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1、2011春季学期春季学期,电泳分析血清蛋白电泳血清免疫固定电泳,何肖娟南方医科大学生物化学与分子生物学实验教学中心,2011春季学期春季学期 19/4,电泳技术,电泳：溶液中带电粒子在电场中定向移动的现象称为电泳（electrophoresis）。电泳技术是利用带电粒子在电场作用下定向移动的特性，对混合物组分进行分离、纯化和测定的一项技术。,2011春季学期春季学期 19/4,电泳的分类,按分离目的：分析电泳和制备电泳按电场强度：常压电泳和高压电泳按电泳媒介：自由电泳和区带电泳 区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳 滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 按支持介质形
2、式：水平式电泳、垂直电泳按缓冲液pH值：连续pH和不连续pH电泳,2011春季学期春季学期 19/4,临床电泳项目,临床上以琼脂糖电泳法开展的电泳项目：血清蛋白电泳免疫固定电泳尿蛋白电泳同工酶电泳脑脊液寡克隆电泳本周氏蛋白电泳脂蛋白电泳,2011春季学期春季学期 19/4,血清蛋白电泳（SPE）,检测蛋白质水平病理改变的方法和手段。主要用于肝病、肾病、自身免疫病、血液病、多发性骨髓瘤等蛋白质紊乱疾病的诊断。电泳图谱不能直接对临床疾病进行确诊，但可通过特征性图谱对某些疾病进行分类，评估疾病的进程和活动状况，评价治疗方案是否有效。,2011春季学期春季学期 19/4,血清免疫固定电泳（IFE）,是
3、一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作，是免疫沉淀反应的一种混合技术。优势：将血清蛋白电泳、高分辩率、抗原-抗体特异性免疫反应等有机结合，对蛋白进行分离和定型，形象地观察Ig的各类重链和轻链分型。,2011春季学期春季学期 19/4,血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果,2011春季学期春季学期 19/4,血清蛋白质的等电点、平均相对分子量、及正常含量,2011春季学期春季学期 19/4,正常血清蛋白质电泳图谱,2011春季学期春季学期 19/4,血清蛋白电泳区带,白蛋白区带：主要由白蛋白构成。1-球蛋白区带：1-抗胰蛋白酶、1-脂蛋白、1-酸性糖蛋白、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。2-
4、球蛋白区带：2-巨球蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、2-脂蛋白、红细胞生成素等。-球蛋白区带：主要含铁蛋白、-脂蛋白、补体C3、C4、2-微球蛋白等。-球蛋白区带含IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。,2011春季学期春季学期 19/4,正常参考值,A：3250g/L(60.371.4%）1：1040g/L（1.42.9%）2：610g/L（7.211.3%）：613g/L（8.112.7%）：715g/L（8.716.0%）,2011春季学期春季学期 19/4,2011春季学期春季学期 19/4,2011春季学期春季学期 19/4,临床意义,1、M蛋白（异常免疫球蛋白）血症：在-球蛋白区、-球蛋白
5、区或两者之间，出现区带细而浓，有时呈波浪状，在光密度计扫描图上呈尖陡高峰的M蛋白带。2、蛋白质缺乏症3、肾病4、急慢性炎症5、肝病：肝硬化出现“-桥”原发性肝癌在Alb与1-球蛋白之间出现一小的区带，称为甲胎蛋白带。,2011春季学期春季学期 19/4,异常血清蛋白电泳图谱及临床分析,急性炎症及应激型：当机体受到各种损伤或炎症刺激时的病理现象。主要特征：Alb减少或正常，1、2-球蛋白增高，-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。病理生理：Alb下降主要是由于蛋白分解亢进所致,1和2-球蛋白增加与急性时相反应蛋白1糖蛋白增加有关，区带减少是由于转铁蛋白分解代谢增加所致。新生儿由于结合
