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1、,医 学 微 生 物 学(Medical Microbiology),第一篇 细菌学,第十三章 分枝杆菌属,掌握：结核分枝杆菌的生物学性状，卡介苗，致病性与免疫性。结核菌素试验的原理及意义微生物学检查与特异性预防了解：分枝杆菌属的通性和种类,教学目标,思考：,为何不同的病菌引起不同疾病？没有酶，也没有毒素的微生物能引起机体疾病吗？,郭霍德国的细菌学家,对肺结核研究方面有重大的发现，曾获诺贝尔医学和生理学奖。,他最卓越的贡献是发现肺结核的致病因素-结核杆菌。之后又研究鼠疫，霍乱和昏睡病，这项发现，连同莱佛兰和罗斯关于疟疾的研究成果指出了控制疾病的新方法。与其向细菌本身发起正面攻击，倒不如向往来于
2、人与人间携带病菌的昆虫媒介展开战斗。,概 述,分枝杆菌属是一类细长略弯曲的杆菌，因有分枝或出现丝状体而得名。,主要特性 种类多，引起人类疾病的主要有三种 不产生内、外毒素 所致感染多为慢性感染过程，长期迁延，并有破坏性的组织病变 胞壁中含有大量脂质 抗酸染色阳性，故称抗酸杆菌,抗酸染色法(acid-fast stain),染色步骤：5石炭酸复红加温染色再用3盐酸酒精脱色然后用美蓝复染,人类结核病的病原，人是唯一宿主 可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见 引起慢性疾病，伴有肉芽肿,第一节 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis),我国主要有人型和牛型结核分枝杆菌
3、全球性卫生问题,结核病是一种古老的疾病。中国医史中，结核病最早记载于内经并形容为“虚痨”之症。,19世纪，结核病在欧洲和北美大肆流行，生活困顿的人群成了结核病的温床。而且是当时造成死亡的主要原因，被人们称为“巨大的白色瘟疫”。许多当年杰出人物罹患结核病：雪莱、席勒、勃朗宁、梭罗等。结核病的流行甚至影响了诗人和艺术家的思想。,自发现MTB以来，全球约有两亿人死于TB，且疫情发展日趋严重。WHO已将TB作为重点控制的传染病之一，并于1995年起将每年的3月24日定为“世界防治结核病日”，以提醒公众加深对TB的认识。,现有病例,累积感染,20亿,累积死亡,95,全球,发展中国家,新增病例,98,死亡
4、人数,2000万,2亿,800万,300万,世界结核病防治现状,1995年，WHO将每年3月24日定为“世界防治结核病日”,我国属于全球22个TB高负担国家之一，TB患病人数在世界各国中居于第2位。我国TB流行具有“五多一高”的特点：感染人数多、现患病人多、死亡人数多、耐药人多、农村人多。传染性肺TB患者疫情居高不下。,男性，30岁，以反复午后低热伴咳嗽、少痰、消瘦3个月为主诉求诊，体检：T 38.3，双肺未闻及明显干湿罗音。血白细胞计数 8.0*109/升，中性粒细胞70%、淋巴细胞30%，X片可见双上肺炎症性改变，其间可见空洞性病变。问题：1）此病人最有可能患何疾病？依据？2）应做哪些微生
5、物学检查来确定诊断？3）如何治疗？在治疗中应注意什么？,（一）形态与染色 细长略弯曲，常聚集成团，分枝生长，有荚膜，因胞壁含有特殊的脂质导致抗酸染色（Ziehl-Neelsen）阳性,一、生物学性状,（二）培养特性,专性需氧菌，营养要求高 生长缓慢。菌落：干燥、坚硬、表面呈颗粒状、乳酪色或黄色，形似菜花样。液体培养基：粗糙皱纹状菌膜生长。,（三）抵抗力,但对湿热、紫外线、乙醇、抗结核药敏感,抗干燥；抗酸、碱：在3HCl、6H2SO4或4NaOH溶液中能耐受30 min；,（四）变异性,耐药性变异、形态、结构、菌落变异；,毒力变异-卡介苗（Bacillus Calmette-Gurin，BCG）
6、：1908年Calmette和Gurin将有毒的牛分枝杆菌培养于含胆汁、甘油、马铃薯的培养基中，经230次传代，历时13年，获得减毒株而仍保持良好免疫原性，从而制成了卡介苗（Bacillus Calmette-Gurin，BCG）。,总结：馋、懒、丑、变,二、致病性,传染源 排菌的空洞性肺结核患者，其他结核患者不是传染源传播途径 呼吸道、消化道和破损的皮肤黏膜进入机体所致疾病 肺内和肺外结核病，以肺结核最为常见。,（一）致病物质 1.荚膜：粘附与侵入、保护 2.脂质：磷脂-形成结核结节和干酪样坏死 索状因子-破坏细胞，引起肉芽肿 硫酸脑苷酯-保护菌体,（一）致病物质 1.荚膜：粘附与侵入、保护
