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1、化学药品的质量研究和 质量检验记录的技术要求,江苏省药品检验所 周帼雄,药品，是指用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症或者功能主治、用法和用量的物质，包括中药材、中药饮片、中成药，化学原料药及其制剂、抗生素、生化药品，放射性药品、血清、疫苗、血液制品和诊断药品等。,由于药品是防病治病保护人民健康的特殊商品。因此药物的质量研究与质量标准的制订是药物研发的主要内容之一。在药物的研发过程中需对其质量进行系统深入的研究，制订出科学、合理、可行的质量标准，并不断地修订和完善，以控制药物的质量，保证其在有效期内安全有效。,一、药品的质量研究,药品的质量研究是质量标准制定的基
2、础，质量研究的内容应尽可能全面，既要考虑一般性原则，符合化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则以及化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则等的常规要求；又要有针对性，要结合所研制原料药或制剂的特性、采用的制备工艺、稳定性等，以使质量研究的内容能充分地反映药品的特性和质量情况。,同时应与已上市产品或原剂型产品（一般应为原发厂产品）进行必要的质量对比研究，重点是原料药的晶型、原料药和制剂的有关物质，以及难溶性药物口服制剂的溶出行为、特殊剂型药物的释放特性等。,质量研究的内容 主要包括药品性状、鉴别、检查，含量测定等几个方面，由于研究内容很多，在这里，主要对以下内容进行探讨。,原料药物在化学结
3、构或组份确证后，应对其理化性质、纯度、含量（效价）测定进行研究，在此基础上制定能保证药品安全有效、科学合理的质量标准。,一、名称 包括中文名、汉语拼音名和英文名。中、英文名称参见国家药典委员会编篡的中国药品通用名称。,二、有机药物的结构式 按照世界卫生组织（WHO）拟订的“药品化学结构式书写指南”绘制。,三、分子式与分子量 凡组成明确的单一化合物，以及主成分已明确的多组分抗生素，均应列出分子式。分子式中的元素符号按国际上的惯例排列，除C排在首位，H排在第二位外，其他元素（包括金属元素）均应按元素符号的英文字母顺序依次排在其后，原子数写在该元素符号的右下侧。,分子量按最新国际原子量表计算，最终数
4、值书写至小数点后第二位。混合物或组分不定者，一般不列分子式与分子量。,四、含量限度 化学合成药，或检测办法完善可以保证其质量的单一提取物应写出其化学名。含量限度是指按规定的测定方法测得本品应含“有效物质”的限度。为了能正确反映药品的含量，一般换算成干燥品的含量，并按检查项下所规定的“干燥失重”或“水分”分别写成“按干燥品计算”或“按无水物计算”。,含量限度，除用“效价测定”的抗生素或生化药品采用效价单位表示外，其他用“含量测定”的药品均以含有效物质的百分数表示。含量限度一般应规定有上、下限，其数值一般应准确至0.1%，当含量的高限不得超过101.0%时，可不写出上限。含量限度的百分数均系指重量
5、百分数，不必写上“（gg）”，但对液体或气体药品，其含量百分数之后应加注“（gg）”或“（mlml）”，使之更为明确。,五、性状 应分别描述药品的外观色泽、臭味、结晶形状，和一般的稳定情况及物理常数。,1、对于外观的描述，气或液体一般用“无色”，固体药物用“白色”或“类白色”，尽量避免用特殊的形容词如琥珀色等，有色药物应根据应有的色泽加以描述。臭，是指药品本身所固有的，不包括因混有不应有的残留有机溶剂而带入异臭，具有特有味觉的药品，必须加以记述，如酸、辣、等，但毒药、剧药、麻醉药可不作“味”的记述。凡有引湿、风化、遇光变质等与贮藏条件有关的性质均应择要记述。,2、溶解度 是药品的一种物理性质，
6、在一定程度上反映药品的纯度，在其溶剂选择上，应尽量采用与药品溶解特性密切相关、与精制、质量测定、制剂处方与工艺有关的溶剂，一般采用药典凡例中分等级的方式（极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶），品种应简化，并避免使用昂贵或不常用的溶剂，在酸或碱性溶液中的溶解度放在最后，所用酸或碱性溶液要明确注明名称和浓度（不要用稀酸或稀碱）可列表：,性状项下记述的外观、臭、味,是一种感观规定,正文品种中仅作一般性描述,没有确切的法定检验方法;USP和在“Geneial Notices”中虽均列有“气味的检查方法”，但明确指出气味仅是说明性的，不构成法定标准的组成部分。USP自20版起，已
