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1、食品加工化验方法法律法规汇编食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂32 水样的采集和保存4218 氯化物4735 细菌总数5136 总大肠菌群5537 余氯66食品卫生微生物学检验菌落总数测定73食品卫生微生物学检验大肠菌群测定76食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验78食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验84食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验 GB 4789.6-9487致 泻 大 肠 埃 希 氏 菌 检 验 代替GB 4789.6-8487出口产品包装用瓦楞纸箱92食品包装用聚乙烯成型品93卫 生 标 准93肉类加工厂卫生规范 GB12694-90 Hygienic specificatio
2、ns of meat packing plant 中华人民共和国卫生部 1991-03-18批准 1991-10-01实施94食品企业通用卫生规范 General hygienic regulation for food enterprises GB14881-94，中华人民共和国卫生部 1994-02-22批准 1994-09-01实施103生活饮用水卫生标准Sanitary standard for drinking water112中华人民共和国国家标准GB5749-85112食品中总汞的测定方法117食品中总汞的测定方法124肉与肉制品卫生标准的分析方法131PH值的测定 玻璃电极法
3、Water QualityOetermination of pH ValueGlass Electrode Method GB 69208619861010发布 1987 0301实施137氨氮指标的测定143出口食品生产企业卫生注册登记管理规定145出口食品生产企业卫生要求149出口产品包装用瓦楞纸箱153进出境肉类产品检验检疫管理办法158水质 化学需氧量的测定163重铬酸盐法163中华人民共和国国家标准 鲜（冻）禽肉卫生标准 GB2710-1996 Hygienic standard for fresh (frozen) poultry 1996-11-27发布 1997-05-01实施
4、 中华人民共和国卫生部发布170中华人民共和国产品质量法172中华人民共和国安全生产法178中华人民共和国安全生产法187中华人民共和国产品质量法195中华人民共和国动物防疫法202中华人民共和国合同法207中华人民共和国计量法 (1985年9月6日第六届全国人大常委会第12次会议通过、1985年9月6日 中华人民共和国主席令第二十八号公布、自1986年7月1日起施行）248中华人民共和国劳动法252中华人民共和国食品卫生法260【GB/T 4789.281994】 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 1主题内容与适用范围本标准规定了各种染色法、培养基和试剂。本标准适用于食品和食物中毒样
5、品中各类微生物的检验。2染色液配制及染色法2.1美蓝染色法2.1.1吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇 30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。2.1.2染色法将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染13min，水洗，待干，镜检。2.1.3结果菌体呈蓝色。2.2革兰氏染色法2.2.1结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇 20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。2.2.2革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。2.2.3沙黄复染
6、液沙黄 0.25g95%乙醇10mL蒸馏水 90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。2.2.4染色法2.2.4.1将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。2.2.4.2滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。2.2.4.3滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。2.2.4.4水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。2.2.5结果革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。2.3耐酸性染色法(萎倪二氏法)2.3.1石炭酸品红染色液碱性品红 0.3g9
7、5%乙醇10mL5%酚水溶液 90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。2.3.23%盐酸乙醇浓盐酸 3mL95%乙醇97mL2.3.3复染液吕氏碱性美蓝染色液。2.3.4染色法2.3.4.1将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。2.3.4.2滴加盐酸乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为13min)，水洗。2.3.4.3滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s1min，水洗，待干，镜检。2.3.5结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。2.4柯氏染色法2.
8、4.1染色液2.4.1.10.5%沙黄液。2.4.1.20.5%孔雀绿液。2.4.2染色法2.4.2.1将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约23min，水洗。2.4.2.2滴加0.5%孔雀绿液，复染4050s。水洗，待干，镜检。2.4.3结果布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。2.5奥尔特氏荚膜染色法2.5.1染色液沙黄 3g蒸馏水 100mL用乳钵研磨溶解。2.5.2染色法将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。2.5.3结果炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。2.6瑞氏染色法2.6.1染色液瑞氏色素0.1g甲醇60m
9、L用乳钵研磨溶解。2.6.2染色法2.6.2.1涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。2.6.2.2加入等量蒸馏水(pH6.5)，染色35min。2.6.2.3用蒸馏水冲洗，待干，镜检。2.7鞭毛染色法2.7.1染色液的配制2.7.1.1甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。2.7.1.2乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。
10、滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，23d基本无效。2.7.2染色法在风干的载玻片上滴加甲液，46min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。2.8碱性复红染色法将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉以与蜡样芽胞杆菌相区别。3生化试验培养基和试剂3.1HughLeifson培养
11、基(O/F试验用)3.1.1成分蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.23.1.2制法将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121高压灭菌15min，直立凝固备用。3.1.3试验方法从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于361培养。3.1.4结果3.2糖发酵管3.2.1成分牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠3g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)2g0.2%滇麝
12、香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mLpH7.43.2.2制法3.2.2.1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121高压灭菌15min。3.2.2.2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。3.2.3试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于361培养，一般观察23d。迟缓反应需观察1430d。3.3ONPG培养基3.3.1成分邻硝基酚D-半乳
13、糖昔(ONPG) 60mg(ONitrophenylDgalactopyranoside)0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL1%蛋白胨水(PH7.5)30mL3.3.2制法将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。3.3.3试验方法自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于361培养13h和24h观察结果。如果半乳糖苷酶产生，则于13h变黄色，如无此酶则24h不变色。3.4缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)3.4.1成分磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水1000mLpH7.03.4.2制法溶化后校正pH，
14、分装试管，每管1mL，121高压灭菌15min。3.4.3甲基红(MR)试验自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于361培养25d，哈夫尼亚菌则应在2225培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。3.4.4VP试验用琼脂培养物接种本培养基中，于361培养24d。哈夫尼亚菌则应在2225培养。加入6%萘酚乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在361下培养4h再进行观察。3.5西蒙氏柠檬酸盐培养基3.5.
