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1、研究黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法,发表人：卢晶晶,扬子江药业集团有限公司,飞跃QC小组,一产品概况,黄芪精是我公司开发研制的虚症类OTC产品，为补血养气，固本止汗之良药。其疗效佳，口感好，携带方便。,二.小组概况(一)小组简介,制表人：张集盘 日期：2006.3.20,(二)QC小组成员一览表,三选择课题,1.薄层扫描法测定黄芪精中黄芪甲苷含量的缺陷分析,1.1.扫描时基线不稳定,1.2.容易出现鬼峰,1.3.检测偏差大，方法的准确性较差,1.4.薄层板展开耗时长，且一块薄层板只能点一个批号的供试品，检测批次很有限，导致出成品检测报告的周期较长。1.5.按照部颁标准，以薄层扫描法（TLCS
2、）对黄芪精中黄芪甲苷进行含量测定，结果如下。,黄芪精按部颁标准含量测定结果,TLCS法测定本品含量时偏差大，不利于产品质量的控制。,2.课题确定,研究黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法,可供直接借鉴的方法少,黄芪化学成分复杂,黄芪为君药,黄芪甲苷为主要有效成分,四.设定目标,拟制定黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法的回收率不低于90%；含量测定结果的相对平均偏差小于2.0%。,五提出并选择最佳方案,1.提出方案（1）HPLC-UV（高效液相色谱-紫外检测器）法（2）HPLC-RI（高效液相色谱-示差折光检测器）法（3）HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法,2.方案的分析、评估与确
3、定,备注：可操作性、准确性、经济性三个指标均以1分（一般）、3分（良好）、5分（显著）为评分标准，上述综合得分为QC小组成员所评分数的总和。,3.确定方案的采用顺序,（3）HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法（1）HPLC-UV（高效液相色谱-紫外检测器）法（2）HPLC-RI（高效液相色谱-示差折光检测器）法,P,D,C,A,六制定对策,根据以上选择的最佳方案制订对策表,七对策实施,实施一：色谱条件的确定1.仪器与试药 Agilent1100高效液相色谱仪；Attech2000蒸发光散射检测器；梅特勒AG285电子天平。黄芪精；天津农药总厂D101型大孔吸附树脂；甲醇、乙腈
4、为色谱纯；95%乙醇为分析纯；水为超纯水。,2.对照品溶液的制备,取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解，配制成0.1 mgml-1的对照品溶液。3.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，0.45 m有机系微孔滤膜滤过，即得。,4.色谱条件的确定,色谱条件筛选图1色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：1.2mlmin-1,色谱条件筛选图2色谱柱：Ag
5、ilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：1.0 mlmin-1,色谱条件筛选图3色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：0.9 mlmin-1,色谱条件筛选图4色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：0.9 mlmin-1,色谱条件筛选图5色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40流速：1.0 mlmin-1,色谱条件筛
6、选图6色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40流速：1.0 mlmin-1,色谱条件筛选图7色谱柱：Dikma DiamonsilTM（钻石）C18柱(4.6250 mm,5 m)流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：1.0 mlmin-1,前延峰,色谱条件选择情况汇总表,因此，可以选择Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）、以乙腈-水(32：68)为流动相，流速为1.0 mlmin-1进行后续试验。,实施二：供试品前处理方法的选择,1.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水
7、10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用A乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用B乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。,2.提取分离条件的确定收集上述水液和各拟弃去的乙醇洗脱液，蒸干，加甲醇适量使溶解，得溶液C按照上述色谱条件分别进样20 l，记录色谱峰面积。,试验结果表明：（1）弃去的水液中目标物无损失；（2）当A=40，即采用40%乙醇洗脱时，目标
8、物有损失；（3）当B=60，即继续采用60%乙醇洗脱时，则目标物洗脱不完全。因此确定A%、B%的最佳值分别为：30%、70%，并以此值确定的提取分离条件进行后续方法学的验证。,实施三：线性关系的确定,取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至8个系列浓度,分别进样10 l，测定峰面积，以对照品浓度X(mgml-1)的lg值为横坐标，峰面积积分值Y的lg值为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=0.1819X+1.9515 r=0.9992,工作曲线,评价：结果表明黄芪甲苷在76.560255.20 gml-1 范围内线性关系良好。,实施四：精密度试验,取同一供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次
9、，每次10 l，测得黄芪甲苷色谱峰峰面积平均值为978.57883，RSD为0.5%。,评价：精密度良好，达到预期目标。,实施五：重复性试验,取同一批号样品，制备6份供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液10l、20l，供试品溶液10l，注入液相色谱仪，测定峰面积值，以外标两点法对数方程计算，即得黄芪甲苷的含量。,重复性试验结果,评价：重复性试验RSD为1.2%，达到预期目标。,实施六：稳定性试验,取同一供试品溶液，于0、2、4、6、12、14 h分别精密吸取10 l注入液相色谱仪分析，测得峰面积值，计算RSD。,稳定性试验结果,评价：上述结果表明供试品溶液在14 h内稳定性良好。,实施七：方法回
10、收率试验,精密吸取已知含量同一批号样品5 ml，6份，分别精密加入已知浓度的对照品溶液5 ml，制备溶液，分别进样10 l，测得峰面积值，计算平均回收率和RSD。,回收率测定结果（n=6）,评价：平均回收率为96.76%，RSD为1.91%，表明方法准确度良好，可以用于本品的定量分析。,评价,1.初步评价建立了黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法，方法学研究符合中国药典2005年版（一部）附录“中药质量标准分析方法验证指导原则”。,2.综合评价 取本品3批，将两法的含量测定结果进行对比。,评价：采用HPLC-ELSD法测定黄芪精中黄芪甲苷含量比采用TLCS法测定时的相对平均偏差小，测定的结果较理想
11、。,八.效果检查,1.效果验证取不同批号的黄芪精，依法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样10 l，测得峰面积值，并计算黄芪甲苷含量。10批样品含量测定结果见下表。,10批样品含量测定结果（n=4）,上表数据反映出新的分析方法测定结果 较理想，QC活动取得了良好的效果。,2.效果二,活动前后相对平均偏差柱状图,3.效果三(社会效益),此次QC活动,解决了薄层扫描法进行黄芪精中黄芪甲苷含量测定时基线不稳定、易出现鬼峰、检测耗时长及偏差大等问题,有助于正确地评价该产品的质量和稳定性。同时，本次QC活动的成果已形成“部颁标准升国家标准”的材料供药检所审核。,成果确认表,九.标准化,将新的检测方法形成
12、文件，载入企业内控质量标准，其编号由“SM-0613-04”变更为“SM-0613-05”。组织仪器组化验员对新方法进行理论和实践操作的培训，以提高操作技能。并将考试结果纳入当月绩效考核中。在实际工作中严格按此企业内控质量标准执行，并由QC主管严格考核其执行情况。,十.总结及今后打算,1总结此次QC活动的开展，调动了每个成员参与的积极性和主动性,增强了全面质量管理意识和团队协作精神,培养了发现问题、分析问题和解决问题的能力,提高了科学的创新意识。,2今后打算 将成果进一步推广应用到其他品种的方法学验证,并拟下一QC活动课题为“建立金胆片含量测定的分析方法”,以全面实现扬子江药业产品的质量“飞跃”。,敬请各位评委、专家、同仁批评指正！谢 谢！,飞跃QC小组,
