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1、N2000型色谱工作站操作规程目的：建立色谱工作站操作程序，规范操作行为。适用范围：N2000型色谱工作站操作责任者：色谱工作站操作员程序：1、进入N2000色谱工作站，选择进入“在线色谱工作站”。2、打开通道1或2,对实验信息、方法进行编辑。3、输入实验信息，包括实验标题、实验人及实验单位。4、编辑方法：采样控制：输入采样结束时间、文件前缀、文件保存方式、保存路径以及选 择采样结束后自动积分或自动打印报告；积分：选择积分参数、积分方法，并且根据实验所 需对分析参数进行修改；谱图显示：输入时间、电压显示范围，并选择色谱图注释内容； 报告内容编辑：根据实验所需对谱图尺寸、实验信息、报告内容及谱图
2、显示等进行修改；仪 器条件：在“液相色谱”下输入仪器型号、标温、柱类型，在“检测器”下输入检测波长，梯 度方式”下选择梯度类型、输入流量。5、数据采集：查看基线；零点校正。6、待检测器稳定后，开始进样。在“数据采集”状态下，单击“采集数据”采集完毕后，单 击“停止采集”，如不要此数据，则单击“放弃采集”。7、在“在线色谱工作站”状态时，打开“离线色谱工作站”。8、在“ off line”下，打开文件，查阅数据，并对所得结果进行计算、打印。9、分析完成后，退出N2000色谱工作站。N2000型色谱工作站的有关概念1、本工作站需用到的部分色谱专业术语1.1色谱图的有关概念色谱图:色谱柱流出物通过检
3、测器系统时所产生的响应信号对时间或者说载气流出体积的曲线图色谱峰:色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生响应信号的微分曲线。基线:峰的起点与终点之间所连接的直线峰高:从峰的最大值到峰基线的距离峰宽:在峰两侧拐点处所作切线与峰基线相交两点之间的距离半峰宽:通过峰高的中点作平等于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离峰面积:峰与峰基线之间的面积1.2峰处理参数色谱峰检测、基线漂移的修正、峰起落点的确定、分割分离不完全的峰、测定峰面积等谱峰 处理，都是根据设定的峰处理参数（如峰宽、斜率、漂移量、最小峰面积、时间变参、时间程 序表及积分事件表）等进行的，其有关概念见下表：参数单位及范围功能与说明峰
4、宽050 (5)秒删除峰宽比设置值小的峰，过程如同筛子以最小有效峰的半 高处的宽度为依据来设置，最小半峰宽，可从谱图显示处估 计该设置值。斜率099999.99 (70)(微伏/分)峰检测灵敏度，用于确定峰的起点与终点最小 峰面 积0 99999.99(100)(微伏?秒)删除面积（峰高）比设定值小的峰，用于删除分析过程中面积 相对较小的不相关峰（如仪器噪声）漂移099999.99 (0)(微伏?秒)确定基线变化程度，实现峰面积的自动分割置“0”则进行 自动修正时间 变参02000 (0)(分)依据色谱峰的峰形规律,在到达设定时间后，斜率减半.峰宽 加倍，置“0”根据峰宽与实际峰形的关系，自动
5、改变，如不 想使用则设置一个比停止时间大的值锁定 时间0 99999.99 ( 0)(分)删除分析开始至锁定时间之间的峰，主要用于删除分析开始 的一段时间内出现的空气峰，溶剂峰，负峰等不相关峰样品量0 999999.99(100)分析样品的重量，不能置零，对非归一法有效注：表中括号内数据为系统默认值。2、色谱处理的相关概念21数据采集：在采集数据的过程中，分析仪器所输出的信号在采集器中由模拟 信号转化为数字信号。数字信号传送到N2000色谱工作站并保存在信号数据文件 中。2.2. 积分：积分是从信号曲线上确定峰并计算其大小。积分是定量计算必不可少 的。N2000色谱工作站积分时，先是辨别每一个
6、峰的开始及结束时间，并用“| “符号标记这些点，同时寻找这些峰的顶点，确定保留时间，建立基线，计算峰 面积、峰高及峰宽。这些过程由积分参数表、时间表、手动积分事件表控制。在实际运行中，色谱工作站常常必须处理非常复杂的色谱问题。在一次运行 中，峰的大小可能变化很大，而且峰经常是以很小的浓度出现。系统噪声，漂移 等干扰会影响工作站用来计算峰面积和高度的基线，最终会导致色谱过程难以完 全将峰分离。只要有可能，就优化色谱分析方法来产生分离效果。当由于某些原 因而难以做到时，色谱工作站必须处理复杂峰。因此，我们知道峰的积分是一项复杂的工作，尽管我们浙江大学智能信息工 程研究所的增强型智能算法尚不能对极差