7、将“性状”和“溶解度”自正文品种中删去，而汇总列于全书后部的参考表中，并说明它们不是纯度的标准和检查方法，不作为法定标准。,我国考虑到药品的外观性状与其质量间有一定关联，可对药品的质量作出初步评价，故在中国药典的正文中仍予以保留，但在凡例中明确“遇有对药品的晶型、细度或溶液的颜色需作严格控制时，应在检查项下另作具体规定。,对于药品的溶解度，尤其是在出现明显异常的情况时，应进一步研究以发现问题（如有机碱的盐，因在成盐工艺中加入酸量不足，而影响在水中的溶解度）；溶解度在一定程度上反映药品的纯度，这与BP和USP的“不作法定要求”有所不同，并明确“遇有对在特定溶剂中的溶解性能需作严格控制时，应在检查
8、项下另作具体规定，如甲醇溶液的澄清度（奋乃静）。,3、物理常数（相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、粘度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数）是检定药品质量的重要指标，应根据该药品特性或检定的需要，选载有关的物理常数，一般固体药品需测定熔点、吸收系数、晶型等。液体药品要测定沸程、相对密度、粘度、折光率等。具有手性中心的药品如系天然物提取的单体或合成拆分得单一旋光物，应测定比旋度并证明其光学纯度，如属油脂类药品，除相对密度、折光、熔点等外，还要测定其酸值、碘值、羟值、皂化值等。,物理常数的测定结果，不仅对药品具有鉴别意义，也反映药品的纯杂程度，因而数值范围规定必须明确并切合实际，不要用“
9、约”字。制订理化常数范围则是以临床用药品（3-5批）测得的数据为依据而制订，研究时尽量查阅国内外的现行版药典及文献资料或国外对照药品的实测值进行比较。物理常数测定必须用精制品，测定方法应按中国药典附录进行测定，在操作中另有特殊要求应注明经过按规定方法的检定，并注明仪器型号，各常数至少应测定三次。,熔点已知结构的化学原料药，熔点是重要的物理常数之一。根据熔点、熔距，可鉴别、检查该药品的纯杂程度熔点范围一般为3 4，个别品种可放宽至6；熔距不可过宽，一般不超过2。,测定熔点的药品，应是在熔点以下遇热时的晶型不转化，其初熔点和终熔点易于判断的品种；对于熔点在200以上并同时分解的品种，一般可不订入质
10、量标准中；对于熔点难以判断或熔融同时分解的药品，以及一、二类新药的熔点，应用DSC或TG热分析予以辅佐；对熔融同时分解的药品，要记录熔融时的现象，如变色、产生气泡等，通常当供试品在毛细管中开始局部液化，出现液滴或开始产生气泡时的温度作为初熔温度，至供试品固相消失全部液化时作为全熔温度时的温度，作为熔融分解温度；对某些药品无法分辨初熔与全熔现象时，可以记录其发生突变（气泡很快上窜，色泽明显变深），有时固相消失不明显，则以供试品分解并开始膨胀时的温度作为全熔温度。熔点数值的精度一般1，也可书写至0.5。,吸收系数（E）化合物对光的选择性吸收波长及其在最大吸收波长处的吸收系数，是该化合物的物理常数之
11、一，将其列入性状项下，不仅可考查药品的质量，并可作为其制剂含量或溶出度测定中选用E 值的依据。因此，凡制剂的含量测定采用E 计算的紫外可见分光光度法，而其原料药的含量测定因根据精密度的要求而采用其他方法（中和法、非水法）的品种，均应在原料药的性状项下增订“吸收系数”。,11cm,11cm,11cm,用于测定吸收系数的供试品应为精制品，应同时测定2份，应尽可能采用其制剂的含量测定中的条件，使原料药的含量标准能与其制剂相适应。所用溶剂，除应满足该物质光学特性的需要外，还应考虑“易得、价廉、低毒”的原则，避免使用甲醇等低沸点、易挥发的溶剂；对于极性化合物，水是一种廉价的溶剂，也可考虑用0-1mol/
12、me氢氧化钠溶液或缓冲液等，供试品溶液与制备要强调定量稀释；,测定注意事项A.测定的供试品应为精制品，水分应另取样测定，扣除干燥失重，并应同时测定2份。B.参照中国药典附录分光光度法项下的仪器校正的检定方法，对所用的五台不同型号的分光光度计进行全面检定，所用的容量仪器及天平应经过检定。C.测定所用的溶剂，其吸收度应符合规定。吸收池应于临用时配对。D.称取供试品时，其称量准确度应按中国药典规定要求，供试品溶液应配制成高低二个浓度，高浓度溶液的吸收度在0.6 0.8之间，低浓度溶液的吸收度在0.3 0.4之间，同台仪器测定的2份结果，对平均值的偏差应不超过0.3%，否则应重新测定，应注明测定时的温
