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1、1,临床免疫学是免疫学中一个重要的分支学科，它应用免疫学的理论与技术，研究疾病的病因、发生、发展和转归并对疾病进行诊断和防治。临床免疫学检测常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等疾病的诊断与疗效监测,以及移植后免疫监测和治疗。,2,第一节 体液免疫检测,一、免疫球蛋白 免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)是一组具有抗体活性的球蛋白，由浆细胞合成与分泌，存在于机体的血液、体液、外分泌液以及部分细胞的表面，应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分为五类：即IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。,3,第一节 体液免疫检测,4,(一)免疫球蛋白G IgG主要由脾
2、脏和淋巴结中的浆细胞合成与分泌，约占血清中总Ig的70-80，是血清中主要的抗体成分，属再次免疫应答抗体，在机体的免疫防御中起重要作用。另外IgG是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白，使新生儿获得免疫性抗体。参考值 7.016.6g/L临床意义1、生理变化2、病理变化IgG增高：各种原因的慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、SLE、类风湿性关节炎；单纯IgG增高，主要见于免疫增殖性疾病。IgG减低：,第一节 体液免疫检测,5,（二）免疫球蛋白AIgA分为血清型（约占血清中总Ig的10-15）与分泌型两种。参考值 成人IgA 0.73.5g/L临床意义1、生理变化2、病理变化IgA增高：IgA型MM、SLE、类
3、风湿性关节炎、肝硬化、中毒性肝损伤。IgA减低：常见于反复呼吸道感染患者、重链病、轻链病、原发性和继发性免疫缺陷病。,第一节 体液免疫检测,6,(三)免疫球蛋白MIgM为五聚体，是初次免疫应答反应中的Ig,由5个IgM单体连接而成，分子结构呈环形，是Ig中分子量最大者。在个体的发育过程中，IgM是出现最早的Ig，当机体受到抗原刺激后，IgM亦是最早出现的抗体。参考值 0.52.6g/L临床意义1、生理变化2、病理变化IgM增高：初期病毒性肝炎、SLE、RA、肝硬化,单纯IgM增高提示原发性感染。Ig减低：IgG型重链病、先天性免疫缺陷病、免疫抑制剂治疗后、淋巴系肿瘤、肾病综合症。,第一节 体液
4、免疫检测,7,(四)免疫球蛋白E免疫球蛋白E(immunoglobulin E，IgE)为血清中最少的一种Ig，约占血清总Ig的0.002。它是一种亲细胞性抗体，是介导型变态反应的抗体,与变态反应、寄生虫感染及皮肤过敏等有关。参考值 成人血清O.10.9mgL,第一节 体液免疫检测,8,临床意义1、生理变化2、病理变化IgE增高：IgE型MM、重链病、肝脏病、RA、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、间质性肺炎、荨麻疹、寄生虫感染、嗜酸性粒细胞增多症、疱疹样皮炎。IgE减低：先天性或获得性丙种蛋白缺乏症、免疫抑制剂治疗后、淋巴系肿瘤、肾病综合症。,第一节 体液免疫检测,9,(五)M蛋白M蛋白(M prot
5、ein)或称单克隆免疫球蛋白 参考值 蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。临床意义 检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：多发性骨髓瘤：以IgG型最常见；巨球蛋白血症(Waldenstrom症)：存在大量单克隆IgM；重链病：出现Ig重链（、和重链)；恶性淋巴瘤；半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段；良性M蛋白血症；轻链病,第一节 体液免疫检测,10,二、补体系统 补体(complement)是血清中具有酶活性的一种不耐热球蛋白，由三组球蛋白分子组成。第一组：由九种补体成分组成(C1C9)；第二组：包括B因子、D因子、P因子、H因子等；第三组：则为补体调
6、节蛋白，如C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子等。血清总补体活性或其单一补体成分的变化对某些疾病的诊断与疗效观察有极其重要的意义。,第一节 体液免疫检测,11,（一）总补体溶血活性(CH50)测定Total Complement Hemolytic Activity CH50主要反映经典途径补体的综合水平参考值50000100000U/L临床意义1.CH50活性增高 常见于急性炎症、急性组织损伤、恶性肿瘤及妊娠。2.CH50活性降低 见于各种免疫复合物疾病(肾小球肾炎)、自身免疫性疾病活动期、慢性肝炎、肝硬化、HIV。,第一节 体液免疫检测,12,(二)血清补体(complement 3，C3