7、的色谱峰完全补偿，但我们的N2000型 色谱工作站能够克服噪声、漂移和峰的不完全分离等问题，并从较差的色谱图中 获得可重复的结果。23.定量：使用峰面积或峰高来确定样品中化合物的浓度，包括以下过程：弄清 并鉴别您所分析的化合物；建立分析含有这种化合物样品的方法；分析含有已知 化合物浓度的一个或几个标准样品，以获得该浓度下的响应，并计算出响应因子； 分析未知浓度的化合物样品，以得到未知浓度的响应；将未知浓度的样品与标准 样品进行比较，并利用标准样品的校正因子来确定未知样品中化合物的浓度。为了获得未知样品响应与标准样品的有效比较，必须在相同的条件下采集 和处理数据。2.4. 舞：校准是通过进样分析
8、指定的准备好的标准样品，来确定计算绝对组分 浓度的响应因子的过程。重复次数：同一浓度的标准样品平行进样的次数。校准点数：由一个校准不同样品浓度的校准点组成。标准样品：也叫校准样品或标准混合物，是含有用于定量的已知数量的化合 物样品。标准样品可从国家标准试剂供应商处买到。标准曲线：是从一个或多个标准样品中获得的化合物的数量与响因数据的图 形表示。25.报告：报告包含所分析样品的质及量的信息。报告可以直接打印，或在屏幕 上显示，报告可包括运行中所测峰的详细信息及所得的信号图。3、本工作站的特有概念介绍：积分方法、组分表、谱图、ORG文件、MDY文件、DAT文件、手动积分事件表等。3.1. 方法（.
9、MTD文件）方法是指控制工作站对色谱仪的信号进行显示、采样保存、分析计算、打印、 同时记录试验条件的一个程序，包括采样控制、积分参数、组分表、谱图显示控 制、报告编辑格式、仪器条件等。本工作站所用的方法有三类：贮存方法、缺省方法、现用方法，扩展名为.MTD针对不同的样品设置相应的方法，可以使您更准确更快速更方便地进行样品 测试，并真实地记录样品的实验条件。所以，在日常的操作中应养成良好习惯； 即取一个简单直观的方法文件名并及时地保存修改过的方法。3.2. 组分表（即ID表）工作站组分表就是用来鉴别峰，判定组分名称，进行非归一法计算时的依据。3.3. 谱图DAT文件即只包含色谱数据信息的文件，与
10、原N型和UPPER色谱工作站兼容。3.4.ORG 文件原始处理数据文件，除了谱图数据以外，还包括实验信息与样品分析方法、 仪器条件、积分及定量计算结果、结果报告等信息。这是只可查看不可编辑的二 进制文件，因而可确保结果的原始性，符合IS09000系列及美国GMP认证规定。 后处理时不许对其进行修改，修改后保存为MDY文件。3.5. MDY 文件对原始处理数据（ORG文件）进行修改后保存的文件。3.6. 实验日志即您利用本工作站时对方法的操作、数据的采集等在线工作站的自动记录。可记录整个系统的运行情况，包括方法的建立、保存、另存、加载、实验数 据的采集及文件的保存。3.7. 手动积分事件表即您对
11、谱图手动画基线等手动积分事件的集合。N2000工作站相关文件操作1、本工作站通用的文件操作方式1.1 .方法的加载：从磁盘中调入一个已有方法到内存中，作为现用方法处理色谱 数据。1.2 .方法的保存：将内存中正在使用的方法以加载时的文件名保存到磁盘中，以 免因调用其他方法或突然停电而将修改后的方法丢失。1.3 .方法的另存：将内存中正在使用的方法作为另一个文件名保存到磁盘中。1.4 .方法的缺省：将工作站内置的方法调出作为当前方法。1.5. 谱图的打开：从磁盘中调入一个已有的谱图作为当前对象进行操作，打开之前可以在打开谱图的下方小窗口进行预览及放大。1.6. 谱图的保存：将当前内存中的谱图以另
12、一个文件名保存到磁盘中，需要选择 或者输入一个文件名，保存的扩展名为MDY。2、本工作站通用的谱图操作方式2.1. 谱图的放大：在谱图窗口内，按住鼠标左键，从左上到右下选一个区域，放开鼠标，所选 区域即被放大至全窗口。2.2. 谱图的缩小：与放大的操作步骤相反，即在谱图窗口内，按住鼠标左键，从右下到左上拉 一个区域，放开鼠标，谱图即还原回被放大前的全窗口。2.3. 谱图的拖动：即在谱图窗口内，按住鼠标右键，任意移动鼠标，即可将谱图的其他部分显 示在窗口内。2.4. 选择一个色谱峰：按住shift键，用鼠标在谱图上点击所需要的色谱峰，然后再点击插入， 工作站自动给出相应的保留时间，以方便您进行组