13、度，并考察溶液的稳定性。,旋光度或比旋度此项是反映手性化合物及其纯度的主要指标，并可用于制剂的含量测定，凡具有光学异构体的药品在性状项下的物理常数中应作比旋度规定，测定时应注明温度、浓度、溶剂对比旋度的影响，操作中如有特殊要求应注明，中国药典一般规定20.589nm.限度范围数值的精度要求，应准确至0.01。,凝点系指一种物质由液体凝结为固体时，在短时间内停留不变的最高温度，药品的纯度变更，凝点也随之改变，必要时应规定其凝点。,相对密度一般用于液体药品，其数值的有效数应不小于三位，并按药典附录进行测定。,折光率对于液体药品，尤其是植物精油，可利用折光率数值区别不同的油类，测定时应按药典规定温度
14、（或各该药品项下规定的温度），限度范围数值的精度应至小数点第三位。,粘度系指流体对流动的阻抗能力，用平氏粘度计测定，应记录测定温度，毛细管内径，一般控制流出时间约100秒，记录并计算测得值，单位mm2/s，用旋转粘度计测定，应记录仪器型号、测定温度、转子号、转速，记录并计算测得值，单位PaS所用粘度计均应经计量部门检定，并取得该支（台）粘度计的常数K（或K），在研究资料中写明。,碘值、酸值、皂值、羟值等 应取精制品进行测定，测定方法和操作中的注意事项参照中国药典现行版和中国药品检验标准操作规范，如实验操作与药典方法不同之处，要详细列出检验方法并说明理由，所订限度则根据测定结果而定。,馏程主要检
15、查该药品纯杂程度，不同于“沸点”，因此对相应品种应规定范围，数值精度一般1也可书写至0.5。在药品性状（包括以上各项物理常数）研究中，应查阅国外现行版药典及其他参考文献的数值作比较。测定结果可列表。,六、鉴别 鉴别试验，要求专属性强，灵敏度高，重现性好，操作简便、快速的方法。常用的有以下三类：,1、化学反应选择功能团专属化学反应，包括显色反应、沉淀反应、盐类离子反应。,2、色谱法采用与对照品（或经确证的已知药品）在相同条件下进行色谱分离并进行比较，要求其保留行为和检验结果都相互一致作为鉴别药品真伪的验记。如气相色谱法、高效液相法的保留时间及薄层色谱法RF值及颜色等。选用色谱法进行鉴别时，必须要
16、求该色谱条件能保证其与同类药品有良好的分离，也就是要有适应性试验内容（如盐酸土霉素）。由于色谱法操作繁琐费时，不宜广泛采用，除非是在检查或含量测定项下已采用色谱法而附带引用，则有其特点。,3、光谱法常用有紫外吸收光谱法和红外吸收光谱法。在多数有机药物分子中，因含有某些能吸收紫外可见光的基团而显示的吸收光谱可作为鉴别依据，由于波长范围较宽，吸收光谱较为简单、平坦，曲线形状变化不大，其专属性远不如红外光谱，因此除了规定在溶剂（如水、乙醇或0.1mol/L HCl、0.1mol/L NaOH)中的最大吸收波长、最小波长外，可测定数个（23个）特定波长的吸收度比值或特定波长处的吸收度，其限度可控制在5
17、%，如VB2在267，325，444 nm处有最大吸收，A375nm/A267nm=0.31-0.33,A444nm/A267=0.36-0.39,以提高鉴别的专属性。,红外光谱是分子的振动-转动光谱，特征性强，用于鉴别组分单一、结构明确的原料药，尤其适用于其他方法不易区分的同类药物，如磺胺药甾体激素等。可与国家药典委员会编篡的药品红外光谱集标准图谱进行对照，也可用对照品同时测定，并附该药品的标准红外图谱复印件及实测图谱；对于具有同质异晶的药品，应选用有效晶型的图谱，或分别比较；晶型不一致，需要转晶的应规定转晶条件给出处理方法和重结晶所用溶剂。测定时应记录仪器型号、湿度和测定方法。红外光谱法对
18、于多组分药物或存在多晶而又无可重复转晶方法的药品，不宜采用本法作鉴别。,鉴别试验应说明反应原理，特别是在研究结构相似系列的药品时，应注意可能存在结构相似化合物的区别，并要实验验纪。对一些特殊品种利用一过三类方法尚不能鉴别却证时，可用其他方法，如X 射线粉末衍射法鉴别矿物药等。从各国药典如USP、BP正文收载的药品鉴别方法分析，可表明随着时代的发展，科技水平的提高和仪器设备的进步，各国药典从总体上跨越了药品鉴别首选化学鉴别法，以化学鉴别法为主的历史发展阶段，步入了以仪器分析为主的时代。在选用仪器分析鉴别法时，USP重点选用IR、HPLC、和UV法，而BP重点选用了IR、UV和HPLC法，就色谱法
19、而言，USP选用HPLC法较多；BP选用TLC较多，选用UV法较少。,鉴别是为了验证已知药物的真伪，而不是鉴别未知药物的组成和结构，只要选用专属性较强的方法，就可以鉴别真伪，不宜罗列过多条目，一般选择1 4个。USP平均每个品种只收载1.72个，BP收载1.84个。原料药项下外观和物理常数，能协助“鉴别”真伪，因而可作为“鉴别”项下的补充。,七、检查检查项目应考虑有效性，纯度要求和安全性三方面；药品按既定合成工艺生产和正常贮藏过程中可能产生需要控制的杂质，因此要结合生产供应和使用实际，突出重点，制订出能真实反映药品质量的杂质控制项目，以保证药品安全有效。原料药品中所含杂质为工艺杂质、降解物、异