7、)C3测定 血清补体C3是血清中含量最高的补体成分。参考值 免疫比浊法 0.81.5g/L临床意义 1.生理性变化2.病理性变化1血清C3含量增高 见于一些急性时相反应2血清C3含量降低 见于补体合成能力降低，如慢性肝病、肝硬化、肝坏死；补体合成原料不足，如营养不良(多见于儿童)；补体消耗或丢失太多，如系统性红斑狼疮活动期、急性链球菌感染后肾小球肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、慢性活动性肝炎、疟疾等；先天性补体缺乏，如遗传性C3缺乏症。,第一节 体液免疫检测,13,(三)血清补体C4(complement 4,C4)测定 血清补体C4由肝脏、吞噬细胞合成,在Mg+的参与下，C4裂解为
8、C4a与C4b二个片段，参与补体的经典激活途径。参考值 成人：0.20.6g/L临床意义 1.生理性变化2.病理性变化1增高 见于各种传染病、急性炎症、组织损伤。2降低 见于自身免疫性肝炎、狼疮性肾炎、SLE、类风湿性关节炎、IgA肾病、遗传性IgA缺乏症等。,第一节 体液免疫检测,14,第二节 细胞免疫检测,淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，占外周血白细胞总数的20-40，根据表型和功能可分为不同的群体，如T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞等，T细胞和B细胞还可进一步分为若干亚群。这些淋巴细胞群和亚群在免疫应答过程中相互协作、相互制约，共同完成对抗原物质的识别、应答和清除，从而维持机体
9、内环境的稳定。临床上常对淋巴细胞的数量，表面标志及功能进行检查，以了解机体的细胞免疫情况。,一、T细胞亚群的检测,T淋巴细胞是由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成，在形态学上难以区分，但是可借助于其细胞膜表面分子加以区别，这些细胞膜表面分子即为T淋巴细胞的表面标志(T lymphocyte surface marker)。T淋巴细胞表面标志检测的方法众多，如E玫瑰花形成试验、免疫荧光法(IFA)、流式细胞术(FACS)、免疫金银法以及免疫酶染色法等。,16,17,T细胞分化抗原测定通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，再加入荧光素标记的抗某种T淋巴细胞的表面标志的单克隆抗体，孵育2030min
10、后，用荧光显微镜进行计数，并计算出阳性细胞的百分率。也可用FACS进行分析，此法较其它方法快速，准确，可靠。参考值,一、T细胞亚群的检测,18,临床意义1.CD3+降低 常见于自身免疫病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎；免疫缺陷病，如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。2.CD3+/CD4+降低 常见恶性肿瘤,艾滋病,某些病毒感染,应用免疫抑制剂等；3.CD3+/CD8+降低 常见于自身免疫病,变态反应病。4.CD4+/CD8+增高 常见于自身免疫病,病毒性感染,变态反应病,常预示可能发生移植排斥反应。5.CD4+/CD8+降低 常见于AIDS、恶性肿瘤进行期和复发时。,一、T细胞亚群的检测,1
11、9,二、B细胞分化抗原检测,B淋巴细胞简称B细胞，由骨髓中淋巴样前体细胞分化而来，是体内唯一能产生抗体的细胞。与T细胞类似，B细胞表面有表面抗原与表面受体两大类。表面抗原包括CDl9、CD20、CD21、CD22和CD40等；表面受体包括B细胞抗原受体(BCR)、细胞因子受体(CKR）参考值 FACS：CDl9+细胞 11.743.73临床意义 CDl9为全部B细胞共有的表面标志，B细胞活化后不消失，因此是最重要的B细胞标记分子。CDl9+升高 见于B细胞系统的恶性肿瘤，急、慢性淋巴细胞白血病，Burkitt淋巴瘤CDl9+降低 见于体液免疫缺陷病，无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂。,2
12、0,三、自然杀伤细胞免疫检测,自然杀伤细胞活性测定参考值流式细胞术 13.8%5.9%临床意义NK细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标NK细胞活性降低 见于血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染。NK细胞活性升高 见于宿主抗移植物反应,21,四、细胞因子检测,(一)白细胞介素2活性和白细胞介素2受体测定 白介素2(interleukin-2，IL-2)是白细胞介素中的一种。主要由活化T细胞产生，是具有多向性作用的细胞因子。它对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。临床意义 IL-2：随年龄的增长，有降低趋势。增高：见于自身免疫性疾病(SLE、RA等)、再生障碍性贫血