13、分表的编辑。2.5. 选择一个时间段：按住shift键，用鼠标在谱图上拉出所需要的时间范围，在编辑时间程序 表时用。2.6. 谱图的全量程显示：以最大的峰高为纵坐标，将谱图的所有峰都显示在窗口内。工作站默 认为本选择。2.7. 谱图的自动显示：即工作站根据谱图的实际情况，自动选择一个最佳的电压作为纵坐标， 以美观的格式显示谱图，方便您的操作。2.8 .范围不变：即工作站强制以您设置的电压范围和时间范围显示谱图。校正归一法（单点多次校正）在本例中，所测样品有四种组分，各组分浓度如下:组分名组分浓度（）A25.23B45.22C15.5D14该样品所采用的方法为“面积校正归一”，且已对该标样进行了
14、2次平行进样（重复进样）。现 要求对方法进行单点二次的校正归一法校正。参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用“面积校正归一法”，如图所示：2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用“全选”方式套用各组分保留时间及时间 宽度，在峰名一栏中输入组分名“ A”、“B”、“C”、“D”，然后单击“采用”，工作站将跳出提交成功窗口:Onlme点击OK,工作站将加亮“校正”按扭，单击“校正”，工作站将跳出校正窗口。3、输入标准品含量:单击“组分含量”，在组分含量表中输入A、B、C、D的浓度，如图所示:注：在输入组分含量时，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下
15、，很容易将小数点“ ” 输成句号“。”。这是软件不能接受的格式，还则系统将提示您“请输入正确的数值”。4、校正：在本例中我们采用“加入标样”来运行校正，单击“加入标样”，工作站将跳出“打 开谱图文件”窗口，选择标样hplc1.dat，单击“打开”，以完成一次校正；重复第一次校正步骤，即再点击一次“加入标样”，打开标样谱图hplc2.dat文件，并“确定”， 单击“校正完毕”用以完成本次平行两点校正。5、预览校正曲线:单击“另存”，输入方法文件名“面积校正归一法（平行两次校正）测样MTD”，用以保存校正 曲线，以便分析样品使用。高度内标法（单组分单点二次校正）例:标准样品的配制:精密称取98.5
16、4mg VE标准品（含量为99.3%）于100ml容量瓶，用含1mg/ml 内标物C32的正已烷稀释至刻度。可算出VE标准品的浓度（即标浓度1）为0.9785mg/ml；样品1的配制：精密称取96.13mg样品于100ml容量瓶，用含1mg/ml内标物C32的正已烷稀 释至刻度。可算出VE样品的浓度（即样品量）为0.9613mg/ml样品2的配制：精密称取90.10mg样品于100ml容量瓶，用含1mg/ml内标物C32的正已烷稀 释至刻度。可算出VE样品的浓度（即样品量）为0.9010mg/ml标准品连续进两针，做平行二次校正。标准品组分浓度：组分名称重(MG)浓度(mg/ml)纯度(%)净
17、重(MG)NB (C32)1*100=1001100%100VE98. 540.978599.3%97.85待测样品浓度:样品号组分名称重(MG)浓度(mg/ml)纯度(%)净重(MG)样品1NB (C32)1*100=1001100%100VE96.130.9613*X1X1Y1样品2NB (C32)1*100=1001100%100VE90.100.9010*X2X2Y2该样品所采用的方法为“高度内标法”，且已对该标样进行了2次平行进样(重复进样)。现要 求对方法进行单组分单点二次的校正归一法校正。参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用“高度内标法”
18、，如图所示：2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用“插入”方式套用各组分保留时间及时间 宽度，先按住键盘上的SHIFT键，再用鼠标单击所需要的峰，单击“组分表”页签中的 及通 分别插入NB，VE组分峰，如图所示：注：时间宽度也可采用绝对数值，在此也可输入05(MIN)做为时间宽度。以同样的方式插入VE组分峰，组分峰不需要作内标峰标记，不需要输入内标量及含量。如图 所示：然后单击“采用”，工作站将跳出提交成功窗口:点击OK,工作站将加亮“校正”按扭，单击“校正”，工作站将跳出校正窗口。3、输入标准品含量:单击“组分含量”，在组分含量表中输入NB、VE的浓度，如图所示:注：在输入组分含量时