20、物体和有机残留溶剂等，杂质从结构上可分为无机杂质（如氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐等），有关物质（系指有机物，如中间体、降解产物、副产物、有机残留溶剂等）。,检查内容归纳为：有效性试验，酸碱度，溶液的澄清度与颜色，无机阴离子，有机杂质，干燥失重或水分，炽灼残渣，金属离子或重金属硒或砷盐，以及安全性检查十大类。操作和判断标准应尽可能按中国药典现行版的具体规定。,1、有效性试验 用于这方面的检查有：颗粒细度或粒度 用于制备固体制剂或混悬剂的难溶性药物，控制细度，要求达到微粉化，以利于吸收。粒度对生物利用度、溶出度和稳定性均有较大的影响，必要时需测定粒度，粒度分布，并规定限度。结晶性 中国药典列入附录
21、结晶性检查法，在偏光显微镜下检测，用以检查是否为晶体，但不能区别晶体。,晶型 每种化合物的晶型，无论是单晶还是多晶，都有它自己特定的X射线衍射图，晶型的改变为药物的重要特性。,晶型确定可通过熔点、红外光谱、粉末X 射线衍射、热分析等方法进行检测，并应与国外文献图谱/数据或国外上市原料药比较，不能用国外上市制剂提取得到的原料药作对照。USP 19版通则中已列入X 射线衍射法，中国药典2000年版附录也收载此项测定。了解药物晶型将有助于解决下列问题：,A、保证在制备和贮存过程中，药物在剂型中物理化学稳定性。B、提高药物的生物利用度，减少毒性，增进治疗效果。C、保证每批生产的药物间的等效性。D、改善
22、药物粉末的压片性能。E、防止药物在制备或贮藏中产生晶型转变而影响质量，如原料药为固体药物，不易溶于水，制剂又为固体制剂，就应考虑晶型问题。一般规定一、二类药必须每批作X 射线衍射图，四类药尽量每批作，以确定新药的晶型归属，并作为基础档案资料之一，以便在药品由于合成工艺、精制方法、制剂放置过程中的改变而发生生物利用度不同时进行追踪研究。,鉴于晶型不同，有可能影响生物利用度以至药效不同或毒副反应，凡已知有晶型问题，均应制订标准。如必须规定有效晶型时，应对无效晶型进行控制，如甲苯咪唑存在A、B、C三种晶型，C晶型为有效型，A晶型为无效型，产品中主要为C晶型，内混有A晶型，中国药典采用IR方法控制，A
23、晶型不得过1%。,又如吲哚美辛存在、和三种晶型，型晶型不稳定，易转变和，此二种晶型溶解度和溶出速率不同，晶型毒性大于晶型，故选用晶型药用，USP采用X 射线粉末衍射图谱控制该品的晶型，要求与标准图谱一致，中国药典还未作规定。,异构体 立体异构体是指原子组成和连接方式相同，而其三维空间排列不同的分子。它包括光学异构体、几何异构体（又称顺反异构体）、光学异构体又分对映异构体及非对映异构体，其中几何异构体与非对映异构体在新药研究中一般作为不同的化合物对待，而对映异构体往往当成一个化合物（消旋体）处理；光学岁映异构体理化性质相同，但药理毒理往往差异很大，如新型苯哌啶类镇痛药哌西那朵的右旋异构体为阿片受
24、体的激动剂，而其左旋体则为阿片受体的拮抗剂；,又如驱虫药四咪唑的呕吐不良反应即由右旋体产生，几何异构体不仅物化性质有所不同，有时药理作用也差别悬殊，如枸橼酸他莫昔分，有E型和Z型二种构型，Z型是研究的抗癌药物，E型却是工艺中带来的致癌杂质，故对这些异构体杂质应进行严格控制，一般采用手性色谱法和比旋度法。,鉴于光学异构体的特殊性，应优选出合理的方法来控制产品的光学纯度，比旋度作为手性化合物的一个理化常数，从理论上说可以反映其光学纯度，但当产品中混有旋光性杂质时，情况就更复杂，很难单纯从比旋度的大小来判断产品的光学纯度，就应根据其合成路线及结构来选择合适的方法。如一类新药拉米夫定，其分子中有2个手
25、性中心，因此存在4个立体异构体，除所需的产品外，其他3个异构体均应进行检测，通过一系列方法学研究，最终确定除采用仓度来控制产品的光学纯度，还用HPLC法来检测其中2个差向异构体，而另一个对映异构体则采用手性柱HPLC法来定量控制。,顺式或反式异构体，以及控制异构体比例，统称“异构体”，大多采用HPLC法进行检测，（如枸橼酸氯米芬）。关于手性药物的液相色谱分析可参考由安登魁教授主编的“现代药物分析选编”。,制酸力为抗酸药的主要质量指标，在指定的实验条件下，以每1g供试品消耗盐酸滴定液（0.1mol/L）的毫升数表示，如硫糖铝。,热稳定度个别药品由于生产工艺的不同，影响成品对热稳定性差异很大，制订