13、、多发性骨髓瘤、排斥反应等。降低：见于免疫缺陷病(艾滋病等)、恶性肿瘤、1型糖尿病、某些病毒感染等；IL-2R：对急性排斥反应和免疫性疾病有诊断意义。可作为病情观察和药效监测的一项指标。,22,(二)肿瘤坏死因子测定肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)分为TNF和TNF两型。,TNF,单核细胞,吞噬细胞,来源于,TNF,来源于,T淋巴细胞,两型的结构不同，生物活性类似。两型都有引起肿瘤组织出血、坏死和杀伤作用，都可引起抗感染的炎症反应，以及对免疫细胞进行调节、诱生。,参考值ELISA法4.32.8gL,四、细胞因子检测,23,临床意义TNF有炎症介质作用，能阻止内
14、毒素休克、DIC的发生；有抗感染效应，抑制病毒复制和杀伤病毒感染细胞；有抗肿瘤作用，杀伤和破坏肿瘤细胞。血中TNF水平增高特别对某些感染性疾病(如脑膜炎球菌感染)的病情观察有价值。,四、细胞因子检测,24,(三)干扰素测定干扰素(intrferon,INF)是宿主细胞受病毒感染后产生的一种非特异性防御因子,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、抑制细胞增殖的作用。参考值1-4kU/L临床意义增高 见于SLE、非活动性RA、恶性肿瘤早期、急性病毒感染、再生障碍性贫血。减低 见于乙型肝炎及携带者、哮喘、活动性RA。,四、细胞因子检测,25,肿瘤标志物(tumor marker，TM)是由肿瘤细胞本身合成、
15、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质，存在于血液、细胞、组织或体液中，反映肿瘤存在和生长。包括蛋白质、激素、酶和多胺等，TM的检测对肿瘤的诊断、鉴别诊断、疗效观察以及预后评价具有一定的价值。,第三节 肿瘤标志物检查,26,理想标志物特点灵敏度高；特异性好；有器官特异性；与病情严重程度、肿瘤大小或分期有关；监测肿瘤治疗效果；监测肿瘤复发；预测肿瘤预后,第三节 肿瘤标志物检查,27,一、蛋白质类肿瘤标志物的检测,(一)甲胎蛋白测定 甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP或aFP)是在胎儿早期由肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白。出生后，AFP的合成很快受到抑制。当肝细胞或生殖腺胚
16、胎组织发生恶性病变时，有关基因重新被激活，使原来已丧失合成AFP能力的细胞又重新开始合成，以致血中AFP含量明显升高。因此血中AFP浓度检测对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。,28,参考值RIA、ELISA、CLIA法25gL。临床意义 1原发性肝细胞癌患者血清AFP增高，增高率约为67.874.4；约有50超过300gL，约有18的原发性肝癌患者其AFP为阴性。2生殖腺胚胎癌(睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌时，血中AFP含量也可升高。3病毒性肝炎、肝硬化时AFP也有不同程度的升高，通常300gL。4妊娠3-4个月，孕妇AFP开始升高；7-8个月达高峰，以后下降；但多
17、低于400gL。胎儿神经管畸形、双胎、先兆流产等可使孕妇血液和羊水中AFP升高。,一、蛋白质类肿瘤标志物的检测,29,(二)癌胚抗原测定癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)是一种富含多糖的蛋白复合物。胎儿早期的消化管及某些组织均有合成CEA的能力，但孕六个月以后含量逐渐减少，出生后含量极低。是一种广谱性肿瘤标志物，检测它对肿瘤的诊断、预后、复发判断、疗效监测有意义。参考值 ELISA、RIA、CLIA法5gL,一、蛋白质类肿瘤标志物的检测,30,临床意义1CEA明显增高见于90的胰腺癌、74的结肠癌、60的乳腺癌患者，常超过60gL。此外胃癌、肺癌也增高。2动态
18、观察，一般病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高。3结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿及支气管哮喘等也常见CEA轻度升高。4少数大量吸烟者CEA5gL,一、蛋白质类肿瘤标志物的检测,31,(三)前列腺特异抗原测定 前列腺特异抗原(prostate specific antigen，PSA)是一种由前列腺分泌的单链糖蛋白，它存在于前列腺管道的上皮细胞中，在前列腺癌时可见PSA血清水平明显升高。现在发现血清总PSA(t-PSA)中有80以结合形式存在(c-PSA)；20的以游离PSA形式存在(f-PSA)。其比值对诊断更有特异和准确性。参考值RIA、CLIA、ELISA法：t-PSAO.25。
