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1、ICS65150CCSB51DB地方标准DBXTX-XXXX四角蛤蝌种质MactraVeneriformis点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（征求意见稿）本稿完成口期：2024年5月）-XX实施-XX发布-4,A-刖S本文件按照GB.，T1.I-2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草.请注以本文件的某些内容可能涉及某些专利。本文件的发布机构不承担识别专利的我任，本文件由江宁省农业农村厅提出并归口.本文件起草单位：XX本文件主要起草人：XX本文件发布实施后，任何单位和个人如有何四和意见建议,均可以通过来电和来函等方式进行反馈,我们将及时答复并认直处理，根据实际
2、情况依法进行评估及现审，归口管理部门通讯地址:辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号）,联系电话024-234478620文件起草单位通讯地址：辽宁省海洋水产科学研窕院大连市沙河门区黑石港街50号），联系电话：0411-84691609.四角蛤蝌种质1葩国木标准规定了四角蛤蝇(MactraVenerifolWS)的定义，名称与分类、主要形态特征、繁殖生物学、细恂遗传学特性、分子遗传学特性、检测方法和判定规则，本标准适用于四角蛤蛹的种质检测与鉴定.2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注H期的引用文件.仅注H期的版本适用于本文件.凡是不让日期的引用文件,其被新版本(包括所
3、有的修改通)适用于本文件.GB/T186512-2008养殖鱼类种质桧测笫：部分：抽样方法。3术语和定义下列术语和定义适合于本文件，3.1克高shelIheight壳顶至亮腹缘的最大距离.3.2壳长shclIlength光背面垂直于光高的最大距离.4名称与分类4.1 学名四角始题WaWaVeiiertfomiis(Reeve.1853),4.2 分类地位隶属于软体动物门物QllUSCa)、双克纲(BiValYia)、帘始目(Veneroida)蛤蛆科(Vfactridae)、始蝴J(Unctrn).5主要影态特征5.1 外部形态特征贝克坚与，略成四角形,两壳极膨版，壳顶突出，位于有缘中央略擢前
4、方，尖揣向前对，贝壳具外皮.顶部白色,幼小个体呈淡紫色,近腹嫁为黄褐色.腹面边缘常有1条很窄的边缘.生长线明整粗大.形成凹凸不平的同心环纹.四知蛤蜗的外部形态见图I.图1四角蛤蝌外部形态5.2 内部构造由左右外膜附着壳内面包用整个肉体形成外贲脏，食原分边绿、中央两部分：边绿部分肌肉发达较肥厚、中央部分薄而透明.外套膜在后端眼恻着,形成两个水管水管短而机,两个水管紧旅,出水管较入水笆细而短，位于入水管背面：两水管的末端具材触r.体中部稍后方左右两网彳r两个鲍阳，褪前方左右各有两片唇也、唇般之间为口。外套腔儡前方有一略呈扁形的内脏块，其腹面为呈斧刀状的足.心脏位于光顶卜方，内脏块背侧偏后,星梭形带
5、透明状.5.3 可数性状5 .3.1贝壳2片，左右对称。6 .3.2外套膜2片，左右两叶.5. 3.3鳗!左右各2片。6. 3.4左壳具主齿1枚，右壳具主齿2枚，6繁殖生物学6.1 性成熟年龄与性腺特征雌雄舁体,雌雄外观上无区别,生殖腺1个.性成熟年龄为一冏年，成熟季节,雌性生明腺为乳白色，雄性为桔红色.6.2 性比性比1:1.08左右,雄性多于煌性.6.3 繁殖期2次繁殖期，分别为4月6月及10月上旬。6.4 产卵量3龄4龄四角始照第,次产加尔约为13X10粒18XIOJj粒.6.5 精卵特征沉性卵，卵径为70m-R0m.精子分为头部、中段和尾部：部分.DBTxxx7细胞遗传学特性体细胞染色