26、本项目以保证其制剂的质量，如二巯基丙醇、葡萄糖酸锑钠）。,吸着力吸水力或凝冻浓度，如药用炭、琼脂、明胶。,疏松度用以控制某些药物如硫酸钡作为胃肠道造影剂所应具有的物理性能。,锥入度如用作软膏质的黄凡士林项下规定的物理性能要求。,特性粘数或平均分子量 均为反映高分子聚合物物理性能的主要指标。,含氟量和氟用于控制有机氟化物中的含氟量，制订限度范围一般控制在理论值的90%110%，并采用二位有效数字，如诺氟沙星。,含氯量测定含氯化物中的含氯量，相限度范围应根据测定方法和取样量，一般控制在理论值的90%110%，并采用二位或三位有效数字。如维生素B。,含氮量用于含氮有机药品或蛋白质类生化药品，可作为含
27、量的补充，限度采用三位有效数字。如肝素钠。,乙炔基在含有乙炔基的药物中，因乙炔基为有效基团，国外药典常用含量法测定，我国药典常采用电位法。如炔诺孕酮。,吸收度或杂质吸收度 用指定浓度的供试品溶液在最大吸收波长处的吸收度，作类似于含量测定的质量控制，可称为吸收度，而用作检查杂质的，可称为“杂质吸收度”，如青霉素钠。,2、酸度、碱度或酸碱度 对于原料药，重点是盐类、酯类、酰胺类，或在最后生产工艺中经酸或碱处理药品，需进行此项检查，检查方法有酸碱滴定法、pH值法、指示剂法。,酸碱滴定法以消耗酸、碱滴定液的毫升数作为限度指标。在方法中要规定取样量（二位有效数字）和选用的指示剂，并明确指示剂的变色，对于
28、微溶或不溶于水的原料药，除采用中性有机溶剂外，也可规定加水并经处理后制备供试品溶液的方法。,pH值法常用于供制备注射剂的原料药品种，方法中要规定供试液的浓度或其制备方法，pH限度可适当参照其注射液的规定，对于水不溶性药品，应叙述供试液的制备方法。,指示剂法方法简便，限度较宽，方法中应注意所选用的指示液必须是供比色法测定pH值用的，以在指示液的配制中加有定量的氢氧化钠，并规定指示液的加入量和呈现的颜色。,酸度 凡检查方法中采用碱性滴定液进行滴定，或规定pH值低于7.0。碱度 凡检查方法中采用酸性滴定液进行滴定，或规定pH值大于7.0。酸碱度 检查时，先后用酸性滴定液和碱性滴定液分别进行滴定，或规
29、定pH值范围为7.0两侧。,3、溶液澄清度与颜色 溶液澄清度是要求以水为溶剂，将原料药制成一定浓度的溶液，并与指定的浊度标准液比较，根据药物在特定溶剂中的溶解性能，以控制微量不溶性杂质和呈色的物质。,溶液的颜色 是检查以水为溶剂制成供试液的颜色，并与标准比色液比较，或在可见光波长范围内测定吸收度，也可采用仪器测色的方法。,溶液的澄清度与颜色 是指制成供试溶液后，既检查澄清度，又检查颜色，多用于供制备注射用原料药的质量控制。,对于某些非注射给药的原料药，由于要求较宽，在制成供试液后，允许有少量不溶物，可称为“中不溶物”，又可利用某些杂质在特定溶剂中的溶解性能，通过蒸发称重，进行杂质检查的，称为“
30、中溶解物”，常用于无机药物和可溶性盐类药物。,4、无机阴离子药物中其他无机阴离子的混入，大多来自原材料和生产工艺，少数为其降解物，要根据实际情况有选择地加以制订，如氯化物、硫酸盐、硫化物、氰化物、磷酸盐、溴化物、碘化物等，操作均按中国药典现行版方法，但要说明用的第几法，并说明采用方法的原因和实验中产生的现象及解决办法。操作中注意事项可参照中国药品检验标准操作规范。在检验时应配制不同浓度系列的对照液，考察多批数据，确定杂质限量。在资料中列出实测数据，如50ppm，70ppm等。,5、有关物质主要是在生产过程中带入的原料、中间体、降解物、异构体、聚合物、副反应产物等，对药品纯度要求，应基于安全性和
31、GMP两方面考虑，允许含限定量无害或毒性极低的共存物，但对有毒杂质测定应严格控制，毒性杂质的确认主要根据安全性试验的资料或文献资料。当某杂质与已知毒性杂质结构相似，但又无法分离时，也应认为毒性杂质，应搞清结构，并严格控制含量限度。,有关物质检查通常首选采用专属性好，灵敏度高的色谱法，可根据有关物质的性质选用薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等，有时也可采用显色反应等方法。,薄层色谱法设备简单，操作简便，但分离效果较差，影响重现性和精密度的因素较多，可作为一般有关物质检查。气相色谱法可检查挥发性杂质、有机溶剂残留量的测定，一些不挥发性物质也可用于衍生化试剂制备成挥发性衍生物后进行测定。纸色谱