19、,一、蛋白质类肿瘤标志物的检测,32,临床意义1前列腺癌时6090患者血清PSA水平明显升高；当行外科切除术后，90患者血清PSA水平明显降低。2术后若PSA水平无明显减低或升高，即有转移或复发的可能。前列腺增生、前列腺炎等良性疾病，约有14的患者血清PSA水平升高，应注意鉴别。3当t-PSA为4.0-10.0g/时，f-PSA/t-PSA比值对诊断意义更大，0.1提示前列腺癌。4.肛门指诊、前列腺按摩、膀胱镜检查、前列腺手术可引起PSA增高。,一、蛋白质类肿瘤标志物的检测,33,（四）鳞状上皮细胞癌抗原测定（squamous cell carcinoma antigen SCCA）参考值 1
20、.5 g/临床意义1.血清SCCA增高见于肺鳞状细胞癌；、期食管癌；宫颈癌。2.NACB推荐SCCA用于宫颈癌的预后评估、监测疗效和肿瘤复发。临床也常用于肺鳞状细胞癌、食管癌的监测3.部分良性疾病也可引起SCCA增高。,一、蛋白质类肿瘤标志物的检测,34,二、糖脂肿瘤标志物检测,(一)糖链抗原199测定 糖链抗原199(carbohydrate antigen 19-9，CAl99)是一种糖蛋白。胚胎期分布于胎儿的胰腺、肝胆和肠等组织；在成人的唾液腺、胰腺、乳腺、胆管、胆囊等部位也有少量存在。参考值 血清CAl993.7万U/L(ELISA、CLIA、RIA),35,临床意义 胰腺癌、肝胆和胃
21、肠道疾病时血中CAl99的水平可明显升高。1目前认为CAl99是胰腺癌的首选肿瘤标志物，胰腺癌早期，当特异性为95时，敏感性可达8090。若结合CEA检测，敏感性可进一步提高2.510胰腺癌CAl99不升高3.胆囊癌和胆管癌为85左右，胃癌、结肠癌为40，直肠癌为3050；对早期病人的敏感度仅为30。4连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有重要价值。5急性胰腺炎、胆汁淤积型胆管炎、胆石症、急性肝炎、肝硬化等，血清CAl99也可出现不同程度的升高。6若结合CEA检测，对胃癌诊断符合率可达85。,二、糖脂肿瘤标志物检测,36,(二)癌抗原125测定癌抗原125(cancer antig
22、en 125，CAl25)为一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内。当患有上皮性卵巢癌和子宫内膜癌时，病人血清CAl25水平可明显升高。参考值 3.5万UL,二、糖脂肿瘤标志物检测,37,临床意义 1CA125存在于卵巢癌组织细胞和浆液型腺癌组织中,不存在于黏液性卵巢癌中.早期诊断和复发诊断的敏感性可达5090，故对诊断卵巢癌有较大临床价值，尤其对观察治疗效果和判断复发较为灵敏。2宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、胆道癌、肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌等也有一定的阳性反应。33-6的良性卵巢瘤、子宫肌瘤病人血清CAl25有时也会明显升高，但多数不超过10万UL。4肝硬化失代偿期血清CAl25明显
23、升高。5.可用于鉴别卵巢包块。6.早孕期(3个月)CAl25也可升高。,二、糖脂肿瘤标志物检测,38,（三)癌抗原153测定癌抗原153(cancer antigen 153，CAl53)是由抗原决定簇、糖和多肽组成的糖蛋白。在乳腺癌患者的血清中可见CAl53的水平明显升高，所以对乳腺癌有重要的辅助诊断作用，但其特异性有限。参考值2.5万UL。,二、糖脂肿瘤标志物检测,39,临床意义 1乳腺癌时，30-50的患者可见CAl53明显升高，但在早期乳腺癌时，它的阳性率仅为20-30左右。不能用于筛查和早期诊断,用于观察乳腺治疗后有无复发及检测乳腺癌的转移。2在转移性卵巢癌、结肠癌、肝癌、肺癌、子宫
24、肿瘤时可增高。3乳腺、肝脏、肺的良性疾病，CAl53也可升高。,二、糖脂肿瘤标志物检测,40,(四)癌抗原50测定(CA50)主要由唾液酸糖脂和唾液酸糖蛋白组成,对肿瘤的诊断无器官特异性。(五)癌抗原724测定(CA724)是胃肠道和卵巢肿瘤的标志物(六)癌抗原242测定(CA242)增高见于胰腺癌、结肠癌、胃癌；卵巢癌、子宫癌、肺癌也可见增高。,二、糖脂肿瘤标志物检测,41,三、酶类肿瘤标志物检测,(一)神经元特异性烯醇化酶测定(neuron specific enolase，NSE)在糖酵解途径中，烯醇化酶催化甘油分解。它由三个亚基(、)组成的二聚体，并形成5种同工酶(、)。亚基的同工酶存
