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1、不发酵革兰阴性杆菌,不发酵革兰阴性杆菌,概念：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。,不发酵革兰阴性杆菌,假单胞菌属(Pseudomonas)产碱杆菌属(Alcaligenes)不动杆菌属(Acinetobacter)莫拉菌属(Moraxella)无色杆菌属(Achromobacter)金氏杆菌属(Kingella),黄杆菌属(Flavobacterium)艾肯菌属(Eikenella)土壤杆菌属(Agrobacterium)黄单胞菌属(Xanthomonas)丛毛单胞菌属(Comamonas),不发酵革兰阴性杆菌,常见不发酵菌的鉴定双岐索引,第 一
2、节 假单胞菌属(Pseudomonas),一、概述1.分类2.临床意义3.微生物特性 4.微生物检验(1)检验程序(2)鉴定(3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test),1.分类,假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种一群需氧、不发酵葡萄糖无芽胞，有鞭毛氧化酶阳性的革兰阴性杆菌多为条件致病菌,2.临床意义,假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌占7080，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌等,3.微生物特性,革兰阴性、无芽胞、专性需氧有端鞭毛或丛鞭毛生长温度范围广，最适生长温度为
3、35产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药,4.微生物检验,检验程序 鉴定药物敏感性试验按NCCLS（National Committee for Clinical Laboratory Standards）推荐，分为4组：A，B，C，D,二、铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),1.临床意义：铜绿假单胞菌在自然界分布较为广泛，因此很容易污染器械而造成感染机会,致病机制 粘附素：粘附 结构成分 多糖似荚膜物质 毒素 内毒素：LPS毒力因子 外毒素：A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用 绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和
4、过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A）降解弹性 锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白 磷脂酶C:分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞,2.生物学特性,革兰阴性，长短不一单鞭毛生长温度2542氧化酶阳性还原硝酸盐、分解尿素、精氨酸酶阳性,（1）分离培养与鉴定：标本可接种于血琼脂平板培养基和选 择性培养基 鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化 反应等,3.微生物检验（检验程序）,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),血平板上毛玻璃样，金属光泽，生姜味可产生多种色素：荧光素与绿脓素,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),绿脓素,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),（2）抗原
5、检测：血清学分型、噬菌体分型（3）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型鉴定技术,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),检验结果分析与报告：诊断一定要与临床表现相结合 治疗过程中，34天后重复药敏测试,耐药机制：产酶：金属酶，OXA酶外膜蛋白的改变（Outer membrane proteins，OMP）为主要机制主动泵出机制：对喹诺酮类，MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj整合子：1类，3类,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),三、马勒
6、伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌,属于rRNA第II群鼻疽病与类鼻疽病的病原体2004年NCCLs称为可能成为生物恐怖的细菌,马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌,两菌均人兽共患病原菌人类感染是经伤口、粘膜、呼吸道急性患者可有高热、衰竭等全身症状肺鼻疽病、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症,临床意义,生物学特性,革兰阴性杆菌 无芽胞、无荚膜伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(14 根)，4不能生长马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，42 不生长,微生物检验,分离培养与鉴定 需氧菌生长温度35普通培养基、血琼脂、麦康凯生化鉴定荧光直接法染色镜检，可快速诊断,四、嗜麦芽窄食单胞菌,属于假单胞菌科的r
7、RNA同源群嗜麦芽窄食单胞菌（S.maltophilia）和S.africana,分类,临床意义,为条件致病菌呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血症及心内膜炎。在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性率的第三位。,生物学特性,革兰阴性，端鞭毛，(18)根有动力、无芽孢、无荚膜生长温度为35，4不生长血琼脂、普通培养基菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的黄色色素,生化鉴定：氧化酶阴性 液化明胶 水解七叶苷 赖氨酸脱羧酶阳性 氧化分解麦芽糖,药物敏感试验及结果解释,治疗首选磺胺类：TMP/SMZ；喹锘酮类：环丙 氟派酸或替卡西林/棒酸泰能(Imipenem)
