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1、实验一 细菌检验基本技术(三),目的,掌握观察菌落的方法，了解细菌在液体、半固体培养基的生长表现及意义。掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的制备。掌握细菌和基本形态和特殊结构。,【器材】,显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、酒精灯等,细菌染色标本的制作程序,涂 片,染色方法,革兰染色法（Gram stain）芽胞染色法（spore stain）,革兰染色法（Gram stain）,方法（改良快速法）初染：结晶紫等量NaHCO3 35s，水洗 媒染：碱性碘液 35s，水洗 脱色：丙酮酒精 35s，水洗 复染：碱性稀释复红 35s，水洗,结果 紫色：革兰阳性菌,红色：革兰阴性菌,芽胞染色法（spor
2、e stain）,方法：涂片干燥固定5%孔雀绿加温染 35min 水洗0.5%沙黄1min水洗、晾干、油镜检结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。,影响因素 染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液质量控制革兰阳性菌金黄色葡萄球菌ATCC25923革兰阴性菌大肠埃希菌ATCC25922,三、拉丝试验,原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使菌液呈粘性。方法：,结果：有丝出现（拉丝试验）革兰阴性菌 无丝出现（拉丝试验）革兰阳性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌,【注意事项】,1.每次取菌前后注意将接种环灭菌。2.涂片薄而均匀，干燥时注意勿将标本烤枯，不要忘记标本的固定。3.革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须严格把握脱色时间。4.选用培养1824小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰阳性菌转呈阴性反应。,