25、在于神经元和神经内分泌组织，称为神经元特异性烯醇化酶，它与神经内分泌起源的肿瘤有关。参考值RIA或ELISA法为15gL。,42,临床意义1小细胞肺癌时，NES水平高出其他类型肺癌的510倍，灵敏度达80，特异性达80-90；其他组织型肺癌仅10-20的病人NES升高。因此它可作为小细胞肺癌的高特异性和高灵敏度的标志物。2NES是神经母细胞瘤的标志物，其灵敏度可达90以上。发病时，NES水平明显升高。有效治疗后降低，复发后又升高。3正常红细胞中存在NES，标本溶血影响结果。,三、酶类肿瘤标志物检测,43,(二)-L-岩藻糖苷酶测定-L-岩藻糖苷酶(-L-fucosidase，AFU)是一种溶酶
26、体酸性水解酶，广泛存在于人体组织细胞，参与糖蛋白、糖脂和寡糖的代谢。在原发性肝癌患者血清中增高，是原发性肝癌的标志物之一。参考值 ELISA法和分光光度连续监测法为：234414molL。,三、酶类肿瘤标志物检测,44,临床意义181.2的原发性肝癌患者血清AFU水平增高，与AFP联合检测可提高原发性肝癌诊断阳性率达93.1。2动态观察对判断肝癌疗效、预后、复发有重要意义。3血清AFU在转移性肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌也可增高；在肝硬化、慢性肝炎、消化道出血等也有轻度增高。,三、酶类肿瘤标志物检测,45,(三)前列腺酸性磷酸酶测定PAP(prostatic acid phosphata
27、se)是前列腺外分泌物中能水解磷酸酯的糖蛋白。参考值2.0gL临床意义前列腺癌时血清PAP明显增高,其程度与癌瘤发展基本呈平行关系,可用于监测转移、复发和预后。,三、酶类肿瘤标志物检测,46,四、肿瘤标志物的选用,同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多种肿瘤当中。选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤诊断的阳性率。动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别，以及肿瘤疾病复发、转移和预后判断。,47,四、肿瘤标志物的选用,48,第四节 自身抗体检测,自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是指由于某些原因造成免疫系统对自身成分的免疫耐受性减低或破坏，致使自身抗体或致敏淋巴
28、细胞损伤含有相应自身抗原的器官组织而引起的疾病，表现为相应的组织器官的功能障碍。自身免疫性疾病按自身抗原分布的范围可分为器官特异性(organ specific)和非器官特异性(non-organ specific)两类。前者指自身抗原为某一器官的特定成分，病变也严格局限于该器官。后者是指自身抗原为细胞核或细胞浆成分，病变可遍及全身各组织器官。,49,全球发病率:约为3%国内:多发性硬化病800-1000万 系统性红斑狼疮70-90万 类风湿性关节炎300-400万5D 痛苦Discomfort 残疾 Disability 死亡Death 药物中毒Drug reactions 经济损失Doll
29、ar lose,第四节 自身抗体检测,50,自身免疫性疾病通常可有以下临床特征：患者以女性多见，并有遗传倾向；患者血中可以检测到高滴度的自身抗体；患者组织器官的病理特征为免疫炎症；用相同的抗原在实验动物中可复制出相似的模型；自身免疫性疾病有重叠现象；多数病因不明，常呈自发性或特发性；病程较长，病情迁延反复，易伴发免疫缺陷性疾病或恶性肿瘤；用免疫抑制药物治疗有一定疗效。,第四节 自身抗体检测,51,一、类风湿因子测定,类风湿因子是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。它有IgM型，也有IgG、IgA、IgD和IgE型。用乳胶凝集法测出的主要是IgM型
30、；速率法敏感但不能分类型。参考值 乳胶凝集法 血清稀释度低于l:10 速率比浊法 30kUL。,52,临床意义类风湿性疾病，RF阳性70%-90%；类风湿关节炎的阳性率为70。IgG型与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关；IgM和IgA型的效价与病情有关。其他自身免疫性疾病，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综合征、SLE也见RF阳性。某些感染性疾病，也多呈现阳性反应。故本试验的特异性不高，应予鉴别。,一、类风湿因子测定,53,（一）抗核抗体测定 抗核抗体(anti-nuclear antibody，ANA)是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，无器官和种属特异性。用间接免疫荧光法检查ANA时，