15、1成分氯化钠5g硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g柠檬酸钠5g琼脂20g蒸馏水1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.83.5.2制法先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121高压灭菌15min。放成斜面。3.5.3试验方法挑取少量琼脂培养物接种，于361培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。3.6克氏拧檬酸盐培养基3.6.1成分柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g蒸馏水
16、 1000mL3.6.2制法加热溶解，分装试管，121高压灭菌15min。放成斜面。3.6.3试验方法用琼脂培养物接种整个斜面，在361培养7d，每天观察结果。阳性者培养基变为红色。3.7丙二酸钠培养基3.7.1成分酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH6.83.7.2制法先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121高压灭菌15min。3.7.3试验方法用新鲜的琼脂培养物接种，于361培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。3.8葡葡糖铵培养基3.8.1成
17、分氯化钠5g硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.83.8.2制法先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121高压灭菌15min，放成斜面。3.8.3试验方法用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于361培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。
18、如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。3.9马尿酸钠培养基3.9.1成分马尿酸钠1g肉浸液100mL3.9.2制法将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。以标志管内液面高度，高压灭菌12120min。3.9.3试剂三氯化铁(FeCl36H2O)12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。3.9.4试验方法用纯培养物接种，于42培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀，吸取上清液0
19、.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经1015min，观察结果。3.9.5结果：出现恒久之沉淀物为阳性。3.10营养明胶3.10.1成分蛋白胨5g牛肉膏3g明胶120g蒸馏水1000mLpH6.87.03.10.2制法加热溶解、校正至pH7.47.6，分装小管，121高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.87.0。3.10.3试验方法用琼脂培养物穿刺接种，放在2225培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。3.11苯丙氨酸培养基3.11.1成分酵母浸膏3gDI苯丙氨酸(或L苯丙氨酸1g) 2g磷
20、酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mL3.11.2制法加热溶解后分装试管，121高压灭菌15min，使成斜面。3.11.3试验方法自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在361培养4h或1824h。滴加10%三氯化铁溶液23滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。3.12氨基酸脱羧酶试验培养基3.12.1成分蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g蒸馏水1000mL1.6%滇甲酚紫乙醇溶液1mLL氨基酸或DL氨基酸 0.5或1g/100mLpH6.83.12.2制法除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L氨基酸
21、按0.5%加入，DL氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115高压灭菌10min。3.12.3试验方法从琼脂斜面上挑取培养物接种，于361培养1824h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。3.13蛋白胨水(靛基质试验用)3.13.1成分蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.43.13.2制法按上述成分配制，分装小试管，121高压灭菌15min。3.13.3靛基质试剂3.13.3.1柯凡克试剂：
22、将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。3.13.3.2欧波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20mL。3.13.4试验方法挑取小量培养物接种，在361培养12d，必要时可培养45d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。3.14硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)3.14.1成分牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亚铁 0.2g硫代
23、硫酸钠 0.3g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mLpH7.43.14.2制法加热溶解，校正pH，分装试管，115高压灭菌15min，取出直立候其凝固。3.14.3试验方法挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于361培养12d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。3.15尿素琼脂3.15.1成分蛋白胨1g氯化钠5g葡萄糖1g磷酸二氢钾2g0.4%酚红溶液3mL琼脂20g蒸馏水1000mL20%尿素溶液 100mLpH7.20.13.15.2制法将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121高压灭菌1
24、5min。冷至5055，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.20.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。3.15.3试验方法挑取琼脂培养物接种，在361培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。3.16氰化钾(KCN)培养基3.16.1成分蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸二氢钾 0.225g磷酸氢二钠 5.64g蒸馏水 1000mL0.5%氰化钾溶液 20mLpH7.63.16.2制法将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为110000)，分装
25、于12mm100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。3.16.3试验方法将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于氰化钾(KCN)培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在361培养12d，观察结果。如有细菌生长即为阳性(不抑制)，经2d细菌不生长为阴性(抑制)。注：氰化钾是剧毒药物，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特
26、别注意。3.17硝酸盐培养基3.17.1成分硝酸钾 0.2g蛋白 5g蒸馏水 1000mLpH7.43.17.2制法溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121高压灭菌15min。3.17.3硝酸盐还原试剂3.17.3.1甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。3.17.3.2乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。3.17.4试验方法接种后在361培养14d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长
27、。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。3.18氧化酶试验3.18.1试剂3.18.1.11%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。3.18.1.21%-萘酚乙醇溶液。3.18.2试验方法3.18.2.1取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。3.18.2.2以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。3.19细胞色素氧化酶试验3.19.1试剂3.19.1.11%盐酸二甲基对苯二胺溶液。3.19.
