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1、专题2微生物的培养与应用,判断下列说法是否正确：1分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源( )2利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数( )3消毒和灭菌实质是相同的( ),一、培养基及无菌技术1种类：液体培养基、固体培养基。2营养成分：一般都含有水、 、 、无机盐和生长因子。3无菌技术消毒方法： 、巴氏消毒法和化学药剂消毒。灭菌法：灼热灭菌、干热灭菌、 灭菌。,碳源,氮源,煮沸消毒法,高压蒸汽,二、微生物培养的基本技术1配制培养基：称量混合溶化调pH分装包扎。2灭菌：加水加培养基密封排冷气维持压力取出倒平板(或搁置斜面)。,接种环、涂布器,平板划线,稀释涂布,1.高
2、温无菌的原理是什么？提示：高温可以使菌体细胞内的蛋白质、核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。2用酒精消毒时，为什么70%的酒精杀菌效果最好？提示：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。,三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。2统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 法。3实验流程：土壤取样制备 微生物的培养与观察细菌的计数。,脲酶,稀释涂布平板法、显微镜直接计数,稀释液,刚果红,纤维二糖和葡萄糖,3实验流程：土壤取样、 、梯度稀释、将样品涂布到
3、鉴别纤维素分解菌的培养基上、挑选产生 的菌落。,选择培养,透明圈,3.分离微生物的方法有哪些？提示：从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种：(1)利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。(2)利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物，经培养后，原来占优势的微生物生长受抑制，而分离对象却可乘机大大增殖，在数量上占优势。,1微生物的营养：碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。2微生物培养的无菌技术进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵，重点是消毒和灭菌。,三种常用灭菌方法的比较：,3微生物的纯化培养平板划线法与
4、稀释涂布平板法,1下列关于微生物的培养与应用的叙述错误的是()A通过消毒不能杀死物体内所有的微生物B利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目C微生物所用的培养基的成分和植物组织培养所用的培养基的成分不同D平板划线法和稀释涂布平板法常用于微生物的接种,解析：消毒是指杀死部分对人体有害的病原微生物，但不一定能杀死细菌的芽孢，故A正确；统计样品中活菌的数目要用稀释涂布平板法，平板划线法办不到，故B错误；不同的培养对象，所需的营养成分不同，培养基中所加入的物质就不同，故C正确；微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，故D正确。答案：B,2如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下
5、列操作方法正确的是()A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌,解析：本题考查平板划线操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。答案：D,1筛选菌株(1)原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。,(2)菌株筛选原理的比较,2.统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
6、方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。,(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。,3.设置对照(1)目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。(2)方法：证明培养基未被污染，用
7、空白培养基作对照。证明选择培养基的选择作用，用基础培养基接种等量同种菌液作对照。,3分离纤维素分解菌的实验过程中，下列操作有误的是()A经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B富集培养这一步可省略，但培养的纤维素分解菌少C经稀释培养后，用刚果红染色D对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上答案：A,统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法 原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；方法：用计数板计数；缺点：不能区分死菌与活菌。,(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个
8、活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 计算公式：每克样品中的菌数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。,(2012西铁一中模拟)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数,解析：本题以“土壤中细菌的计数”为命题点
9、，考查对基础知识的识记情况。为防止培养皿盖上凝结的水珠落在培养基表面造成杂菌污染，应将平板倒置。在细菌计数时，为保证实验结果的准确性，应至少涂布三个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数；然后求出平均数，再根据对应的稀释度计算出样品中的细菌数。答案：D,1.(2012芜湖一中质检)在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。产生A同学结果的原因可能有()土样不同培养基污染操作失误没有设置对照ABC D答案：A,消毒与灭菌的区别,关于灭菌和消毒的理解不正确的是()A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌
10、实质是相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等,解析：灭菌是指杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。答案：A,2.细菌培养过程中，分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可依次用于消灭或杀灭哪些部位的杂菌()A接种针、手、培养基B培养基、手、接种针C手、接种针、培养基 D培养基、接种针、手答案：B,1用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌ABC D,解析：平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板
11、法采用涂布器进行操作；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基；平板划线法一般用于分离而不是计数。答案：C,2有关稀释涂布平板法的叙述中，错误的是()A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个的菌落答案：D,3关于纤维素分解菌选择培养的正确叙述是()A可以增加纤维素分解菌的浓度B可以减少纤维素分解菌的浓度C所用培养基是固体培养基D所用培养基是平板培养基答案：A,4(2011新课标卷)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效
12、降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。,(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。,解析：(1)从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株，使用的培养基应是以原油为唯一碳源的选择培养基，通过控制碳源这种营养成分，来促进能高效降解原油的菌
13、株的生长，抑制其他微生物的生长。(2)菌种纯化培养时，常采用平板划线法和稀释涂布平板法接种。(3)当固体培养基上长出单菌落后，可通过比较菌落周围分解圈的大小，来判断菌株降解原油能力的大小。一般来说，分解圈越大说明该菌株的降解能力越强，反之则越弱。,(4)实验室培养微生物的过程中，常用灼烧灭菌法对接种环、接种针、试管口、瓶口等进行灭菌；用高压蒸汽灭菌法对培养基、试管等进行灭菌；用干热灭菌法对玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等进行灭菌。实验操作应在酒精灯火焰旁进行，因为酒精灯火焰旁可形成一个无菌环境，可防止微生物的污染。答案：(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰,练规范、练速度、练技能,