31、有几种荧光图谱：均质型：此型与抗dsDNA和抗组蛋白抗体有关。核膜型：此型对应的抗核孔复合物和抗板层素抗体。颗粒型：与抗U1-RNP、抗Sm、抗Scl-70、抗SS-ARo、抗SS-BLa等有关。核点型着丝点型核仁型：此型与针对核糖体、U3-RNP、RNA聚合酶的抗体有关。,二、抗核抗体检测,54,55,（二）可提取性抗原抗体谱测定可提取性抗原（extractable nuclear antigen ENA）有多种相对分子量不同的多肽构成。,二、抗核抗体检测,56,57,(三)抗DNA抗体测定 抗DNA抗体分为抗双链DNA抗体(double stranded DNA antibody，dsDN
32、A)、抗单链DNA抗体(single stranded DNA antibody，ssDNA)和抗Z-DNA抗体。抗dsDNA抗体的靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构。结果判断 间接免疫荧光法阳性时，dsDNA与马疫锥虫动基体结合发出致密荧光亮点。临床意义 抗dsDNA抗体阳性 见于活动期系统性红斑狼疮(SLE)，阳性率70%-90%。本试验特异性较高，但敏感性较低。抗dsDNA抗体的检测对于SLE的诊断和治疗监控极为重要，是SLE诊断标准之一。也是迄今为止参与SLE发病机制唯一的一种自身抗体。抗ssDNA抗体阳性 见于SLE，尤其合并有狼疮性肾炎。,二、抗核抗体检测,58,（四）抗胞质抗体检
33、测抗线粒体抗体检测(anti-mitochondrial antibody,AMA)AMA是一组以线粒体内膜和外膜蛋白为靶抗原、无器官和种属特异性的一种自身抗体；主要是IgG。临床意义 许多肝脏疾病可检出AMA。原发性胆汁性肝硬化（PBC）时AMA阳性率可达90以上，M2是其重要血清学标志。药物性自身免疫性肝病患者的AMA通常为M3和M6。AMA可作为原发性胆汁性肝硬化和肝外胆道阻塞性肝硬化的鉴别诊断指标之一,二、抗核抗体检测,59,三、抗组织细胞抗体检测,.抗肾小球基底膜抗体检测（GBM）临床意义抗GBM抗体是抗基底膜抗体型肾小球肾炎特异性抗体。.抗胃壁细胞抗体(PCA)临床意义慢性萎缩性胃
34、炎PCA100%阳性，恶性贫血PCA90%阳性。.抗甲状腺抗体(TG&TM)临床意义TG、TM见于桥本甲状腺炎；TG阳性见于甲亢；TM见于甲减,60,.抗平滑肌抗体检测（SMA）临床意义抗平滑肌抗体主要见于自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、急性病毒性肝炎。.抗心肌抗体检测临床意义心肌炎、心肌衰竭、风湿热、重症肌无力。.肝脏相关自身抗体检测(LKM&SLA)临床意义见于自身免疫性肝炎,三、抗组织细胞抗体检测,61,四、其他抗体检测,.抗中性粒细胞胞质抗体检测（ANCA）血管炎是指以血管壁炎症坏死为基础病理所引起的一组疾病，ANCA是血管炎的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异性指标。分为cANCA
35、、pANCA。（1）cANCA 抗蛋白酶3抗体 抗PR3抗体 阳性见于韦格纳肉芽肿（WG）（2）pANCA 抗髓过氧化物酶抗体 抗MPO抗体 阳性见于血管性肾炎、多动脉炎、自身免疫性肝炎、风湿性和胶原性血管炎、溃疡性结肠炎、PBC,62,.抗心磷脂抗体测定 各种带负电荷的磷脂是细胞膜的主要构成成分，其中心磷脂最为重要。抗磷脂抗体是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体，包括抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody，ACA)、抗磷脂酰丝氨酸等。ACA是以心磷脂为靶抗原的一种自身抗体。结果判断 ELISA PN2.1则为阳性。,四、其他抗体检测,63,临床意义 ACA见于系统性红
36、斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征等风湿病患者，反复自然流产患者、以及肿瘤、感染(AIDS、麻风、疟疾等)、血小板减少症、脑卒中、心肌梗死患者。高水平的ACA是急性脑血管病愈后不良的信号。约70未经治疗的ACA阳性患者可发生自发性流产和宫内死胎，尤其是IgM型ACA可作为自发性流产的前瞻性指标。,四、其他抗体检测,(三).抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体针对的主要抗原位点是丝集蛋白中的瓜氨酸。参考值 ELISA法:阴性临床意义 对RA诊断的敏感性是50-78%，特异性为96%。2010年被列为RA的分类诊断标准之一，有助于 RA的早期诊断，并于RA的活动性相关。,四、其他抗体检测,65,第五节 感染免