19、，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下，很容易将小数点“ ” 输成句号“。”。这是软件不能接受的格式，还则系统将提示您“请输入正确的数值”。4、校正：在本例中我们采用“采集标样”来运行校正，进一针标准品，按下采集开关（或单击“采集数据”按扭），待所有组分出完峰后单击停止，以完成一次校正；重复第一次校正步骤，即再进一针标准品，再次按下采集开关，待样走完后，单击“停止采集”， 单击“校正完毕”用以完成本次平行两点校正。5、预览校正曲线:单击“另存”，输入方法文件名“高度内标法（平行两次校正）测样.MTD”，用以保存校正曲线， 以便分析样品使用。面积外标法（单组分多点一次校正）本例是测定气体CO
20、2组分含量示例，其组分分浓度如下表:项目CO2浓 度 （%）20406080该样品所采用的方法为“面积外标法”，且已对该标样进行了5次不同浓度进样。现要求对方 法进行单点五次的面积外标法校正。参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用“面积外标法”，如图所示：2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用“全选”方式套用各组分保留时间及时间 宽度，在峰名一栏中输入组分名“CO2”，然后单击“采用”，工作站将跳出提交成功窗口:Onilkie赛变成助|3二1点击OK,工作站将加亮“校正”按扭，单击“校正”，工作站将跳出校正窗口。3、输入标准品含量:单击“组分含量
21、”，在组分含量表中输入CO2第一点的浓度（20），如图 所示：注：在输入组分含量时，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下，很容易将小数点“ ” 输成句号“。”。这是软件不能接受的格式，还则系统将提示您“请输入正确的数值”。4、校正：在本例中我们采用“加入标样”来运行校正，单击“加入标样”，工作站将跳出“打开谱图文件”窗口，选择标样CO2-20.dat，单击“打开”，以完成一次校正；重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次“组分含量”，输入第二点浓度（40），打开 标样谱图CO2-40.dat文件，并“确定”，用以完成本次校正。重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次“组分含量”，输
22、入第三点浓度（60），打开 标样谱图CO2-60.dat文件，并“确定”，用以完成本次校正。重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次“组分含量”，输入第四点浓度（80），打开 标样谱图CO2-80.dat文件，并“确定”，用以完成整个校正过程。5、预览校正曲线:单击“另存”，输入方法文件名“面积校正归一法（平行两次校正）测样MTD”，用以保存校正 曲线，以便分析样品使用。面积外标法（两点二次校正）本例是测定白酒中各组分含量示例，其组分分浓度如下表:组分名浓度 1(mg/ml)浓度 2(mg/ml)甲醇0.010.02异戊醇0.030.06异丁醇0.060.12该样品所采用的方法为“面积外标
23、法”，且已对该标样进行了4次2种浓度重复2次进样。现 要求对方法进行两点二次的面积外标法校正。参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用“面积外标法”，如图所示：超分方法f面祝L校正！L指莪法广房度2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用“全选”方式套用各组分保留时间及时间 宽度，在峰名一栏中输入组分名“甲醇”，“异戊醇”、“异丁醇”。然后单击“采用”，工作站将跳出提交成功窗口:叫*|也|0 书点击OK，工作站将加亮“校正”按扭，单击“校正”，工作站将跳出校正窗口。3、输入标准品含量:单击“组分含量”，在组分含量表中输入CO2第一点的浓度（20），如图