7、 2.脂质：磷脂-形成结核结节和干酪样坏死 索状因子-破坏细胞，引起肉芽肿 硫酸脑苷酯-保护菌体 蜡质D，超敏反应 3.蛋白质：结核菌素，本身无毒但引起超敏反应,1.原发感染-多见于儿童原发灶：吞噬-生长繁殖-释出-再被吞噬，如此反复引起渗出性炎症病灶。,（一）所致疾病 肺部感染-两种类型,原发综合征：原发灶内结核杆菌可经淋巴管扩散到肺门淋巴结，引起淋巴管炎和淋巴结肿大，X线胸片显示哑铃状阴影。,转归：90原发灶大多可纤维化和钙化；5感染者可发展成活动性结核；极少数免疫力低下者可引起全身粟粒性结核或结核性脑膜炎。,2.原发后感染（继发感染）-多见于成年人,感染来源：大多为内源性感染，极少由外源
8、性感染所致。,继发感染的特点：病灶局限，一般不累及邻近的淋巴结，慢性肉芽肿性炎症，形成结核结节，易发生纤维化或干酪样坏死，若液化则形成空洞，成为开放性结核。病变常发生在肺尖部位。,骨结核,关节结核,淋巴结结核,三、免疫性与超敏反应,1.免疫特征,有菌免疫或传染性免疫抗结核免疫主要是细胞免疫,免疫与超敏反应的关系,在结核分枝杆菌感染时，细胞免疫与迟发型超敏反应同时存在，此可用郭霍现象（Koch,s phenomenon）说明：,在健康豚鼠皮下首次注射一定量结核分枝杆菌，10-14天后注射部位缓慢的出现溃疡，深而不易愈合，邻近淋巴结肿大，此时结核菌素测试为阴性；相同剂量的结核分枝杆菌注入曾感染并已
9、康复的豚鼠皮下，在1-2天内即迅速发生溃疡，但溃疡浅而易愈合，邻近淋巴结不肿大，结核菌素测试为阳性；在康复的豚鼠皮下注射大量结核分枝杆菌，则引起注射局部及全身严重的迟发型超敏反应，甚至导致动物死亡。,上述三种现象表明,首次感染出现的炎症反应偏重于病理过程，说明机体尚未建立起抗结核免疫力；再次感染发生的炎症反应则偏重于免疫预防，溃疡浅而易愈合，细菌不扩散，说明机体对结核分枝杆菌已具有一定的细胞免疫力，而溃疡迅速形成，则说明在产生免疫的同时有迟发型超敏反应发生。用过量的结核分枝杆菌进行再次感染，则引起剧烈的迟发型超敏反应，说明迟发型超敏反应对机体不利的一面。,2.结核菌素试验,概念：应用结核菌素测
10、定机体对结核分枝杆菌有无免疫力的一种型超敏反应,结核菌素试剂：OT和PPD方法：前臂掌侧皮内注射含5单位的PPD 0.1ml,结果与意义：阴性反应：无硬结或直径小于5mm 阳性反应：直径大于5mm 强阳性反应：直径大于15mm,应用：诊断婴幼儿的结核病；测定接种卡介苗后免疫效果；在未接种卡介苗的人群作结核分枝杆菌感染的流行病学调查；用于测定肿瘤患者的细胞免疫功能,标本：肺结核、肾或膀胱结核、肠结核、结核性脑膜炎取痰、尿、粪便、脑脊液,三、微生物学检查法,1、直接涂片或抗酸染色：咳痰直接涂片和浓缩集菌后涂片。若镜检到抗酸性杆菌，可能是，但通常应报告：查到抗酸性杆菌。脑脊液、尿液可直接离心集菌，咳
11、痰或粪便标本可先酸碱处理再离心集菌,2、分离培养：生长特点可作出鉴定生长缓慢、菌落干燥、颗粒、乳酪色、菜花样，抗酸染色性强。,3、结核分枝杆菌核酸及抗体检测 PCR，ELISA4、动物试验 豚鼠或地鼠，腹股沟皮下,四、防治原则,预防：接种卡介苗对象：婴儿是主要对象 出生、7y、12y,治疗：早期、联合、足量、规范、全程用药，尤以联合和规范用药为重要。常用药物有：异烟肼、利福平、链霉素、对氨水杨酸、乙胺丁醇、喹诺酮类等。,男性，30岁，以反复午后低热伴咳嗽、少痰、消瘦3个月为主诉求诊，体检：T 38.3，双肺未闻及明显干湿罗音。血白细胞计数 8.0*109/升，中性粒细胞70%、淋巴细胞30%，
12、X片可见双上肺炎症性改变，其间可见空洞性病变。问题：1）此病人最有可能患何疾病？依据？2）应做哪些微生物学检查来确定诊断？3）如何治疗？在治疗中应注意什么？,赵某，女，32岁，因发热、胸痛、咳嗽、血痰1周入院。近3个月来低热、午后体温增高、咳嗽，曾被诊断为“感冒“，用抗感冒药、先锋霉素等药物治疗，疗效欠佳。1周来体温增高、咳嗽加剧，痰中带血。半年来有明显厌食、消瘦，夜间盗汗。入院体检：T 38，消瘦。胸部X线见双肺纹理增粗，右肺尖有片状阴影。取痰液作细菌培养和抗酸检查均阳性，PPD试验强阳性。该病人家中有2岁小孩，病人家属询问小孩是否已被传染？问题:1)该患者最有可能患何疾病？由何病原体感染所致？2)该病例的PPD试验的结果说明什么？3)病人家里小孩怎样才能确定有无感染？怎样预防？,总 结,结核分枝杆菌的主要生物学特性、和引起的疾病？结核菌素试验,思考题,1.解释：BCG、结核菌素2.试述结核分枝杆菌的主要生物学特征。3.简述结核菌素试验原理、结果判断、意义及应用,下次课预习内容,第十四章 嗜血杆菌属,第一篇 细菌学,Thanks for Your Attention,
