芽孢杆菌属课件.ppt

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1、1,一、炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthracis，B.anthraci),炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,2,形态染色:致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状有毒株可有明显荚膜,生物学性状,炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 1000,革兰染色 1000,3,芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央多在有氧条件下形成，2530，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸 体严禁解剖,4,培养特性：需氧或兼性厌氧，生长

2、条件不严格，最适温 度3035普通培养基扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边 缘呈卷发状,5,BAP：1215h不溶血，1824h轻微溶血其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,6,肉汤絮状沉淀生长明胶371824h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。NaHCO3BAP：-有毒株5%CO2、372448h、产生荚膜 呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)-无毒株粗糙型菌落,7,生化反应：,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气水解淀粉、还原硝酸盐不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不

3、 分解尿素在牛乳中生长24天牛乳凝固缓慢胨化触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）,8,抗原构造：菌体多糖抗原：-与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）。-特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。,9,荚膜多肽抗原：-与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细 菌生长和扩散-荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义芽胞抗原：有免疫原性和血清学诊断价值,10,炭疽毒素：-保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿 因子（EF）三个组分-单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性-具有抗吞噬和免疫原性,11,抵抗力：,-芽胞抵抗力很强

4、，煮沸10min或干热140 3h才能杀灭-在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数 十年-生物武器,12,-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化 剂较敏感，常用以下方法杀菌：1：2500碘 10min、3%H2O2 1h、4%高锰酸钾 15min、0.5%过氧乙酸 10min-对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、氯酶素均敏感,13,临床意义,炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,14,致病物质,荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖

5、扩散炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子,15,所致疾病,炭疽病：传染源：患病食草动物及其制品或被污染物传播途径：接触皮肤炭疽 食用肠炭疽 吸入肺炭疽可并发败血症，死亡率极高,16,17,乙类传染病发生肺炭疽按甲类处理,病后可获得持久免疫力,18,要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,三、微生物学检验,19,标本的采集与处理,皮肤炭疽：病灶深部标本肺炭疽：痰和血液肠炭疽：粪、呕吐物脑膜炭疽：CSF、血液死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消 毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局 限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。,20,无杂菌污染标本：直接接种肉汤

6、增菌或固体培养基污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振 荡1015min、静置10min，取悬液65水浴30min或 855min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养污染杂菌液体标本：离心，弃上清液后，加0.5%洗涤 剂振荡1015min，离心取沉淀物增菌和分离培养,21,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,荚膜肿胀试验,22,23,涂片染色：-G染色、荚膜染色、芽胞染色初步报告-荚膜荧光抗体染色核酸检测：核酸杂交分离培养：-BAP、戊烷脒多粘菌素B平板-2%兔血清肉汤增菌分离培养,24,鉴定试验：形态和菌落特征生化试验:表11-1串珠试验:-接种于含青霉素(0.050.5U

7、/ml)的肉汤 中，37 6h，大而均匀成串的圆球状菌体-与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关-类炭疽无此现象,25,青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,26,噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、37、2448h 有毒株形成荚膜黏液型菌落 无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,27,植物凝集素试验：Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断,28,Plaque,29,二、

8、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus,B.cereus),30,形态与染色：-G+大杆菌-生长6h后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次末端、不突出菌体-菌体两端平截，多数呈链状排列-引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜,微生物特性,31,培养特性：需氧或兼性厌氧营养要求不高最适温度3035普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽,32,BAP 有溶血 卵黄平板生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应,33,生化反应：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精，产酸不产气能胨化牛乳，液化明胶，VP（+

9、）、卵磷脂 酶（+）多次传代后生化特性常可改变,34,抵抗力：耐热，肉汤中细菌需10020min才能杀死，食物中毒菌株的游离芽胞耐受10030min、干热12060min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺、呋喃类耐药,35,临床意义,食物中毒含菌量达105/g以上呕吐型耐热肠毒素腹泻型不耐热肠毒素全眼球炎（外伤后）心内膜炎、败血症和脑膜炎,36,夏、秋季多见食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意,37,微生物学检验,标本采集：可疑食物、

