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1、第九章SimulSET 软件学习本章后应能够：l 用SimulSET从流式细胞仪获取和分析数据l 用SimulSET进行基于文件数据的分析l 在SimulSET中创建多个参考范围91 概述 SimulSet 软件提供了快速有效的淋巴细胞亚群分析。双色LeucoGATE试剂加上SimulSet的设门策略来自动设立淋巴细胞门。SimulSet 软件在获取、分析样本的同时生成报告，也可分析以前获取的List Mode 数据文件。 SimulSet 软件能：l 自动设立用LeucoGATE试剂标记的样本的淋巴细胞门l 允许客户自己手动设立实时门（live gate），而不采用自动设门。live gat
2、e限制只获取门内细胞的数据。l 若SimulSet不能根据设门策略来自动设立淋巴细胞门，允许客户自己手动设立门。l 软件自动根据同型对照管设定荧光象限Marker建立背景荧光的界限。l 允许客户自己手动调节荧光象限Marker，生成新的象限统计结果。l 依次获取、分析相同或不同试剂组合（Reagent Panel）的病人样本。l 可显示、打印和储存实验、医生及总结报告。注意：请参阅SimulSet Users Guide（SimulSet用户指南），有关体外诊断方面的软件限制。92 SimulSet 图标图标 名称 任务 Sign In 填写操作者、单位、负责人，以启动软件 Set Up 设定
3、实验的特殊信息 FACSComp 获取前的仪器校准 Test Prefs 输入分析的特殊条件 Patients 输入/浏览病人信息 Acquisition 获取 Analysis 分析 Lab Report 浏览每管结果并可手动设门和调节荧 光象限Marker。 Phys Report 浏览医生报告，并可添加评注 Summary 运行结束后浏览总结报告93 SimulSet 文件Flow Cytometry Standard(FCS)Data File (前缀输入号.试管编号)： SimulSET软件可以获取或读取FCS2.0标准数据文件，数据必须为四参数和256分辨率。除了用 SimulSE
4、T做获取以外，您也可以用CELLQuest获取该标本各管的数据文件，再用SimulSET做数据分析，但要求使用与SimulSET一致的测试项目 (Panel) 设置。文件默认路径BD Files:SimulSET Files: DDMMYY Folder。Schedule Document File (DDMMYY.sch)：日程记录文件。记录测试时输入的Sign In、Set Up、Test Prefs、Patient及所有Preferences等内容。SimulSET不能自动储存该文件，必须从File 菜单中选择Save。 Laboratory Report File (前缀输入号.lab
5、)：实验室报告。 为PICT文件。标本测试完成后，按照您选择的点图记录一个标本测试中各管结果，并按照试验标本顺序编号。可以用File-Open Report打开该文件，可以打印，但不可以编辑。文件默认路径BD Files:SimulSET Files: DDMMYY Folder。 Physician Report File (前缀输入号.phy)：医生报告。 为PICT文件。标本测试完成后，记录一个标本的试验结果，并按照试验标本顺序编号。可以用 File-Open Report打开该文件，可以打印，但不可以编辑。文件默认路径BD Files:SimulSET Files: DDMMYY Fo
6、lder。 Summary Report File (DDMMYY.sum)：总结报告。 为Text文件。试验结束后，将一次试验的所有标本结果列表。可以用File-Open Report打开该文件，可打印，但不可编辑。文件默认路径BD Files:SimulSET Files: DDMMYY Folder。 94 SimulSet 文件命名原则 在SimulSET中数据文件、实验报告文件、医生报告文件的命名有一定原则。例如：病人姓名：Xiejun，为第5个病人, 获取时间为2000/11/25，数据为第二管（同型对照），以病人姓名为文件前缀。文件类型 命名原则 例子数据文件 （前缀）（在Pat
7、ient窗口中的病人登记号）.（管号） Xiejun05. 02数据文件（第一次获取） （前缀）（在Patient窗口中的病人登记号）.（管号）（代表获取次数的字母） Xiejun05. 02a数据文件（第二次获取） （前缀）（在Patient窗口中的病人登记号）.（管号）（代表获取次数的字母） Xiejun05. 02b实验报告文 （前缀）（在Patient窗口中的病人登记号）. lab Xiejun05. lab医生报告文件 （前缀）（在Patient窗口中的病人登记号）. phy Xiejun05. phy日程记录文件 DDMMYY.sch 251100.sch总结报告文件 DDMMYY
8、.sum 251100.sum注意:1. 一管可反复获取达26次,但只要最后一次的数据用于统计计算、生成实验报告文件、 医生报告文件。95 SimulSet获取前的准备 用beads 来运行FACSComp，调校仪器的PMT、补偿和灵敏度。用样本来优化仪器条件，并将优化条件储存。FACSComp可在SimulSET上运行。在做标本获取前，调出以前保存的Instrument Settings。 在Cytometer菜单中点击Instrument Settings，调出获取条件，文件路径为BD File:Instrument Settings File:Calib。96 SimulSet获取 96
9、1 启动SimulSet （Sign In）1在苹果菜单下点击SimulSet ，如是第一次使用，需要做注册。2输入操作者姓名、单位名称和实验室主任名称。仪器自动显示流式细胞仪的序列号和型号。3点击Accept，进入下一工作程序（Setup）。962 Set Up 窗口 在此选择分析的数据来源、文件名前缀、浏览报告的方式、储存的内容及位置。 1选择数据来源。如选择做仪器获取，需要保证仪器与计算机连接。 From Data Files：对以前保存的数据文件做分析。 From Cytometer ：在流式细胞仪上运行标本，获得数据。在自动门或手动门内默认最低淋巴细胞数为2000，但可更改。标本获取