24、 所示：4、校正：在本例中我们采用“加入标样” 开谱图文件”窗口，选择标样白酒标样1.校正;注：在输入组分含量时，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下，很容易将小数点彳”输成句号“。”。这是软件不能接受的格式，还则系统将提示您“请输入正确的数值”。来运行校正，单击“加入标样”，工作站将跳出“打 dat、白酒标样2.dat，单击“打开”，以完成一次重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次“组分含量”，输入第二点浓度，选择标样白酒标样1.dat、白酒标样2.dat，单击“打开”，以完成二次校正|打并丈IU文芥2SJ旧屏0缺重复第一次校正步骤（3-4步），即再点击一次“组分含量”， 样谱图C
25、O2-60.dat文件，并“确定”，用以完成本次校正。输入第三点浓度（60），打开标17心曰口万；衣押开iniCM4.神i心|如5、预览校正曲线:单击“另存”，输入方法文件名“面积校正归一法（平行两次校正）测样MTD”，用以保存校正 曲线，以便分析样品使用。比较谱图离线色谱数据工作站的比较谱图功能E9-4+J比较谱图苒打开帮助定义对齐对齐起点对齐相加相减拼援合并/ 4 TT单击谱图比较菜单，就可以同时打开多个谱图并对之进行比较或加减。方法为用鼠标单击再打 开按钮或选中菜单中的相应功能，上面的是用来比较的谱图，下面的是被比较的谱图。在谱图 加减运算中，上面的谱图是用来加减的谱图，下面的是被加减的
26、目标谱图。谱图比较有很多实 用的功能，如图9-4所示，具体操作如下：图9-49.2.1分开显示谱图与合并显示再打开一个谱图后，您可以把多个谱图用合并显示与分开显示两种方式进行查看，默认为分开 显示，如需为合并显示，则用鼠标单击合并显示按钮或在菜单中选中该功能。工作站马上就可 以将两个谱图合并在一起显示，如图9-5所示。反之亦然。图9-5多谱图打开比较：在打开两个谱图比较的基础上，你可以单“再打开”，对多个谱图进行操作。 如下图所示：五个谱图三个谱图9.2.2谱图的对齐按照本条辽技对齐图9时为了方便地进行比较，您可以根据需要对齐两个谱图，除了工作站默认的方式即起点对齐以外， 工作站还可以先自定义
27、好对齐的时间点，然后单击对齐，如图9-6所示。图9-69.2.3谱图的相加减N2000型色谱工作站还提供了多个谱图相加减的功能，在打开了如图9-7所示两个谱图后，您 只要用鼠标单击谱图相加按钮或在菜单中选中该功能，就可得到如图9-8所示相加的谱图结 果，还可以根据需要对运算结果加以保存。谱图相减的操作和谱图相加一样，下图是上述多个 谱图相减后的结果。计算公式峰面或峰喜）_内标物面程乓曜高，区法n的裨株燃童税【或绪叨?营/重策肩标牝*_B城n的内格物匣策或藉普在巳却峰面程料*高后，恭统检醇七神定质分凿杰点：定量计算叠式I二点校正注、在*点中，冉白动采用用齿哲地的方或取蓿U）归洼1004/UJ校正
28、归一法（%）- 捋1坦L（Ki.1j +i）口）蕾比例因孑的校正归一犊X）内标法就井际法冬景# （如同 *“ 100*量暨坦100%）指厩法t F PD分折】才蕾=呷齿福r用 04 FFbE #内标法音景.些!山*隔 眇上 g猝号渔珥:Fn程鱼笠上三亍1/6*3校正因子的甘鼻公式 快正因子的计鼻公应：(1)校正因于归一/长廿 Cs - CsFi 宜血击.Fa F1A2内栋洼G CiF 一一乎而 A1A rl A !拧技法L GgYE r 1 =100(4 血卜Fi = CMh-FE】(4)指蠢法口 tnC-lnCjr h名 In i4i Id A2FzhiC F】、4W ln0OCM%)务方标
29、法手动积分庵加分割筑 脚除分割筑素加峰前向水平基践后向水乎基娥 添加奂峰 曲臃伽峡枳分报告匕限孀图帮助I直动J 0钥.记录Fkm组分表|手动基我 单嶂 重叠峰 施尾峰 稼动起疽祸劫雄束点.实际分析中由于有时的样品十分复杂，实验室所用的色谱分离技术无法达到较理想的分离状 况，虽然N2000色谱数据工作站采用了国际上最先进的算法对色谱信号进行智能鉴别，但作为 一个软件产品，要百分之百准确地差别出峰的起点.终点与峰的类型，仍然具有一定的难度， 于是我们工作站就提供了一个人工对色谱峰的识别进行补充处理的工具，这就是手动积分。手 动积分是对工作站智能自动判别的一种合理补充。手动积分有手动画基线，设置峰类