10、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。,38,确诊由该菌引起的食物中毒必须：,从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,39,40,检验方法：直接镜检分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板鉴定与分型：根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测,41,第五节 棒状杆菌属,42,棒状杆菌属是一群革兰染色阳性杆菌，菌体形态特征是在其一端或两端常呈棒状膨大，故名，归属放线菌科。

11、,棒状杆菌属概述,43,棒状杆菌属种类繁多，主要有：白喉棒状杆菌（C.diphtheriae）假白喉棒状杆菌（C.pseudodiphtheriticum）干燥棒状杆菌（C.xerosis）化脓棒状杆菌（C.pyogenes）溃疡棒状杆菌（C.ulcerans）假结核棒状杆菌（C.pseudotuberculosis）溶血棒状杆菌（C.haemolyticum）J-K群棒状杆菌（C.jeikeium-CDC group JK）,44,G+杆菌、一端或两端膨大成棒状染色不均匀，两端浓染或有异染颗粒无鞭毛、无芽胞排列不规则，呈栅栏状白喉棒状杆菌致病菌类白喉棒状杆菌条件致病菌,45,白喉棒状杆菌 C

12、.diphtheriae,46,一、生物学特性,形态与染色:G+细长微弯的杆菌 一端或两端膨大呈棒状 常排列呈V、L、X等文字形 异染颗粒形态上的鉴别特征 无荚膜、无芽胞、无鞭毛,白喉棒状杆菌异染颗粒 1000,47,培养特性：,需氧或兼性厌氧，最适温度3537营养要求高，在含血液、血清、鸡蛋的培养基上生 长良好吕氏（Loeffler)血清斜面或鸡蛋斜面：生长最快，6h即生长，1012h长出灰白色、湿润、有光泽的光滑型菌苔/菌落，菌体形 态典型、异染颗粒明显，连续传代可保持形 态和产毒性能不变,48,BAP中菌落,BAP：菌落灰白色、光滑型、直径12mm、有狭窄 溶血环（轻型）多次传代后菌体变

13、为球 型,49,亚碲酸钾BAP：选择鉴别培养基黑色菌落鉴别依据不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色 菌落根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为：重型、中间型、轻型,白喉棒状杆菌在亚碲酸钾BAP中菌落,50,液体培养基：生长较好，但菌型不同其生长特点也不相同,51,生化反应：,分解葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，不分解乳糖、甘露糖，一般不分解蔗糖，吲哚（-）、硝酸盐还原（+）、触酶（+）、氧化酶（-）、明胶液化（-）尿素（-）重型能分解淀粉、糖原、糊精，迟缓分解蔗糖,52,抵抗力：,对干燥、寒冷和日光抵抗力较其他无芽胞细菌强，在干燥的假膜中可生存3个月对湿热和消毒剂敏感，5%石炭酸、1

14、：1000升汞1min，1001min、6010min均可灭菌对青霉素、红霉素等敏感，对磺胺不敏感,53,致病物质(一)白喉外毒素毒力强，130ng/kg可使人死亡抗原性强编码外毒素的tox基因-棒状杆菌噬菌体,二、临床意义,54,作用机制：A亚单位可使细胞延伸因子-2（EF-2）灭活，影响蛋白质的合成作用特点：毒性作用大，1分子能杀一个细胞作用于多种细胞，心肌、神经细胞均有毒素受体肿瘤细胞对此毒素敏感,55,（二）索状因子细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化（三）K抗原-细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白-抗吞噬-有利于细菌在黏膜表面的定植,56,所致疾病：白喉-急性呼吸

15、道传染病,传染源：患者及带菌者传播途径：飞沫或污染临床表现细菌-上呼吸道粘膜，生长繁殖，产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症：炎性渗出，坏死，纤维蛋白 假膜窒息毒素血液全身中毒症状外周N-N炎：膈肌麻痹-呼吸困难 声带麻痹-声音嘶哑 软颌麻痹-吞咽困难心肌-心肌炎,57,白喉假膜,58,抗毒素免疫感染后机体可获得牢固的免疫力机体还可通过其它方式获得免疫力：六月以下婴儿-母亲成人-隐性感染、人工主动免疫易感者：15岁儿童成人-也有可能,免疫性：,59,锡克试验（Schick test）（白喉外毒素皮内试验）,调查人群在感染或预防接种后对白喉是否产生免疫力根据外毒素与抗毒素中和的原理，以少量白