10、完毕后，软件自动分析数据，输出实验室报告和医生报告，保存在输出文件中。 2确定数据文件、实验室报告、医生报告等文件名前缀的使用。 前缀可以用标本名称Sample Name、标本编号Sample ID、病历号Case Number、日期Date-DDMMYY或自定前缀Custom Prefix。 3确定自动保存的文件类型及其保存位置。选择是否保存Data Files, Laboratory Report, Physician Report, Summary Report。按Location，选择或创建文件保存路径，文件默认路径BD Files: SimulSet Files: DDMMYY Fo
11、lder (自动生成日期目录)。 4选择浏览实验室报告和医生报告的方式。可以按Next阅读报告，也可以选择计算机停若干秒后自动翻页 (可以停留0-60秒钟)。 5点击Accept，进入下一工作程序（FACSComp）。 在此可设置软件的Preference ： 可设置输出、打印、细胞数和选择Panel，且所有这些可在Schedule 文件中储存。1 从SimulSET 菜单中选择Preference，出现对话框2选择Export：设定Tab(适用于Macintosh 软件, 若选Comma, 可在其它软件中使用).3选择Printing：设定为Never：报告生成后不立即打印 After Ea
12、ch Entry：报告生成后立即打印 4选择Panel：设定适当的Panel，并设定允许手动设门、允许象限Marker调整5选择Events：设定初始获取细胞数：1000015000 设定最大获取细胞数：50000、75000或1000006点击Save。 963 FACSComp 窗口 FACSComp：如果从仪器获取数据，软件自动进入此画面。 选择Launch FACSComp，进行Lyse wash校正。 如果当日已做校正，则选择Skip FACSComp，进入下一工作画面。在做标本获取前，调出以前保存的Instrument Settings。 在Cytometer菜单中点击Instru
13、ment Settings，调出获取条件，文件路径为BD File:Instrument Settings File:Calib。 964 Test Prefs 窗口 进行分析和报告内容的选择，选择是否报告绝对计数，是否报告正常值范围，是否选择一致性检测及样本制备的方法。1 在Analysis Choices中选择：Percent Lymphocyte Conversion、Three part Differential 、Absolute Counts（选择绝对数的来源）。2 在Consistency Checks中选择：需作一致性检测的内容（包括T+B+NK总数、所有含CD3+管的CD3均
14、值、所有含CD8+管的CD8均值）。3 Reference Range Report：选择正常值范围报告方式（百份数、绝对数）4 Preparation：选择样本来源（溶血的全血样本、外周血单个核细胞等） 在此可编辑Reagent 和Panel： Panel 的编辑：Panel允许您将所定义的试剂进行组合，以便为实验的每管自动选择参数名。1点击Panel Tools，出现对话框。IMK-Lymphocyte 的Panel已存在。可添加或删除。2点击Reagent Information 中Subset，输入相关信息，点击OK。 Reagent 的编辑：（也可输入参考范围，见9.8）1 点击Re
15、agent Tools，出现对话框。可添加或删除Reagent。2点击Add Panel，new panel 就出现在Panel list 中，输入panel 名3点击Add ，点击Reagent上的CD3/CD19，点击Move。4重复第3步。依次将其它余下的Reagent加上，点击OK在此可将上述设置以Schedule 文件储存： 在File 菜单中选择Save，选择储存的位置，点击Save，文件以DDMMYY.sch保存。它包含了在Set Up 和Test Prefs中输入的信息。965 Patient 窗口1 点击Test Prefs窗口中的Accept。2点击Patient Name
16、 并输入病人姓名，在Panel Name 中选择IMK3在WBC count/Lymphs（%）中输入相应数字，以便作绝对计数。4点击Run Test进入获取步骤。在此可将调出以前保存的优化的Instrument Settings 在Cytometer菜单中点击Instrument Settings，调出获取条件，文件路径为BD File:Instrument Settings File:Calib。966 Acquisition 窗口（数据获取）1 点击Run Test进入获取。 2插上LeucoGate管，点击Acquire，获取一结束，实验报告就出现。 一个可接受的软件自动设立的淋巴细胞
17、门应： the Gate Composition：% Lymphocytes： 90% % Monocyte： 3% % Granulocyte：Page: 9 6% % Debris： 10% 若想提高淋巴细胞的纯度，可手动重新画门。点击FSC/SSC点图，手动画门，然后关闭该点图，所有报告中数据重新统计。 3点击Continue，插上同型对照管，点击Acquire，获取一结束，实验报告就出现，若必要可调节FL1/FL2点图的象限Marker。 4点击Continue，依次插上其余管进行获取。全部获取完后，点击Continue，打印实验报告。最后退出软件。97 SimulSet数据分析 可分
18、析以前获取的List Mode 数据文件。若该数据文件是用CellQuest获取的，则必须满足下列条件：l 分辨率必须为256l 只能二色样本l CellQuest的Panel必须与Simulset中一致1在苹果菜单下点击SimulSet ，完成Sign In 2点击Accept，进入Setup，选择数据来源：From Data Files：完成其余Set Up 内 容 3点击Accept，进入（跳过FACSComp）Test Prefs，完成该窗内容。 4 点击Accept，进入Patient ，点击Add Patient File，选择目录及文件（选择LeucoGate 对应的.01文件开始） 5点击Run Test进入分析步骤, 第一个文件分析完后点击Continue,直至最后一个 文件。 6点击Next 分析下一个样本。98 设置参考范围 1在苹果菜单下点击SimulSet，启动软件。 2完成Sign In，点击Accept，进入Setup，点击Reagent Tools 3点击Subset，选择某个参数，输入相应的参考范围 4点击OK