30、型（单峰/重叠峰/拖尾峰），移动峰起点与结束点，增加 分割线/删除分割线，添加峰，设置水平基线，添加负峰及删除负峰等几种。E*点函函4|座|函甲司也性-I回|回|，习还惟临|+|启IE同根舲医|叩号表|报告坍辎11麝蛙手曲佃片将裹|手动积分的各个功能使用方法如下：您必须先用鼠标按下手动积分按钮，或者选中积分菜单中 的手动积分功能，等到手动积分的各子功能按钮弹出（如图9-9所示），然后您可以按照色谱 工作站在谱图下方给出的提示，用鼠标单击所需功能按钮，使该按钮按下，并在谱图上选择所 需想改变的目标点以及改动以后的点即可。具体各功能的操作如下：图9-99.3.1手动画基线室：用鼠标按下手动画基线按
31、钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所需改变色谱峰基线的起点及终点，工作站即自动在按您所给出的两个点之 间画一条基线，并强制按这条线计算出该色谱峰的面积。9.3.2强制改变峰类型（单峰 /重叠峰1/拖尾峰生：用鼠标按下强制为单峰按钮或在菜 单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所需改变色谱峰类型的起点及终点，工 作站即按您的要求对所选时间段内的色谱峰强制以单峰重新进行积分。如图所示。强制为重叠 峰与强制为拖尾峰的操作与强制为单峰一样。重叠峰处理单峰处理9.3.3移动起点7移动结束点：用鼠标按下移动起点（或结束点）按钮或在菜单上选中该功能，然后依下方的提示用鼠标在色
32、谱图上单击在移动的目标峰，然后用鼠标单击选择新的起点（或结束点）9.3.4增加分割线I/删除分割线一I：用鼠标按下增加分割线按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标在色谱图上单击选择所要添加分割线的位置，工作站即自动在您所选的位置强制添加一条分割线。如果您要 想删除分割线，则在用鼠标按下删除分割线按钮或在菜单上选中该功能后，必须用鼠标在色谱图上单击选 择所要删除分割线的起点与终点位置。一blJ.RIEFIJI*1-au9.3.5添加峰L/删除峰登：用鼠标按下添加峰按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所要添加色谱峰的起点与结束点。9.3.6前向水平基线I 1/后向水平基线1：用
33、鼠标按下前向（或后向水平基线）按钮或在菜 单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所需改变色谱峰水平基线的起点与结束 点，工作站即自动在的选两点处连接成一条水平线。9.3.7添加负峰函/删除负峰：用鼠标按下添加负峰（或删除负峰）按钮或在菜单上选中该功能，然后用鼠标分别在色谱图上单击选择所需添加负峰（或删除负峰）的起点及终点，工作站即自动在按您所给出 的两个点之间添加负峰（或删除负峰），并强制按这条线计算出该色谱峰的面积。9.4手动积分事件表所谓手动积分事件表就是色谱工作站自动将您所做的每一步手动积分操作都记录在一个表格中，这就是手 动积分事件表，如图9-10所示。通过手动积分事件表，您
34、不仅可以清楚地看到每一次手动积分的积分内容， 时间点1和时间2,而且可以先选择其中一个手动积分事件并通过点击删除按钮将该事件删除，或者通过点 击清除按钮将所有的手动积分事件全部清除。岛津LC-10AT型高效液相色谱仪操作规程1. 目的规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。2. 范围适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。3. 职责质检员对本规程的实施负责。4. 规程4.1系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i 手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括 打印机