16、喉外毒素测定机体有无相应抗毒素缺点观察时间长、操作繁琐，不易进行广泛测试,60,锡克试验,白喉杆菌所含的毒素对机体组织有损伤作用，而引起一系列病理变化。对白喉具有免疫力的个体，血清中有白喉抗毒素，能中和白喉毒素的有害作用。皮内注射白喉毒素后，观察局部皮肤反应，可以判断受试者是否对白喉有免疫力。于前臂屈侧皮肤乙醇消毒，皮内注射白喉毒素，0.1ml，另一侧前臂皮内注射等量对照液(经加热80，5min处理过的白喉毒素)。24h48h后观察结果。1出现下列情况之一为阳性。（1）试验臂局部皮肤红肿，第4日直径可达10mm-20mm，7d-14d开始消退，对照臂无反应。（2）于注射后6h-12h，两臂同时

17、出现同样大小的红斑，颜色较浅，24h后对照臂红斑开始消退，而试验臂的皮肤反应继续发展。2阴性：两臂注射部位均无反应。3假阳性：双臂注射部位6h-12h后同时出现同样大小的红斑，颜色较浅，24h后均开始消退。,61,主要用于检查人群对白喉的免疫状态，也可指导临床治疗。1阳性：表示机体对白喉无免疫力，应进行白喉疫苗接种，然后再用本试验测定免疫效果。2阴性：表示机体已产生了免疫力。3假阳性：也表示机体对白喉具有免疫力。双臂注射部位均出现红斑，属于机体对白喉毒紊蛋白质的变态反应。4.对于临床疑诊的白喉患者，可同时做本试验与咽拭子细菌培养，根据两种试验结果，分别给予不同的处理。（1）白喉杆菌培养阳性，本

18、试验阴性，按白喉病例处理。（2）白喉杆菌培养与本试验均阴性，应留观察。（3）培养阴性，本试验阳性，应进行预防接种。疑诊白喉，人群白喉免疫状态筛查。局部皮肤感染者。同狄克试验。,62,致敏红细胞凝集试验测定血清中抗毒素水平0.1ml血清，倍比稀释+外毒素致敏红细胞37、1h敏感度可达10-4单位，简便快速,63,防治原则：-人工主动免疫白喉类毒素DPT混合疫苗：白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素-人工被动免疫白喉抗毒素+白喉类毒素-治疗：抗毒素+抗生素早期足量注射白喉抗毒素，使毒素在与细胞结合以前被抗毒素中和,64,三、微生物学检验,分离出白喉杆菌，并证明其毒力 标本采集：分泌物 取双份如不能

19、及时检验，标本浸于无菌生理盐水或15%甘油生理盐水保存,65,毒力试验,66,直接涂片染色镜检：-23张涂片G染色、异染颗粒染色 镜检初报“直接涂片检出形似白喉杆菌”早期诊断-用无菌棉拭子浸以动物血清，采集标本，3710h，涂片染色镜检提高阳性率,67,分离培养：,吕氏血清斜面：37、812h 涂片染色镜检-检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断亚碲酸钾BAP：37、2448h，黑色菌落BAP：轻型有溶血环，应注意与溶血性链球菌鉴别,68,鉴定：,形态染色、菌落特点、生化反应糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原 鉴别棒状杆菌属不同的种 白喉：葡萄糖（+）、麦芽糖（+）蔗糖（-）,69,毒力试验（鉴定致病菌株的重要依据）,体外法：琼脂平板毒力试验（Elek平板毒力测定）SPA协同凝集试验对流电泳,琼脂平板毒力试验-Elek平板,对流免疫电泳,70,精品课件！,71,精品课件！,72,体内法：用豚鼠作毒素-抗毒素中和试验,