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1、临床微生物标本的采集与运送,采集的基本原则,1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检5.标本容器须无菌，但不得有消毒剂6.送检标本应注明来源和检验目的,如何提高细菌阳性检出率？,标本采集时机标本采集方法标本的质与量标本的运送与保存镜检筛选合格标本（退检制度）高质量、多种分离培养基培养环境,标本分类,1。血液及骨髓标本2。呼吸道标本3。泌尿生殖道标本4。粪便标本5。脓液及创伤感染分泌物标本6。穿刺液标本7。真菌感染标本,血液及骨髓标本,采集及运送,血培养指征,不明原因的发烧(38)或体温过低(36)白细胞增多（10*109/L），
2、粒细胞减少休克，皮肤黏膜出血，多器官衰竭，血压降低，CRP升高，呼吸加快严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，)心率异常加快血 液病患者可出现粒细胞减少、血小板减少,采集血培养样本的最佳时间,尽可能在患者寒战和发热高峰3060分钟内采血在患者接受抗生素治疗前采血如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养,采血套数及部位,成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份”注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。,采血套数及部位,每位患者每次采血最少2
3、套，3套更好初发患者，绝不能只采1套标本，采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。多个穿刺部位采血。因多部位同时发 生污染的几率较小，便于对结果进判断,采血套数及部位,常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染，需经外周静脉穿刺采集2套血培养，从导管中心或静脉留置口隔膜采集1套血培养，同时做血管内导管尖端（末端5cm）半定量或定量培养,关于标本采集间隔时间,对于急性感染患者，应在5分钟内从不同部位（双臂）分别采集23套血培养。发热原因不明患者，在24小时内应从不同部位采血23套，间隔不少于60分钟可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，起
4、始采集3套血培养（每次间隔不少于30分钟），如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。可疑的亚急性心内膜炎患者需在30分钟至1h内连续采集3套标本。然后才开始抗菌药的经验治疗,采集血液量,采血量是影响灵敏度最关键因素成人一份标本2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶810ml（不少于5ml),共1620ml；要求至少采两套标本，即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1总血量下，一般不少于2ml，应先将标本注入需氧瓶，然后再厌氧瓶，采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染,采各种血液标本的先后顺序,尽量不要与其他采血同时进行血培养对无菌操作的要求比注射、采
5、集生化、凝血等其它标本要高。所以要最先采集血培养标本。,关于皮肤及培养瓶消毒,1、关于皮肤及培养瓶消毒推荐使用碘酊、碘伏、70%乙醇、次氯酸作为皮肤消毒剂。碘町、70%乙醇作用1min 碘伏作用1.5-2min,2、培养瓶的消毒程序：,去掉培养瓶口的塑料瓶盖。70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60秒。自然待干。将标本注入培养瓶内。5.轻轻颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。,培养瓶的储存温度,采集后的血培养应即送检，接种前后的血培养瓶均不得冷藏，更不能冷冻。保存在1525的室温即可，冷藏或冷冻会使一些微生物死亡,尿培养标本,采集及运送,尿培养送检指征,尿路感染、肾结核、泌尿系结石、膀胱排空功能受损
6、或前列腺增生等患者，出现尿频、尿急、尿痛等膀胱刺激症状肉眼脓尿或血尿，尿常规检查有白细胞或亚硝酸盐阳性不明原因的发热或留置导管的患者出现发热、尿道口有脓性分泌物等症状泌尿系统疾病手术前等情况,尿培养采集时间,应选择在抗菌药物应用之前采集尿液。通常应采集晨起第1次尿液送检，确保尿液在膀胱内停留4小时以上,尿培养标本,清洁中段尿导尿导管尿经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液不能立即送检者，可暂存4冰箱，但保存不超过8h,清洁中段尿液,尽量取早晨第一次尿液嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水女性病人收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水冲洗尿道口排出前段后，不停止尿流，采集中段尿男性病人翻转包皮，清洗尿道口
7、排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿,导尿管尿液,集尿袋内的尿液不能用作培养；导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。采样端口用碘酒消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过30分钟；将注射器针头斜插入采样端口，抽吸出510ml尿液；注入无菌杯中,膀胱穿刺采集尿液,常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。严格无菌操作消毒耻骨联合上皮肤，用无菌注射器穿刺入膀胱抽取510ml尿液置于无菌容器中并送检。可用于厌氧菌检测,尿培养标本的运送,应