28、1.21%-萘酚乙醇溶液。3.19.2试验方法取37(或低于37)培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各23滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。3.19.3结果于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。3.20过氧化氢酶试验3.20.1试剂3%过氧化氢溶液：临用时配制。3.20.2试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。3.20.3结果于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。3.2
29、1过氧化物酶试验3.21.1试剂3.21.1.12%儿茶酚溶液。3.21.1.23%过氧化氢溶液。3.21.2试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20)中3060min，观察结果。3.21.3结果阳性反应，细菌变为黑褐色；阴性反应，细菌不变色。注：过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。3.22磷酸盐缓冲液3.22.1储存液磷酸二氢钾34g1mol/L氢氧化钠溶液175mL蒸馏水825mLpH7.23.22.2制法先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。3.
30、22.3稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121高压灭菌15min。3.23明胶磷酸盐缓冲液3.23.1成分明胶2g磷酸氢二钠4g蒸馏水1000mLpH6.23.23.2制法加热溶解，校正pH，121高压灭菌15min。3.24乳酸苯酚溶液3.24.1成分苯酚10g乳酸(比重1.21)10g甘油20g蒸馏水10mL3.24.2制法将苯酚在水中邮热溶解，然后加入乳酸及甘油。3.24.3用途检验真菌形态时用。4一般培养基和专用培养基4.1肉浸液肉汤4.1.1成分绞碎牛肉500g氯化钠5g蛋白胨10g磷酸氢二钾2g蒸馏水1000mL4.1.2
31、制法将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.47.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121高压灭菌30min。4.2肉浸液琼脂4.2.1成分肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL琼脂1720g4.2.2制法加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121高压灭菌30min。根据需要，倾注平板或放成斜面。4.3牛肉(或牛心)消化汤4.3.1成分绞碎牛肉(或牛心)1000g15%氢氧化钠溶液 27mL胰蛋白酶40mL三氯甲烷1mL氯化钠10g蒸馏
32、水2000mL4.3.2制法4.3.2.1称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80，维持15min。4.3.2.2加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40。4.3.2.3加胰蛋白酶、氯仿，在361放置45h，每小时摇动一二次。4.3.2.44h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。4.3.2.5加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。4.3.2.6煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。4.3.2.7次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。4.3.2.8校正pH7.47.
33、6(加15%氢氧化钠溶液约10mL)，加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121高压灭菌20min。注：此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。4.4血消化汤4.4.1成分绞碎猪胃100g绞碎猪血块100g蒸馏水1000mL浓盐酸10mL4.4.2制法4.4.2.1洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。4.4.2.2用绞肉机将猪血块绞碎。4.4.2.3将蒸馏水加热至55，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55水浴
34、中24h，时常加以摇动。4.4.2.4从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。4.4.2.5吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.27.4。4.4.2.6用滤纸过滤，分装烧瓶，121高压灭菌20min。注：本培养基不含糖可供作鉴别培养基之基础，不需加蛋白胨和氯化钠。1mol/L碳酸钠溶液之配法：无水碳酸钠10.6g，溶于1000mL蒸馏水中。4.5豆粉琼脂4.5.1成分牛心消化汤(PH7.47.6) 1000mL琼脂 20g黄豆粉浸液 50mL4.5.2制法将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤
35、。加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121高压灭菌15min。4.5.2.1豌豆粉浸液制法：取豌豆粉5g、氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。置100水浴内加热1h，放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。4.6血琼脂4.6.1成分pH7.47.6豆粉琼脂100mL脱纤维羊血(或兔血)510mL4.6.2制法加热溶化琼脂，冷至50，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。4.7营养琼脂4.7.1成分蛋白胨10g牛肉膏3g 氯化钠5g琼脂1520g蒸馏水1000mL4.7.2制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15
36、%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.27.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121高压灭菌15min。注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。4.8营养肉汤4.8.1成分蛋白陈10g牛肉膏3g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.44.8.2制法按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225mL，121高压灭菌15min。4.9乳糖胆盐发酵管4.9.1成分蛋白胨20g猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水1000mLpH7.44.9.2制法将蛋白胨、胆盐及乳糖
37、溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115高压灭菌15min。注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。4.10乳糖发酵管4.10.1成分蛋白胨20g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水1000mLpH7.44.10.2制法将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115高压灭菌15min。注：双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。4.11EC肉汤4.11.1成分胰蛋白胨20g3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g乳糖5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL4.11.2制法将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121高压灭菌15min，最终pH为6.90.2。4.12缓冲蛋白胨水(BP)4.12.1成分蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O) 9g磷酸二氢钾 1.5g蒸馏水 1000mLpH7.24.12.2制法按上述成分配好后以大烧瓶装，121高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。4.13氯化镁孔雀绿增菌液(MM)4.13.1甲液胰蛋白胨