8、天然耐药药敏试验纸片法仅有三种抗生素：左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺有折点。其他药敏试验应选用肉汤、琼脂稀释法作MIC，或采用E-TEST的方法。,第二节 不动杆菌属,分类：醋酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus)洛菲不动杆菌(A.lwoffi)溶血不动杆菌(A.haemolgticus)鲍曼不动杆菌(A.baumannii)琼氏不动杆菌(A.junii)约翰逊不动杆菌(A.johnsonii),临床意义,为条件致病菌在不发酵菌的感染中仅次于假单胞菌，近年呈上升趋势,生物学特性,革兰阴性杆菌，多为球杆 状，常见成对排列无芽胞，无鞭毛专性需氧菌生长温度为35普通培养基，麦康凯、血平板均生
9、长氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性,微生物检验（检验程序）,血琼脂培养基：菌落圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径23mm而洛菲不动杆菌菌落小，直径为11.5mm,药物敏感试验及结果解释,Kirby-Bauer法做药敏试验，药物的选择与假单胞菌抗生素的分组相同鲍曼氏不动杆菌，对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药,第三节 产碱杆菌属,粪产碱杆菌(A.faecalis)皮乔特产碱杆菌(A.Piechaudii)粪产碱杆菌亚型(A.faecalis type)木糖氧化产碱杆菌(A.xylosoxidans)脱硝亚种(Subsp.denitrificans)木糖氧化亚种(S
10、ubsp xylosoxidans),分类,临床意义,人体的正常菌群医院感染的病原菌之一,产碱杆菌属,生物学特性,革兰阴性杆菌周鞭毛、有动力最适生长温度为 2535普通培养基生长,分离培养与鉴定,pH至8.6为本菌特点氧化酶阳性触酶阳性不分解任何糖类 O-F基础培养呈碱性脲素酶阴性不液化明胶,第四节 黄杆菌属,短黄杆菌(F.breve)脑膜炎败血性黄杆菌(F.meningospticum)芳香黄杆菌(F.odoratum)水田黄杆菌(F.mizutaii)嗜糖黄杆菌(F.multrivorum)嗜醇黄杆菌(F.spiritivorum),嗜温黄杆菌(F.thalpophilum)薮内黄杆菌(F
11、.gaduuchiae)IIb群黄杆菌(F.group IIb)IIe群黄杆菌(F.group IIe)IIh群黄杆菌(F.group IIh)IIi群黄杆菌(F.group IIi),分类,临床意义,是条件致病菌医院感染的常见菌之一引起败血症、新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎,生物学特性,革兰阴性杆菌无鞭毛、无动力、无荚膜、无芽胞需氧代谢氧化酶、触酶、磷酸酶阳性,分离培养与鉴定,血琼脂培养基生长温度为35菌落：光滑、有光泽、边缘整齐，淡黄色，也有的呈黄色或棕黄色,药物敏感试验及结果解释,临床经验用药可选磺胺及大环内脂类的红 霉素。临床上常见的脑膜炎败血黄杆菌及芳香黄 杆菌等对广谱抗菌药有耐药性，
12、所以最好 根据药敏试验选择用药。,第五节 莫拉菌属,分类,莫拉菌属(Moraxella)属莫拉菌科（Moraxellaceae）医学上重要的莫拉菌有：腔隙莫拉菌（M.lacunata）卡他莫拉菌（M.catarrhalis）非液化莫拉菌(M.nonliquefaciens)奥斯陆莫拉菌(M.osloensis)亚特兰大莫拉菌(M.atlantae)狗莫拉菌(M.canis)林肯莫拉菌(M.lincolnii),临床意义,引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症,微生物特性,革兰阴性球杆菌呈双短链状排列，具有多形性,微生物检验,分离培养：营养要求较高生长温度
13、3235血琼脂平板上生长良好针尖大小的圆形凸起、光滑、半透明、边缘整齐不溶血的菌落。,微生物检验,鉴定：氧化酶阳性触酶阳性无动力不分解任何糖类吲哚试验阴性,药物敏感试验及结果解释,对青霉素类敏感对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖 甙类药物均为敏感脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血 脑屏障的问题,第六节 军团菌属,分类,军团菌属(Legionella)属于军团菌科（Legionellaceae）常见的与人类疾病有关的军团菌：嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）米克戴德军团菌（L.micdadei）长滩军团菌（L.longbeachae）杜莫夫军团菌（L.dumoffii
14、）波兹曼军团菌（L.bozemanii）,临床意义,引起肺炎型和非肺炎型(庞蒂亚克热Pontiac fever)感染肺炎型：多器官损害，肺部、消化道及神经系统症 状及体征，致死率高医院感染可高达23%慢性心、肺、肾病变、艾滋病或接受免疫抑制剂者 易发本病，且死亡率高达45%,临床意义,空气乳胶微粒传播 发病机制：内毒素和细胞产生的多种酶 裂解红细胞 消化卵黄囊,生物学特性,革兰阴性杆菌菌体呈线状无芽胞，无荚膜，有端 鞭毛或侧鞭毛严格需氧触酶阳性可液化明胶不分解糖类部份菌株氧化酶阳性,微生物检验,临床标本：痰、气管分泌物、胸水和血液为主。病理组织标本：必须制成悬液，再进行涂片和分离培养。环境污染标本：应先浓缩再接种。,微生物检验,分离培养：营养要求苛刻，生长缓慢生长温度为35最适pH6.77.0初次分离必须采用(BCYE)35天可形成12mm直径的光泽菌落,核酸检测：是快速特异的方法，采用DNA探针及PCR扩增rRNA的方法均可用于军团菌的快速诊断抗体检测：是检测军团菌感染临床常用手段，常采用方法：IFA、MAA、TAT、ELISA法等,军 团 菌 感 染 诊 断 试 验,常见不发酵菌的鉴定双岐索引,OF试验：O氧化酶：+精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：+氮气：+,假单胞菌鉴定程序,铜绿假单胞菌检验程序,不动杆菌属检验程序,