32、法，柱色谱法和电泳法等，由于操作时间较长，分离效果差故采用不多。毛细管电泳法因具有分离效能高，分析速度快，样品用量少，应用范围广等特点，也可采用。各色谱法均应按中国药典现行版附录色谱法的规定和中国药品检验标准操作规范的规定进行研究。,在用色谱法检查有关物质的方法学研究中应考虑工艺杂质及降解产物的分离度及能否有效检出（检向限、响应因子）。首先应按药典附录要求考察系统适用性试验，主要是考察主成分与杂质的分离及检测的灵敏度，常用以下方法进行方法学考察：,A、如能获得已知杂质作对照，可在原料药中加入适量，证明能达到有效的分离。,B、如未知杂质，或不能获得杂质作对照，则可用含杂质的供试品，如未经精制的原
33、料药粗品中的各杂质峰的分离度，并进行粗品中各杂质峰的分离度，并进行粗品中各杂质峰的归属（将可能存在终产品中的已知工艺杂质如反应中间体加入粗品中）进行试验，证明能达到分离。,C、也可用已精制的原料药经光照或高温、高湿度（RH90%以上）等影响因素试验或经酸碱加热分解、氧化后的供试品进行试验，证明能达到分离，在资料中应详细列出上述的破坏性条件。,用色谱法检查时，应优选分离条件，并附代表性图谱，图谱中应尽量标明成分的位置，TLC法应有实物照片，注明各斑点的RF值，应有检测限（TLC法为最小点样显示量，UPLC法一般为相当于峰高三倍于基线噪音时的注入供试品量）。定量限系指被测物能被定量测定最低量，一般
34、以信噪比为10：1时相应的浓度或注入仪器量进行确定。在分离度试验基础上如有可能可进行重复性、中间精密度、专属性、定量限、线性范围、耐用性、测定溶液稳定性等的研究。,薄层色谱法用于已知杂质检查时，宜采用与一定量的已知杂质对照品，同点样于同一薄层板上，展开后检测；用于未知杂质时，可将供试品溶液定量稀释后作为对照溶液，但应注意杂质斑点与自身对照的呈色要有可比性，结果判断除控制杂质斑点数与限度外，可用两种以上不同浓度的对照溶液分别检测比较。,高效液相色谱法作杂质检查，也可与含量测定同时进行，所用色谱柱首先考虑通用柱（十八烷基硅烷键合硅胶，硅胶及辛基烷键合硅胶）。如分离不好，可选用其他柱，但应附实验数据
35、，说明理由，如经对比，必须用指定牌号的色谱柱或填充剂则应注明，应采用价廉易得的流动相，应首选甲醇一水系统，如需用少量酸碱调节流动相的pH值，应明确规定pH值及范围，如为碱性药物流动相的pH值应为7 8；如为酸性药物，流动相pH值应为3 4。并尽可能选用流动相作为溶剂，如未能选用，应说明原因。检测器则应首选UV 可见光检测器。,HPLC法用于测定杂质含量时，参照中国药典现行版附录的要求，并根据条件和可能选择：杂质对照法，加校正因子的自身对照法，不加校正因子的自身对照法，由于不同物质响应因子可能不同，因此尽可能采用 法，当杂质峰的响应值与主成分峰的响应值相差太大时，应选用自身对照法，而不宜选用面积
36、归一法，检测波长选择时应选择主成分峰与杂质峰响应值尽量相当的波长，作为检测波长。,气相色谱法的常用固定相为SE系列、OV系列、PEG系列等，担体首选白色并经酸洗后硅烷化担体，也可选用其他固定相和担体。检测器首选氢火焰离子化检测器。如单凭色谱法检查杂质尚欠充分时，可用联机技术如HPLC/UV二极管阵列，HPLC/MS或GC/MS对待测杂质进行定性和定量分析。有关物质的限量，如分离出有几个杂质峰（或点）可考虑制订总杂质限度和单个最大杂质的限度；或制订已知杂质限度，未知杂质限度和单杂质限度计算方法可采用对照品法加校正因子的自身对照法，不加校正因子的自身对照法或根据不同杂质采用不同方法。,7、干燥失重
37、与水分“干燥失重”系指在规定的条件下，测定药物中所含能被驱去的水或其他挥发性物质。水分系指用费休氏法或甲苯法测得药品中的残留水和结晶水的总和，但不包括其他挥发性物质，为了真实反映含量，一般均应加以规定，尤其是对具有吸湿性或含有结晶水，以及因含水量高将影响其稳定性的药品，更应订入质量标准中。含结晶水的，并因风化失水过多时将影响用药剂量的药物，应制订高低范围。遇热易变色破坏或分解的药品宜采用费休氏水分测定法或减压干燥法测定。,8、炽灼残渣系指硫酸化灰分，以转化成硫酸盐的重量计算，用以考查有机药物中混入的各种无机杂质，是控制无机杂质的一种简便方法；因取样量大，对用药剂量小而又价格昂贵的药品，一般可不
38、订入质量标准，但应提供研究的数据。,9、金属离子和重金属药物中对某单一金属离子的检查，不同于重金属检查，是有其针对性的，如钡盐对人体有毒，铁盐能加速药物的氧化、降解；因此根据所用原料和生产工艺，制订检查的内容和要求。检测方法一般可采用原子吸收分光光度法（如钾、钠、钙、锌）、比浊法或比色法（如铜、镍、铅等）。重金属系指在规定的实验条件下，能与硫代乙酰胺试液或硫化钠作用显色的杂质，用以检查药物是否污染上金属离子；要作本项检查的除有特殊要求外，应局限于每日剂量在0.5g 或以上，并长期给药的品种，不要作为对药品质量的普遍要求。,一般有四种测定方法：第一法为最常用的方法，一般用于水溶性药物；在水中不溶