6、体数目2n-38.8分子遗传学特性8.1四角蛤蝴线粒体DNACOI基因片段（625bp.GcnBank序列号：G0864238.1）ICTTTTGTTCTTTATTCGTTTGAATTGGCTGTTCCTGGTGGTTGCTTGTGGTC61AGCrAAAIlGGGTAACAGCACAGCAG!AAAAGTAAAC121CTATAATGATGGGAGGTnTGGAAACTGGTTAGTTCCEAArAeTAAAAGTTCCTGTA181TGAGTnTCCTCGWAAACAAIATTAGTnTTGACTTcTrCCTGTGTclATGrTACTGT241TArTCGECAGCTTtgttgAAA
7、GAggggcaggaActgggtgaactaecctcctt301!ACAGCCAAAGGCATCC!GGCKJC!XiCTAGGAAGlAITCCCAG361TTGGTGGTCTcTcTrCAATTTTAGCTTeTATTAATnTTTTAeTAcTTTcTTGAGAATGC421GTTTTAAGGTGATGTeTTTArATCGTGTTCCATrATTCGTATGGTGTATTGCTGTTACTA481GGTnTTATTAGTAGTAGCTATGCCTGTnTRGCTGGTGCTEACGATTTACTTACTG541AICGAAIJ11AAAC11CIHT!1111GACCCAAArG
8、GAArGGGTGACACTArrrrAITrG601TTCTTTGTTTTGTTTTGGTC8.2四角蛤娴全基因组N50序列长度为7977.84Kb氏度为939.32Mb。全基因组图进见图2。图2四角蛤蝌全基因组图谱,（八）四角始蝌(XaciraVeneriformis)的全基因组图讲.从Jli外层到被内层t以Xb为尺度的包含MVenerifornis禁四削的19条型色体,红色表示正融上的基闪线色代示负Str的基闪：每Mbir算的整因密度：以及GC含眉.叫向蛤帆的Hi-C相互作用热图“9检测方法1.1 抽样应按照GB/T18654的第2部分(抽样方法)的规定执行。1.2 主要形态构造检测9.
9、 2.1外部形态光税充足时，肉眼观察外部形态进行检刈.10. 2.2可量性状光将和无长按照定义描述用游标卡尺进行测量检测.11. 2.3内部构造四角蛤蝌流开后,光戏充足时,肉眼观察检测，12. 细胞遗传学检测按附录A执行13. 分子遗传学榜测按附录B执行10.1当检测结果符合第5章和第7章要求，可判定物种时，按第5章和第7章的要求判定.102当出现下来情况之一时,增加检测第6章和第8章的要求内容依据检测结果对物种进行辅助鉴定:a）第5章和第7章的项目无法进行检测或者为定时：b）第三方提出要求时.附录A（资料性附录）染色体检测A. 1染色体标本的制备-将蝴组织用0.04%秋水仙素（海水配制）处理
10、20min-30min.O.O75M氟化抑低海40min60ain.用新配置冰冷卡诺氏固定液固定三次，每次固定不少于15三in.50%冰船假价离数分钟,轻轻吹打。一-低温滴片.自然干燥.干燥后10%GiemSa染液（pH6.8）染色15min20min.自来水冲洗，自然干燎后俄检。A.2核型分析观察100个分散良好的中期分裂相，记数确定:倍体数，应从中挑选10个分散良好、形态清晰的中期分裂相进行显微摄像、放大、测质,染色体分类应按照GB/T18654的第12部分染色体祖里分析的规定执行.附录B(资料性附录)四角蛤榻Col基因序列分析B. 1总DNA提取取四角蛤蝌斧足,蛋白梅K消化后，用试剂盒进
11、行总DNA的抽提.B.2引物序列COIFs5ACACTTTATTTGATTTrrGG3.COIR：5YCCATTGAGAACGTAGTGAGTG383PCR扩增反应反应体系为501.每反应体系包括I.25单位的TaPDXA聚合解：各种反应组分的终浓度为20OnmOl/1.的正反向引物:200nmol/1.的每种dNTP,IoXPCR缓冲液20011moll.Tris-HCl,pH8.4：20011noll.KCl：100nmol1.(NH4)2S04;15三1.VgC12j5Ml,力UNiIliFH20至5(d.基因祖DNA20ng,PCR舂数包括949侦变性4in,94C变形40s,45C退火45s,72C延伸1min,循环35次后,72C延伸7mIn所有PCR均在热循环仪上完成.每组PCR均设阴性对照来检测是否污染。84测序扩增产物送生工生物工程股份有限公司直接测序,为了保证序列的准确性,对所有样品应进行双向测序.
