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1、超声细胞破碎仪 SONIC-VC-130型,细胞破碎的方法,机械破碎法：是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器 等将细胞破碎开来。物理破碎法：指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。化学破碎法：指利用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜，使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改变。酶学破碎法：选用合适的酶，使细胞壁遭到破坏，进而在低渗溶液中将原生质体破碎开来。,一、机械破碎法 1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。2.玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆
2、来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。,二、物理破碎法超声波处理法：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂(借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器）。机制：可能与强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。超声波破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。（使用时注意降温，防止过热）,2.高压破碎：细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上，被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化，从而破碎释放内含物。这是一种温和
3、的、彻底破碎细胞的较理想的方法。3.反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。,三、化学破碎法：有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。浓度一般为1mg/ml。四、酶学破碎法：细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好。裂解液标准配方:：50mM Tris-HCl(pH8.59.0),2mM EDTA,100mM NaCl,0.5%Triton X-100,1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用)。,无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核
4、酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且应该在破碎的同时多加几次；另外，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。,用途：用于动植物细胞、细菌、芽孢或组织的粉碎，从细胞中提取蛋白质以及进行病毒、疫苗的科学培养实验。加速化学、物理学等的反应速度和加速液体脱气。原油稀释、油水乳化、加速脱晶，玻璃均浆等进行的科研分析。分散稀土，各类无机矿物质，以及配制近纳米百分之一的乳
5、胶体均化混合物等。模具微孔，盲孔的快速强力高精洗液,实验 超声细胞破碎技术,实验目的1 了解超声细胞破碎的基本原理2 掌握超声细胞破碎的基本技术实验原理 强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。,美国SON l C V1 30超声细胞破碎仪使用说明仪器配件及旋钮功能：1两种超声探头备选：小：由3mm处理样品体积范围：250ul-10ml 大：由6mm处理样品体积范围：10ml-25ml2PULSER旋钮：如打在OFF位置，则默认无间歇工作模式；如旋钮选择110间的数值。则工作模式为间歇式，暂停1秒，工作110秒：(间歇模式有利于降温和提高超
6、声效率)。3TIMER旋钮：设置总的工作时间为110分钟，按下旋钮之后生效，如不按下该旋钮则默认为无时间限制：4AMPLITUDE：选择振幅及输出功率。,材料和试剂细菌10ml、烧杯、刨冰、75酒精棉球仪器 超声细胞破碎仪：Sonic-vc-130型探头型号大小 破碎细胞容量：2mm：150ul5ml$265.5 3mm：200ul10ml$265.5 6mm：10ml50ml$265.513mm：50ml150ml$358.43,方法与步骤 1将样品连同冰盒放于载物台上，缓慢放下探头至液面下(不可过浅，否则易产生气泡)，固定好，探头严禁触碰容器壁！2根据需要设置PULSER及TIMER，关闭
7、隔音箱门，打开AMPLITUDE至适当数值，观察显示屏上输出功率大小，一般情况下选择1025watts之间为宜；3总的工作时间建议革兰氏阴性菌10一15分钟，革兰氏刚性菌2030分钟，细胞则应视胞膜强度而定，处理过程中样品温度应保持在4左右，请注意随时观察并调整探头位置，以避免触碰容器壁；4使用完毕后清理载物台，酒精棉球擦洗探头，旋钮复位。,使用前注意事项：1根据所处理的样本体积选择适当探头，使用前后均须用酒精棉球擦洗探头，换探头须刚专用扳手更换;2AMPLITUDE旋钮打开时，探头不得在空气中暴露，特殊情况下(测试探头)不应超过10秒；3使用前准备好冰盒，样品处理时必须置于冰浴中，样品浓度不可过大。,
