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1、1,考 纲 原 生 态1.微生物的分离和培养2.某种微生物数量的测定3.培养基对微生物的选择作用,2,考点一微生物的实验室培养,1培养基(1)概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其生长繁殖的_。,营养物质,营养物质,水、碳源、氮源、无机盐,pH,氧气,固体培养基,3,微生物的实验室培养基础知识 1培养基,4,【练习巩固】(2010全国卷改造)某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是_，碳源是_，氮源是_。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于_培养基。从同化作用类型的角度看，用该培养基培养的细菌
2、属于_。,异养型,琼脂,葡萄糖,尿素,选择,5,煮沸消毒法,灼烧灭菌,较为温和的物理或化学方法,仅杀死物体表面或内部的对人体有害的部分微生物(不包括芽孢和孢子),煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法,强烈的理化因素,杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子,灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,2无菌技术,6,考点一微生物的实验室培养,7,考点一微生物的实验室培养,3纯化大肠杆菌的原理与方法(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。,8,考点一微生物的实验室培养,通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散
3、到培养基上。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落,将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落,可以观察菌落特征，对混合菌进行分离,可以计数，可以观察菌落特征,不能计数,吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延,适用于好氧菌,适用于厌氧菌和兼性厌氧菌,(2)纯化微生物的接种方法：,9,考点一微生物的实验室培养,平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同(1)第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。(
4、2)每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。(3)划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,10,考点一微生物的实验室培养,(1)培养基分装到培养皿后进行灭菌。(2013江苏)( )(2)转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线。 (2013江苏)( )(3)接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养。 (2013江苏)( )(4)培养过程中每隔一周观察一次。 (2013江苏)( )(5)在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌。 (2011重庆)( )(6)在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长，向液体培养基中通入氧
5、气能促进破伤风杆菌的生长。 (2011重庆)( )(7)对新配制的培养基灭菌时所用的设备是高压蒸汽灭菌锅。实验前需对超净工作台进行消毒处理。 (2010山东)( )(8)用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板。 (2009安徽)( ),11,D,题组一微生物的培养,1(2015北京市东城区联考)细菌需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列与此有关的说法正确的是 ()A乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源是相同的B氮源不可能作为细菌的能源物质C琼脂是细菌生长和繁殖中不可缺少的一种物质D以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌,12,题组一微生物的培养,2随着
6、科技的发展，微生物在生产活动中得到了广泛应用。下列关于微生物培养的叙述，正确的是()A青霉素就是抗生素，在青霉菌的培养过程中不用严格灭菌B培养基中加入的琼脂可以作为微生物的碳源C为了避免污染，在微生物培养过程中，操作人员的手必须经过严格灭菌D在菌种选育过程中可以利用人工诱变等手段,D,13,题组一微生物的培养,3下表所示为某微生物培养基的配方，有关叙述错误的是,A.依物理性质划分，该培养基属于固体培养基；依用途划分，该培养基属于选择培养基B由培养基的原料可知，所培养微生物的同化作用类型是异养型，培养的微生物可以是酵母菌或毛霉C本培养基中青霉素的添加满足了微生物生长对特殊营养物质的要求D若用该培
7、养基分离能分解尿素的细菌，应除去青霉素和NaNO3，并应加入尿素,14,题组一微生物的培养,1筛选微生物的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。因此，可以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。2选择培养基的设计原理和功能 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某些物理、化学因素(如温度、pH等)的抗性而设计的培养基为选择培养基。此类培养基能使混合菌株中的目的菌株变为优势菌，从而提高该菌的筛选效率。,15,题组一微生物的培养,3选择培养基应用实例,加入青霉素,加入高浓度的食盐,缺乏氮源,石油作为唯一碳源,高温环境,酵母菌和霉菌,金