8、及时送检室温下存放不得超过2小时（夏季更短），不能即时送检，应48度冷藏，但保存不得超过24小时，但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养若同一份标本中检到3种或以上不同种微生物，被认为标本污染，退回重送,生殖道和尿道标本送检指征,当患者出现斑疹、丘疹、结节、水疱、囊肿、糜烂、溃疡等皮肤黏膜损害男性患者出现尿痛、尿频、尿急、尿道分泌物增多，会阴部疼痛及阴囊疼痛、性功能障碍，甚至泌尿生殖器畸形和缺损等；女性患者出现阴道分泌物增多及性状异常、阴道痛痒、疼痛或性功能障碍,尿道分泌物采集方法,患者排尿1小时后采集男性先用生理盐水局部清洗，采取从尿道口溢出的脓性分泌物，或尿道内24cm旋转拭子停留2
9、0秒后取出分泌物送检女性清洗尿道口后，从阴道内压迫悄道或向前按摩，使分泌物溢出后采集标本，无肉眼可见的脓液，可用灭菌 拭子轻轻深入前尿道内24cm旋转拭子停出留20秒后，取出分泌物送检,生殖道标本本本采集标本,生殖器溃疡标本：用无菌盐水和手术刀清除溃疡面，暴露出溃疡基底，渗出物积聚较明显时，用拭子或吸管采集宫颈标本：原则上不采集宫腔分泌物，以免引起感染播散阴道标本：先清除阴道表面的分泌物，弃之，然后在后穹隆或阴道上端采集黏膜分泌物子宫内膜标本：清除阴道和宫颈分泌物后，用双腔真空吸引器或拭子采集宫内膜标本输卵管标本：在腹腔镜或剖宫产术下或将拭子插入输卵管采集羊水标本：经腹壁羊膜腔穿刺采集前列腺按
10、摩液：清洗尿道口，排尿冲洗尿道后，用前列腺按摩法采集前列腺按摩液精液标本：受检者应在5日以上未排精，清洗尿道口，采用手淫法或体外排精法受样,尿道和生殖道标本送检,室温下标本2小时内送至实验室（夏季缩短）淋病奈瑟菌培养避免冷藏或冷冻，外界气温低时应注意保温阴道内有大量正常菌群存在，采取宫颈标本应避免触及阴道壁,呼吸道标本,采集与运送,上呼吸道感染送检指征,病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养细菌性咽-扁桃体炎：明显咽痛、咽部发红、畏寒、发热，体温可达39度以上喉咙痛、咳嗽、喉部有脓样分泌物等临床症状上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管-支气管炎，需送相应部位分泌物或
11、痰液进行细菌培养,上呼吸道感染部位及采集,上呼吸道标本包括：口咽、鼻咽和鼻腔部位鼻拭子的采集：最好使用扩鼻器，先用拭子去鼻黏膜表面的分泌物并丢弃，用第2个拭子蘸取无菌生理盐水或营养肉汤，插入鼻孔采集咽拭子的采集：先让患者有清水漱口，用无菌咽拭子由口腔进入，越过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，采集鼻咽红肿处标本，取材后小心将拭子退出，立即放入无菌试管内。采集标本可在咽部多点采集标本，以提高检出率,上呼吸道标本的注意事项,采集后应立即送检，室温运送时间2小时避免由干燥而使某些细菌死亡标本采集前数小时不得用消毒药物漱口或涂抹病灶局部咽部是呼吸和食物的通路，应以晨起后采集为宜,下呼吸道标本的送检指征,凡是发
12、热、咳嗽、和咳痰，痰呈脓性、黏稠或血性，并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音外周血WBC总数及中性粒细胞比例明显增高X线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道标本,咳痰方法,病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液无痰可用35NaCl 5ml雾吸约5min导痰取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰,痰标本细胞学筛选标准,近年来推荐判别标本合格的简单方法是痰标本涂片镜检10个白细胞低倍镜，就可判断是基本合格并可用于细菌培养的标本，尤其是白细胞减少的患者。,痰培养的运送和保存,尽
13、快（2h）送至实验室。如不能及时送达，应将标本暂存于4（疑为肺炎链菌感染、流感嗜血杆菌等标本不能冷藏），但放置时间不可超过24h。对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续23天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养。,粪便标本,采集及运送,粪便标本采集指征,腹泻、大便每日3次，粪便的性状异常，可为稀便、水样便、脓血便及血便，可伴有恶心、呕吐、食欲不振、发热、腹痛及全身不适等，尽量在用药前采集粪便。伤寒患者于发病2周后采集粪便。怀疑霍乱时立即采集粪便送检。粪便涂片镜检WBC 5个/HP,粪便标本采集方法,自然排便法：取新鲜粪便的黏
14、液、脓血等有意义成份2-3克或1-2ML，置于无菌容器中送检。直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难者及幼儿采用此法。,粪便标本的运送,室温条件下运送标本的时间不能超过2小时怀疑霍乱弧菌感染立即送检,脓液标本的采集,怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后12日采集开放性脓肿：标本包括眼（结膜、角膜）、外耳、扁桃体、术后切口感染等脓性分泌物。开放性脓肿：首先用无菌生理盐水清洗病灶表面的污染杂菌，用无菌棉拭子先蘸少许生理盐水，然后采集靠近组织部分脓液及病灶深部的分泌物（最好从脓肿底部或脓肿壁取样,脓液标本的采集,闭锁性脓肿：指有完整脓壁与体腔，与外界不相通的脓肿，如疖、痈
15、、淋巴结脓肿、乳腺脓肿、肺脓肿、脑脓肿、肾周脓肿、阑尾脓肿、腹腔积液、心包积液、腹腔脓肿、关节腔积液、肛周脓肿等标本闭锁性脓肿：应采集渗出物和脓肿壁标本，不主张用拭子采集，在采集此类标本前，对患者病灶局部皮肤或黏膜表面进行消毒，用无菌注射器将脓肿内容物吸出，然后切开脓肿、引流，采集脓汁（大于1ml)用于检验闭锁性脓肿：可以进行厌氧培养,脑脊液标本,采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最好是在应用抗生素之前采集脑脊液。采集方法:无菌腰穿采集脑脊液1-3ML注入血培养瓶中（只要需氧菌培养）标本送检：采集后应在15分钟内送检，延误室温保存，但不超过24小时，决不可放入冰箱,穿刺液标本,穿刺液标本包括胆汁、胸腹水、关节液、心包液、鞘膜积液标本等。无菌操作穿刺抽取标本15ML，放入无菌瓶或接种于血培养瓶标本送检：采集后应在15分钟内送检，延误室温保存，但不超过24小时，若做真菌培养需4保存 做此类标本的同时，建议同时做血培养及厌氧菌培养,不建议采用的标本,