37、疫检测,病原体(细菌、病毒、立克次体、支原体、衣原体、寄生虫等)及其代谢产物刺激人体免疫系统所产生相应的抗体，可利用凝集试验、补体结合试验、沉淀试验、免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫试验(RIA)等手段进行检测；近年来，也利用PCR或DNA探针杂交技术对病原体核酸进行检测。,66,一、细菌感染免疫检测,(一)抗链球菌溶血素“O”测定 链球菌溶血素“O”(streptolysin“O”)是A族溶血性链球菌的重要代谢产物之一，它是一种具有溶血活性的蛋白质，能溶解人及一些动物的红细胞。同时链球菌溶血素“O”具有抗原性，能刺激机体产生对应的抗体，称为抗链球菌溶血素“O”
38、(anti-streptolysin“O”，ASO)。参考值 阴性临床意义阳性表示近期有A群溶血性链球菌感染常见于活动性风湿热、风湿性关节炎、风湿性心脏病、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染。,67,(二)肥达(Widal)反应 伤寒、副伤寒沙门菌含有菌体“O”抗原和鞭毛“H”抗原(副伤寒沙门菌甲、乙、丙的“H”抗原分别为A、B、C)。机体感染一周后，能逐渐产生相应抗体。参考值 伤寒H1:160，O1:80；副伤寒A、B、C1:80临床意义(1)O升高，H正常：伤寒发病早期或其他沙门菌感染的交叉反应。(2)O正常，H升高：不久前曾患过伤寒或伤寒疫苗接种后，或非特异性回忆反应.(3)O升高，H升高
39、：伤寒可能性大.(4)O升高，A、B、C任何一项升高：可能分别为副伤寒甲、乙、丙。,一、细菌感染免疫检测,68,（三）结核分枝杆菌抗体和DNA测定结果判定ELISA：结核抗体阴性 PCR：结核分枝杆菌DNA阴性临床意义用血清学方法检测抗体，敏感性和特异性可达90，简便、快速、灵敏，但有一定假阳性。PCR方法灵敏度高、特异性强、速度快，应防止标本污染,一、细菌感染免疫检测,69,（一）、TORCH试验 TORCH是指一组病原微生物的英文名称缩写。T即刚地弓形虫或弓形虫(toxoplasma gondii)，O即其它病原微生物(others)，R即风疹病毒(rubella virus)，C即巨细胞
40、病毒(cytomegalo virus)，H即单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)。这组病原体常可通过胎盘传给胎儿，引起围生期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍等各种异常结果，因此受到广泛关注。TORCH感染的抗体检查在许多地区已作为孕期检查的常规项目,二、病毒感染免疫检测,70,1、弓形虫(toxoplasma gondii)抗体测定 弓形虫感染是一种人畜共患疾病，广泛分布于世界各地。猫和其他宠物是主要传染源。人体感染后，轻型者常无症状，但血清中可查到抗体；重型者可引起各种症状，如高热，肌肉、关节疼痛，淋巴结肿大等。孕妇急性弓形虫感染后，直接威胁胎儿健康。临床
41、上检测弓形虫特异性IgM抗体来进行早期诊断。参考值 IFT，ELISA：阴性临床意义 孕早期感染者可引起流产、死胎、胚胎发育障碍；妊娠中、晚期感染者，可引起宫内胎儿生长迟缓和一系列中枢神经系统损害，眼损害以及内脏的先天损害等，严重威胁胎儿健康。,二、病毒感染免疫检测,71,2、风疹病毒(rubellavirus)抗体测定 风疹病毒直径为60nm，具单股RNA，属披膜病毒科。风疹是由风疹病毒引起的，对儿童来说，是一种症状较轻的出疹性疾病。但孕妇若在妊娠早期感染风疹病毒，新生儿致畸致残率80%，因此，对早孕妇女进行风疹病毒特异性IgM、IgG抗体监测有重要意义。参考值 ELISA：阴性临床意义 风
42、疹病毒IgM抗体阳性，提示有近期感染，必要时应终止妊娠。风疹病毒IgG抗体阳性，表示机体已受过风疹病毒感染，具有免疫力。,二、病毒感染免疫检测,72,3、巨细胞病毒(CMV)抗体测定 巨细胞病毒属于人类疱疹病毒，多数人在儿童或少年期受CMV感染而获免疫。CMV围产期感染是引起胎儿畸形的主要原因之一，还可引起早产、胎儿宫内发育迟缓等。由于临床表现缺乏特异性，故CMV感染的实验室检查对于该病的早期诊断与治疗至关重要。特异性抗-CMVIgM阳性为CMV近期感染的指标。参考值 ELISA：阴性临床意义1CMV可通过胎盘感染胎儿，引起早产、胎儿发育迟缓、新生儿畸形、黄疸脾肿大、溶血性贫血、视网膜脉络膜炎
43、等，新生儿死亡率高。2免疫功能受损者，如艾滋病、癌症、器官移植等病人感染CMV后，可合并多脏器疾病。,二、病毒感染免疫检测,73,4、单纯疱疹病毒抗体测定 单纯疱疹病毒(herpessimplexvirus，HSV)属疱疹病毒科。HSV原发感染后，机体最先出现IgM，随后出现IgA及IgG，抗体能防止病毒播散，但不能阻止复发。临床上检出特异性IgM阳性或双份血清特异性IgG抗体效价上升4倍或4倍以上，可提示HSV近期感染。参考值 间接血凝试验，ELISA：阴性临床意义 HSV型和型均有致畸作用，常影响新生儿神经发育。IgM抗体阳性提示近期有HSV感染。孕早期感染HSV者可导致流产，妊娠中、晚期