6、珠蛋白合成功能不完全，当有炎症病灶时，2区带无明显增高，而1区带可明显增高。,2011春季学期春季学期 19/4,肾病型：由于肾小球受损引起低蛋白血症，蛋白尿，高脂血症以及全身性水肿。主要特征：Alb明显降低，1-球蛋白轻度增加，2-球蛋白明显增加，-球蛋白降低、正常或增高。小儿类脂样肾病时，-球蛋白可降低，有时可降低至零；成人肾病综合症时，-球蛋白通常增加，特别是狼疮性肾病。病理生理：Alb降低是由于肾小球滤过增加所致。1-球蛋白增加，主要是小分子量的1糖蛋白增加，可能是为了补偿由于Alb降低引起的低渗透压，虽然1糖蛋白也大量丢失于尿中，但体内合成量超过排泄量，故仍可增高。2-球蛋白明显增加
7、是由于2-球蛋白和低密度脂蛋白相对增加所致。球蛋白降低主要是分子量小的转铁蛋白排泄于尿中所致。-球蛋白降低主要是由于漏出于尿中及体内分解亢进所造成，而慢性肾炎、狼疮性肾炎等-球蛋白增加，可能是由于免疫刺激，使IgG增加所致。,2011春季学期春季学期 19/4,弥漫性肝损伤型主要特征：Alb明显降低,1-球蛋白在轻度时可略增加，但肝细胞破坏严重时，则1、2和球蛋白通常均降低，在胆汁郁积性肝炎时，2和球蛋白可增高，-球蛋白轻度或中度增高。病理生理：Alb虽合成减少，但其半衰期长，其浓度减少多出现于发病后十天，随病情恢复而至正常,若为慢性则逐渐减少,其减少程度与肝炎的严重程度相一致。1-球蛋白在肝
8、炎初期，作为急性期反应物质常增加，而肝损伤严重时则降低，在致命的肝功能衰竭时，1-球蛋白可降低到很低水平。2-球蛋白的降低，可能是由于结合珠蛋白合成降低所致，但胆汁郁积性肝炎时，由于脂蛋白增加，可见到2-球蛋白部位增高，当急性肝坏死时，2-球蛋白则明显减少。球蛋白在肝炎早期几乎无变化，当肝细胞损伤严重时合成减少。几乎所有肝脏疾病-球蛋白因合成亢进均增高，其增加的范围与疾病的严重程度相一致。,2011春季学期春季学期 19/4,肝硬化型主要特征：Alb均有不同程度的降低，1、2和球蛋白正常或降低，-G明显增高且宽度增加，可见-桥。病理生理：肝细胞受损导致Alb明显降低，-桥的出现与血清免疫球蛋白
9、，特别是IgA、IgM、IgG同时增加有关，其中以IgA影响较大，当IgA和IgM泳动在和之间，使区带与区带融合而形成-桥。,2011春季学期春季学期 19/4,原发性肝癌主要特征：在Alb与1-球蛋白之间出现一小的区带，称为甲胎蛋白带。病理生理；肝癌时，血清中的甲胎蛋白浓度为正常人的数十乃至数万倍。,2011春季学期春季学期 19/4,宽幅高-G血症型（多株免疫球蛋白增高症）主要特征：-G的宽度明显增加，呈宽幅高峰。病理生理：多株浆细胞以大致相同的速度增殖，大量合成免疫球蛋白所致，呈多株性，若合并急性感染，则1、2明显增高。,2011春季学期春季学期 19/4,M蛋白血症（单株免疫球蛋白异常
10、症）主要特征：M蛋白又叫异常免疫球蛋白，其区带宽度与Alb带大致相等或较其狭窄，常分布在2至慢-G部位。病理生理：M蛋白是由某一细胞株分泌大量结构相同、电泳迁移率一致的蛋白。多发性骨髓瘤及原发性巨球蛋白血症时，M蛋白以外的其他免疫球蛋白明显降低，其可能是由于M蛋白大量消耗氨基酸，致使其他免疫球蛋白相对合成不足，以及M蛋白代谢亢进，其他免疫球蛋白的分解代谢也随之增加，故而含量降低。,2011春季学期春季学期 19/4,双白蛋白血症型,主要特征：在白蛋白区有两个区带，光密度扫描出现双峰，呈剪刀状。产生原因：双白蛋白血症分为持久型和暂时型两种。持久型主要是一种家族性血清蛋白异常的疾病，极少见，为常染
11、色体不完全显性遗传；而暂时型主要是指肾功能不全的患者在治疗期间使用大剂量的-内酰胺类抗生素，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失。,2011春季学期春季学期 19/4,先天性白蛋白缺陷型：,主要特征：由于血清白蛋白的显著降低，血清总蛋白也随之降低，1、2球蛋白明显增高，球蛋白也增高。严;重无白蛋白血症时，白蛋白有时可降为零。产生原因：本病是极少见的先天性疾病，可能由于肝细胞内白蛋白合成功能遗传性缺陷或明显低下所致。该病患者的白蛋白含量尽管只有正常人的0.05%，而其血浆胶渗透压仍为正常人水平的 1/2左右，这是由于球蛋白代偿性增加所致，如传铁蛋白为正常人的 20-3倍，1巨球蛋白为正常人的3.5倍，脂蛋白为3倍，IgM为3倍，这时血清白蛋白的半衰期也明显延长，可为正常人的3-4倍，对维持血浆胶体渗透压均有一定作用。,2011春季学期春季学期 19/4,几种疾病的蛋白电泳变化,2011春季学期春季学期 19/4,2011春季学期春季学期,Thank You!,
