性率分别为70.59%和38.24%,两组比较差异有高度统计学意义(P0.05)；与肿瘤的组织学分型、核分裂像数目、部位和有无坏死的差别均无统计学意义(P0.05)o表IP53、p27及mdm2表达与肿瘤直径和核分裂像的关系p53阳性阴性Pp27阳性阴性Pmdm2阳性阴性2.2.3mdm2与GIST临床病理特征的关系：68例中，ndm2阳性表达率在细胞核分裂数10/50HIT和10/50HP
14、F两组的比较差异有统计学意义(P0.05)；mdm2的表达在GIST的Fletcher分级，肿瘤的组织学分型、部位和有无坏死的差别均无统计学意义(P0.05)。3探讨p53是迄今为止发觉的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，50%以上的人类肿瘤都检测到p53基因的突变。野生型p53基因为肿瘤抑制因子，突变型p53则具有癌基因活性。野生型p53蛋白分子的半衰期短，不易检测。由异样(突变型)p53基因编码的突变型p53蛋白有较长的半衰期，简单通过免疫组化检测到。本探讨结果显示，p53蛋白在GIST中的表达明显高于在正常比照组中的表达（P0.01）,表明p53基因突变及其产物的积累与GIST的发生关系亲
15、密。P53蛋白表达在极低度侵袭危急性（V1.R）GIST和低度侵袭危急性（1.R）GIST的表达均低于高度侵袭危急性（HR）GlST的表达,其阳性表达率随肿瘤侵袭危急程度的增加而有上升的趋势，这与Gumurdulu等3的探讨结果相同，此结果表明，伴随GISTFletcher分级上升，p53表达也上升，突变型p53基因失去原有的生长抑制功能，获得增殖、转化和致痛潜能，其高表达可以促进GIST细胞的增殖和恶性转化，提示p53基因突变在肿瘤细胞恶性进展中起确定作用，有可能成为临床判定GlST风险程度分级的重要参考指标。同时，p53在不同核分裂像数和不同大小的GIST中表达有差别，核分裂像数和肿瘤直径
16、是公认的推断GIST良恶性的指标，因此，我们认为p53可以作为推断其良恶性的牢靠指标。p27属CDKI基因（细胞周期素依竟性激酶抑制剂），是CDK的负性调控因子，也是一种抑癌基因。CDKI其蛋白的低表达与多种肿瘤的不良预后亲密相关。P27蛋白表达缺失或降低可导致肿瘤的发生。本探讨发觉，p27蛋白在GIST的阳性率较正常组织低（P0.01）,说明GIST中明显存在p27蛋白表达缺失或降低，证明P27在细胞正常分化中起重要作用，p27蛋白表达水平的降低与GIST的发生有关，且随着GISTFletcher分级上升，p27表达降低4,证明p27是具有抑癌作用的细胞周期负调控因子，在GIST进展过程中，
17、随着表达的渐渐下调，功能逐步丢失，肿病细胞更具侵袭力，恶性程度更高。应用免疫组化技术测定GIST中p27蛋白的表达状况，可作为GIST生物学行为的指标，对推断肿瘤的恶性程度及预后具有重要的参考意义。另外，本探讨结果还显示p27在不同大小的GIST中表达差异有高度统计学意义(P0.01),更进一步说明p27作为GIST良恶性推断指标的牢匏性。P27是p53基因下游调控因子，其表达受野生型p53的诱导。本试验探讨表明，p53蛋白表达随着肿瘤风险分级上升而上升，而p27阳性表达率随着肿痛风险分级上升而降低，推想两者在GIST的发生发展过程中可能存在确定的协同关系，也有可能两者表达无相关性，而在GIS
18、T的发生发展过程中分别独立的起作用。mdrn2为近几年发觉的一种(小鼠)双微体癌基因。mdm2是p53蛋白的负调控因子，一方面p53基因激活了mdm2基因的表达：另一个方面Indin2促进p53磷酸化形式的降解，抑制p53基因转录活性。已有探讨结果表明，mdm2与一些肿瘤的发生发展亲密相关5。本探讨mdm2蛋白在GIST中的表达明显高于正常比照组(P0.05),表明ndm2参加了GIST的形成过程，推想mdm2表达过强可封闭p53介导的反式激活作用，使p53功能丢失，导致基因的不稳定及细胞增生，从而表现出癌基因蛋白的作用，参加肿痛形成。另外,Indin2阳性表达与GIST核分裂像计数有关（PV
19、O.01）,核分裂像数是公认的推断GIST良恶性的指标之一，有关GIST预后指标的几项探讨中，核分裂像计数被着重强调。因此，考虑mdm2可作为推断GIST良恶性的指标之一。mdm2和p53之间的关系是目前探讨热点之一。一般认为，mdm2水平上升时会导致抑癌蛋白p53功能的丢失,mdm2过表达只发生在野生型p53阳性病例中，而在突变型p53病例中很少有mdm2的表达。我们的探讨结果显示，在GIST中既有mdm2的过表达又有p53的突变，说明在GIST中p53的突变和mdm2的过表达可以同时发生，其它肿瘤中有与此相像的探讨结果6,7本探讨68例GIST中p53与mdm2均阳性者14例，提示两者在G
20、IST的发生发展中有确定的协同作用。推想肿瘤细胞内突变型p53的大量积聚能促进mdm2基因的表达，而mdm2并不能使稳定性增加的突变型p53降解，最终可以引起肿瘤组织内mdm2和p53蛋白均出现过度表达。p53与Indm2均阳性的14例GIST中有10例为高度侵袭危急性（HR）,提示p53与mdm2的协同表达阳性者对GIST生物学行为的推断意义更高。GlST临床生物学行为表现困难，难以推断其良恶性及预后。P53、p27及mdm2都是与细胞周期调控相关的重要因子，且三者表达均与GIST细胞的增殖和分化有关，p53与mdm2共同阳性表达对GIST生物学行为有重要的推断意义。因此，检测P53、p27
21、及rndm2表达可以作为GIST生物学行为评价的有效指标。【参考文献】1FletcherCD,BermanJJ,CorlessC,etal.DiagnosisofgastrointestinaIstroma1tumors:aconsensusapproachJ.HumPathol,2002,33(5):459465.2KohlbergerPD,BreiteneckerF,Kaider,etal.ModifiedtruecolorcomputerassisledimageanaIysisversussubjcctiVeSCoringofestrogcnreccptorexpressioninbr
22、eastcancer:acomparisonJ.AnticancerRes,1999,19(3B):21892193.3GumurduluD,EMoganS,KayaselcukF,etal.ExpressionofCOX2,PCN,Ki67andp53ingastrointestinalstromalIumorsanditsrclationshipwithhistopathologicalparametersJ.WorIdJGastroentero1，2007,13(3):426431.4GelenMT,ElpekG,OgusM,etal.p27expressionandproliferat
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