39、的可改用乙醇。第二法适用于不溶于水或乙醇的药物，或因自身有颜色，可取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查。第三法是在碱性条件下，用硫化钠试液作为显色剂的检查方法，主要用于溶解于碱而不溶于酸的有机药物的检查。第四法为微孔薄膜法，可避免供试品原有颜色的干扰，灵敏度高，含铅0.5 5ug 的梯度明显，取用量中的pb宜在2 4ug，可推广应用。,10、硒或砷盐硒和砷均为毒性杂质，可按中国药典现行版附录规定的方法，进行检测。硒一般需采用氧瓶燃烧法进行有机破坏后，用分光光度法，与对照品溶液对照进行检测。砷盐有二种测定法，第一法为古蔡氏法。对于具有环状结构的有机药物，因砷有可能以其价键结合在杂环分子中，需经有机破
40、坏后检查，第二法为二乙基二硫代氨基甲酸银比色法，不仅咳用于限度检查，也可用作微量砷盐测定。对于一些外用药或药量较少的口服药，可少用此项检查。,11、安全性试验药品中存在的某些痕量杂质，可对人体产生特殊的生理作用，抗生素药品或供注射用原料药，必要性应检查异常毒性、热原或细菌内毒素、过敏性杂质、降压物质与无菌等项。,综上所述，药品纯度检验，包括的内容众多，在进行药品质量研究时可根据研制药物的性质及要求，进行择要的考察。除用文字记述外，也可列表说明，如表4、表5、表6。,（一）化学药物杂质研究,任何影响药物纯度的物质统称为杂质。杂质的研究是药品研发的一项重要内容。应参照化学药物杂质研究的技术指导原则
41、。本项研究包括选择合适的分析方法准确地分辨与测定杂质的含量并综合药学、毒理及临床研究的结果确定杂质的合理限度。这一研究贯穿于药品研发的整个过程。,由于药品在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关外，有时与药品中存在的杂质也有很大关系。例如，青霉素等抗生素中的多聚物等高分子杂质是引起过敏的主要原因。所以规范地进行杂质的研究，并将其控制在一个安全合理的限度范围之内，将直接关系到上市药品的质量及安全性。,由于此项研究探索性很强，希研究单位在科学合理的基础上对杂质进行研究，用科学实测数据证明药品中存在的杂质可被控制在安全、合理的范围内就达到了杂质研究的目的。,1杂质的分类,一般主要按照杂
42、质的理化性质分类：有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，由于这类杂质的化学结构一般与活性成份类似或具有渊源关系，通常又可称之为有关物质。,无机杂质通常是已知的，主要包括：反应试剂、配位体、催化剂、重金属、其他残留的金属、无机盐、活性炭等。,残留溶剂是指在原料药、辅料及制剂生产过程中使用的有机溶剂。其研究应参照有机溶剂残留量研究的技术指导原则和“残留溶剂测定法”（中国药典2005年版附录P）。,2有机杂质的检测方法包括化学法、光谱法、色谱法等，因药物结构及降解产物的不同采用不同的检测方法。通过合适的分析技术将不同结构的杂质进行分离、检测，从而达到对杂质的有效控制。目前普遍采用的杂质检测方法主
43、要为高效液相色谱、薄层色谱法、气相色谱法和毛细管电泳法。,应根据药物及杂质的理化性质、化学结构、杂质的控制要求等确定适宜的检测方法。由于各种分析方法均具有一定的局限性，因此在进行杂质分析时，应注意不同原理的分析方法间的相互补充与验证。,3杂质检测方法的验证重点在于专属性和灵敏度的验证。专属性系指在其他成份可能共存的情况下，采用的方法能准确测出被测杂质的特性。,检测限是反映分析方法灵敏度的一个重要指标，系指分析方法能检测药品中被测杂质的最低浓度，但不必定量。,对于原料药，可根据其合成工艺，采用各步反应的中间体（尤其是后几步反应的中间体）、立体异构体、粗品、重结晶母液等作为测试品进行系统适用性研究
44、，考察产品中各杂质峰及主成分峰间的分离度是否符合要求，从而验证方法对工艺杂质的分离能力。,为了考察方法能否有效检测出原料药或制剂中的降解产物，可根据药物的化学结构特点、制剂的处方与工艺，贮存条件等选用合适的酸、碱、光、热氧化反应等加速破坏性试验来验证分析方法的专属性，必要时可采用二极管阵列检测器、质谱检测器等检测峰的纯度。,强制降解试验对于未知杂质的分离度考察是非常必要的，其目的主要是提供关于杂质（特别是降解物）与主成分的分离情况、样品稳定性及降解途径等重要信息。破坏试验的程度暂无统一要求，一般以强力破坏后主成分的含量仍占绝大部分为宜。此时已产生了一定量的降解产物，与样品长期放置的降解情况相似