35、、不间断电源等辅助设备。4.2准备4.2.1准备所需的流动相，用合适的0.45p m滤膜过滤，超声脱气20min。4.2.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。4.2.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45p m滤膜过滤。4.2.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。4.3开机：接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后， 打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。4.4参数设定4.4.1波长设定:在检测器显示初始屏幕时，按func 键，用数字键输入所需波长值，按Enter 键确认。按CE 键退
36、出到初始屏幕。4.4.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需的流速（柱在线时 流速一般不超过1ml/min），按Enter 键确认。按CE键退出。4.4.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按conc键，用数字键输入流动相B的浓度 百分数，按Enter 键确认。按CE键退出。4.4.4梯度设定4.4.4.1在A泵显示初始屏幕时，按edit键，Enter键；4.4.4.2用数字键输入时间，按Enter键，重复按func键选择所需功能（FLOW设定流速， BCNC设定流动相B的浓度），按Enter键，用数字键输入设定值，按Enter键； 4.4.4.3重复上一步设定其
37、它时间步骤；4.4.4.4用数字键输入停止时间，重复按func键直至屏幕显示STOP，按Enter键。按CE 键退出。4.5更换流动相并排气泡4.5.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；4.5.2逆时针转动A/B泵的排液阀180，打开排液阀；4.5.3按A/B泵的purge键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min （可设 定）后自动停止；4.5.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。4.5.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。4.5.6如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min， 按pump键
38、，冲洗3min后再按pump键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。4.6平衡系统4.6.1按N2000色谱数据工作站操作规程打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并 设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的查看基线按钮。4.6.2等度洗脱方式4.6.2.1按A泵的pump键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相 冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。4.6.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。4.6.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前 管路仍有气泡，按4.5.6操作。4.6.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统 已达到平衡状态，可以进样。4.6.3梯度洗脱方式4.6.3.1以检验方法规定的梯度初始条件，按4.6.2项下方法平衡系统。4.6.3.2在进样前运行12次空白梯度。方法：按A泵的run键，prog.run指示灯亮，梯度 程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。4.7进样4.7.1进样前按检测器zero键调零，按软件中零点校正按钮校正基线零点，再按一下 查看基线按钮使其弹起。4.7.2用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