8、黄色葡萄球菌,固氮微生物,分解石油的微生物,耐高温微生物,16,题组二微生物纯化的方法分析,4有关平板划线操作正确的是 ()A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管后要通过火焰灭菌，取出菌种后要马上塞上棉塞C将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放入培养箱中培养,D,17,题组二微生物纯化的方法分析,5苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了能降解利用苯酚的细菌菌株筛选的主要步骤如下图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是(),A图中
9、培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D使用平板划线法可以在上获得单菌落,18,题组二微生物纯化的方法分析,微生物纯化的三种途径(1)单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物。(2)选择培养法：利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物。(3)鉴定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物。,19,考点二微生物的分离与数量测定,1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)
10、分离原理土壤中细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成_，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到_作用。(2)统计菌落数目统计样品中的活菌一般用_法。(3)实验流程土壤取样 _微生物的培养与观察细菌的_。,脲酶,催化,稀释涂布平板,样品的稀释,计数,20,考点二微生物的分离与数量测定,2分解纤维素的微生物的分离(1)纤维素酶组成：纤维素酶是一种_，一般认为它至少包括三种组分，即_。作用：,葡萄糖,复合酶,C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,21,(2)纤维素分解菌的筛选原理： 纤维素分解菌 筛选方法：_染色法，即通过是否产生_来筛选纤维素分解菌。培养基：以_为唯一碳源的选择培养基。,红色复合物,透明圈
11、,刚果红,透明圈,纤维素,考点二微生物的分离与数量测定,22,实验流程：土壤取样：富含_的环境选择培养：用_培养，以增加纤维素分解菌的浓度_：制备系列稀释液 涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生_的菌落,纤维素,选择培养基,梯度稀释,透明圈,考点二微生物的分离与数量测定,23,考点二微生物的分离与数量测定,(1)分离微生物所用的选择培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。(2)平板划线法只适合用于微生物的提纯，不适合进行计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。,24,考点二微生物的分离与数量测定,(1)要从土壤中分离获取纤维素分解菌，应选用以纤维素为唯
12、一碳源的选择培养基。(2013太原五中月考)( )(2)在纤维素分解菌培养过程中，对培养基和接种环常采用的灭菌方法分别是高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌。 (2013许昌二次调研)( )(3)透明圈是刚果红与纤维素形成的复合物，可根据是否出现透明圈来判断有无纤维素分解菌。 (2011山东改编)( )(4)测定培养液中微生物数量，可选用显微镜直接计数法。 (2010山东)( )(5)在“检测土壤中细菌总数”的实验中，确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数。 (2009安徽)( )(6)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还
13、应保证待测样品稀释的比例合适。 (2009高考宁夏卷)( ),25,题组三对分离分解尿素细菌及纤维素分解菌的筛选分析,1欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中，不正确的是 ()A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌,D,26,题组三对分离分解尿素细菌及纤维素分解菌的筛选分析,2(2015泰州质检)利用农作物秸秆为原料可生产乙醇，生产过程中可采用微生物将秸秆水解或用酶水解，其主要技术流程如下图所示，下列相关说法错误的是A可用刚果红染色法筛选过程所需的纤维素
14、分解菌B过程加入的纤维素酶是葡萄糖苷酶C酒精发酵接种的酵母菌需在无氧条件下发酵D酒精发酵前需对培养基进行高压蒸汽灭菌,27,题组三对分离分解尿素细菌及纤维素分解菌的筛选分析,筛选微生物的两种方法比较,28,题组四微生物的计数分析,D,3(2015北京市海淀区高三期中)下列关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，不正确的是 ()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高压蒸汽灭菌后倒平板B取104、105、106倍土壤稀释液和无菌水各0.1 ml涂布不同平板C将实验组和对照组平板倒置， 37 恒温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数,29,题组四微生物的计数分
15、析,4(2014高考新课标全国卷)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。,检测培养基平板灭菌是否合格,3.8107,灼烧,将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落,30,题组四微生物的计数分析,(3)示意图A和图B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。,B,溶解氧,营养物质,