45、，考察此情况下的分离度更具有实际意义。,4有机杂质的定量方法：有机杂质的检测方法一般多采用HPLC法，有时也采用TLC、GC等其他方法。,如采用HPLC法，须采用峰面积，具体定量方法有外标法（杂质对照品法）；加校正因子的主成份自身对照法；不加校正因子的主成份自身对照法；峰面积归一化法。,法定量比较准确，采用时应对对照品进行评估和确认，并制订质量要求。法应对校正因子进行严格测定，仅适用于已知杂质的控制。法的前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同（杂质对主成份的相对晌应因子在0911范围内）。,法简便快捷，但因各杂质与主成分响应因子不一定相同、杂质量与主成分量不一定在同一线性范围内、仪器对微量杂
46、质和常量主成分和积分精度及准确度不相同等因素，所以在质量标准中采用有一定的局限性。,5杂质检测数据的积累 杂质检测数据的积累是制订质量标准中杂质限度的重要依据之一，它包括药品研制过程中所有批次样品（包括用于安全性、临床研究的样品）的杂质检测数据。,检测结果应提供具体数据（如杂质的保留时间及含量），不能笼统地表述为“符合要求”或合格等。建议用表格的形式，列出产品批号、生产日期、单个杂质及总杂质的含量并应提供色谱图。,马来酸罗格列酮有关物质检查结果,方法学研究中杂质分离度和检测限的图谱、代表性批次的图谱、采用其它杂质检测方法所得的图谱、加速及长期稳定性试验的图谱等，可以辅助说明产品中杂质的概况。,
47、6有机杂质的限度测定,质量标准中对有机杂质的限度规定应包括：每一个已知杂质、未知杂质及总杂质。共存的异构体和抗生素的多组分一般不作为杂质进行控制，必要时作为共存物质在质量标准中规定其比例。,单一的对映体药物，其对映构体应作为杂质控制。由于创新药物与仿制药情况不同，在确定杂质限度时，可有所区别。,杂质的研究是药品研究的重要方面，它贯穿于整个药品研究的始终。药品中杂质是否能得到合理、有效的控制，直接关系到药品的质量可控性与安全性。,在进行杂质研究时应重点关注杂质检测方法的选择性与验证及杂质检测数据的积累，这些数据是制订杂质限度的依据。在确定杂质的限度时，一定要综合考虑杂质的安全性、生产的可行性与产
48、品的稳定性。,（二）化学药物残留溶剂,药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及制剂制备工艺中使用或产生而又未能完全去除的有机溶剂。由于有机溶剂对环境人体都有一定的危害，因此为保证药物的质量和用药安全应参照化学药物残留溶剂研究的技术指导原则，需对残留溶剂进行研究和控制。,（1）原料药合成工艺中可能涉及的残留溶剂主要为合成原料或反应应溶剂，影响最终产品中残留溶剂水平的因素较多，主要有：合成路残的长短，有机溶剂在其中使用的步骤、后续步骤中使用有机溶剂对之前使用的溶剂的影响，中间体纯化方法，干燥条件，终产品精制方法和条件等。一般分为三类。,PDE系指每日允许摄入量,其值是根据动物试验中的最大安
49、全量(NOEL)或最小起效量(LOEL)计算所得。如在生产工艺中已使用,在申报临床时,应自检,根据测定结果,如残留量达到一定水平就应规定相应限度,报生产时,将后三步反应中使用此类溶剂订入质量标准中。,C.第三类溶剂（低毒性）丙酮、苯甲醚、乙醇、甲酸、甲酸乙酯、异丙苯、醋酸、异丁基醋酸、异丙基醋酸、醋酸乙酯、丙基醋酸、醋酸甲酯、二乙基乙醚、二甲基亚砜、四氢呋喃、叔丁基甲醚、正丁醇、正丙醇、庚烷、戊烷、正戊烷、甲基异丁基甲酮、丁酮、3 甲基点 丁醇 1、2 甲基 丁醇 1。生产工艺中如使用了，可具体分析，如产品重结晶，临床剂量很大，静脉注射，申报临床时自检，报生产时酌情订入质量标准。ICH未规定它
50、们的PDE值，可根据生产实际和GMP要求，规定限度。,D.第四类溶剂（毒性依据尚不足）如石油醚等。有机溶剂残留量一般采用气相色谱法，对沸点低的溶剂可用顶空法，沸点高的溶剂可用溶液直接进样法，操作可参照中国药典现行版附录或美国药典的方法。可采用有限量和定量控制，尽可能定量控制，在进行其方法学研究时，应注意在所选溶剂中的溶解性，应能保证药物溶解，待测有机溶剂充分溶出，并应进行色谱条件与系统适应性的研究，如检测器、色谱柱、载气、固定相、分离度、内标物、理论板数等；可根据检测的内容和要求分别选用，按质量标准分析方法验证的要求，进行线性范围、回收率、精密度的考察。在此基础上建立检测方法。,（2）残留量的