44、感染者，可引起胎儿和新生儿发病。,二、病毒感染免疫检测,74,（二）汉坦病毒抗体测定 汉坦病毒（Hanta virus HTV）属布尼亚病毒科，平均直径120nm，为单股负链RNA病毒，鼠是主要的携带者和传染源，人感染后可引起肾综合征出血热，临床以发热、出血、急性肾衰为主要特征，检测特异性抗体有助于早期诊断。结果判断IFA、ELISA:阴性临床意义感染后24天可检出特异性IgM，710天达高峰，IgG在病后2周出现，可持续多年。,二、病毒感染免疫检测,75,(三)柯萨奇病毒抗体测定 柯萨奇病毒(Coxsae以evirus)属微小核糖核酸病毒科肠道病毒属，直径为2030nm，核心内含单链RNA。
45、检测特异性IgM，对本病有早期诊断价值。参考值 间接血凝试验，IFA，ELISA法：阴性临床意义 柯萨奇病毒特异性IgM抗体阳性提示现症感染；特异性IgG为中和抗体，阳性提示既往感染。该方法测定的灵敏度为85，特异度可达95。,二、病毒感染免疫检测,76,二、病毒感染免疫检测,(四)轮状病毒抗体和RNA测定 轮状病毒(rotavirus，RV)属胃肠病毒科，直径7075nm，核心为双股RNA。分为A、B、C、D、E、F和G 7个组，其中A组主要引起婴幼儿腹泻；B组主要引起成人腹泻。人感染轮状病毒后，体内可产生特异性IgM和IgG抗体。参考值 阴性 临床意义 人类轮状病毒主要在寒冷季节流行，一般
46、通过粪-口途径传播。婴幼儿腹泻约50%由人类轮状病毒引起，常IgM阳性；也能引起较大儿童及成人腹泻。,77,三、寄生虫感染免疫检测,囊虫(cysticercosis)抗体测定 囊虫病是猪绦虫的蚴虫(囊尾蚴)寄生于人体所致。人因食入猪绦虫卵而感染。囊虫主要寄生在皮下组织、肌肉和中枢神经系统，以寄生在脑组织者最为严重。ELISA试验或间接血凝试验，可检出病人体内的特异性IgG抗体，有较高的特异性和敏感性，对临床诊断和流行病学调查均有实用价值。参考值 ELISA法：血清1:64为阴性；脑脊液1:8为阴性。临床意义 囊虫特异性IgG阳性，见于囊虫病，阳性率高达96。此病以东北、华北、河南、内蒙古自治区
47、较多见。,78,四、性传播疾病的免疫检测,（一）、梅毒螺旋体抗体测定梅毒是由苍白密螺旋体引起的性传播疾病，临床分为三期，病程可持续多年。苍白密螺旋体感染后，经过一段时间血清中可产生两种抗体，一种是抗类脂质抗原的非特异性抗体，也称为反应素，另一种是抗苍白密螺旋体的特异性抗体。,79,目前临床常用的筛查试验是快速血浆反应素试验（rapid plasma reagin RPR)。该试验是重要的辅助诊断标志物，阳性率在期患者可达76，期达95-100，隐性感染者可达70-80。荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)是确证试验,四、性传播疾病的免疫检测,80,81,
48、（二）、人类免疫缺陷病毒抗体测定获得性免疫缺陷综合征是由人类免疫缺陷病毒（HIV)引起的综合征。它源于非洲，早期在欧美流行，现在已波及到世界各地，有全球蔓延趋势。主要免疫学变化为CD4细胞耗竭，引起免疫缺陷和崩溃，导致肿瘤和多种病原体引起的感染发生，最终导致死亡。,四、性传播疾病的免疫检测,82,参考值筛选试验 ELISA法和快速蛋白印迹法:阴性确诊试验 蛋白印迹试验和RT-PCR法RNA:阴性临床意义抗HIV阳性代表HIV感染，对机体无保护性，患者发病潜伏期即可检测到。也是重要的健康查体及献血员筛查项目。,四、性传播疾病的免疫检测,83,第六节 移植免疫检测,一、移植类型二、排斥反应三、移植
49、免疫检测1.ABO血型配型2.HLA配型3.淋巴细胞毒交叉配合试验,84,第七节 其他免疫检测,一、循环免疫复合物检测 体内游离抗原与相应的抗体形成抗原抗体复合物，即免疫复合物(immunocomplex，IC)。IC可分为三种：血循环中的IC(circulating immunocomplex，CIC)为相对分子质量小的复合物(19S)；沉淀于组织中的IC为相对分子质量中等的复合物(19S)；被单核一吞噬细胞清除的 IC为相对分子质量大的复合物(19S)。通常检测的IC为循环免疫复合物。,85,参考值聚乙二醇(PEG)沉淀法低于正常对照值+2SD或A值O.12。抗补体试验 阴性 C1q结合试
50、验 阴性临床意义 1增高见于自身免疫病、感染、肿瘤、移植、变态反应等。2诊断免疫复合物病：如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎、血管炎、慢性活动性肝炎、部分肾小球肾炎等。,第七节 其他免疫检测,86,二、C反应性蛋白检测 C-反应性蛋白(c-reactive protein，CRP)是一种由肝脏合成的，能与肺炎双球菌C多糖起反应的急性时相反应蛋白。CRP能结合多种细菌、真菌、原虫以及核酸、磷脂酰胆碱等，有激活补体、促进吞噬和调节免疫的作用。广泛存在于血清和其他体液中。参考值2.87mg/L(速率散射比浊法),第七节 其他免疫检测,87,临床意义 CRP是急性时相反应极灵敏的指标。CRP升高
