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1、,第七章 苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析,Phenethylamine,药理：,收缩血管、升高血压、散大瞳孔、舒 张支气管、迟缓胃肠肌、加速心率、加强心肌收缩力；临床应用：升压、平喘、充血治疗。,结构(Structure),拟肾上腺素类药物，分子结构中具有苯乙胺基本结构,肾上腺素(adrenaline)盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamol sulfate)盐酸麻黄碱(ephedrine hydrochloride),R1 R2 R3 HX,化学性质(feature),弱 碱 性：烃胺基侧链，仲胺氮弱碱性，游离碱难溶于水，易溶于有机溶
2、剂；其盐可溶于水酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。光学活性：手性碳原子，具有旋光性。苯环取代基特性：如盐酸克伦特罗芳伯氨基；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。,鉴别试验(identification),与三氯化铁反应、与甲醛硫酸反应,鉴别试验(identification),氧化反应（酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色）,肾上腺素,碘或过氧化氢,中性或酸性,肾上腺素红,放置,棕红色多聚体,盐酸异丙肾上腺素,偏酸性条件,碘,异丙肾上腺素红,硫代硫酸钠,重酒石酸去甲肾上腺素,酒石酸氢钾饱和液,pH
3、3.56,碘试液,放置5min,硫代硫酸钠,溶液为无色或仅显微红色或淡紫色,肾上腺素或盐酸异丙肾上腺素,明显的红棕色或紫色,淡红色溶液,鉴别试验(identification),双缩脲反应盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。例：Chp2000，鉴别盐酸麻黄碱方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸铜试液2滴与20%氢氧化钠液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。,鉴别试验(identification),与亚硝基铁氰化钠反应(Rimini试验),重酒石酸间羟胺,水,溶解,亚硝基铁氰化钠试液,丙酮数滴，碳酸氢钠少量,红紫色,脂肪伯
4、氨基的专属反应丙酮不含有甲醛,重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基,鉴别试验(identification),紫外特征吸收,红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱进行鉴别。,特殊杂质检查(Detection of specific impurities),酮体检查生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。,紫外分光光度法检查酮体的条件及要求,特殊杂质检查(Detection of specific impurities),TLC法检查有关物质例：盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇,检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀
5、释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇氯仿浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,特殊杂质检查(Detection of specific impurities),盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查（Chp2000版）有关双胍 取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录 A）试验，精密吸取上述溶液0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条(7.5cm 50cm)上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样
6、点直径均为0.5 1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯乙醇水(6:3:1)为展开剂，展开至前沿距下端约7cm 处，取出，晾干，用显色剂（取10铁氰化钾溶液1ml，加10 亚硝基铁氰化钠溶液与10氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15min，加水10ml与丙酮 12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精 密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录 A），在232nm 的波长处测定吸收度，不得过0.48。,含量测定(Assay),原 料：非水溶液滴
7、定法、溴量法制 剂：,比色法,提取容量法,紫外分光光度法,高效液相色谱法,含量测定(Assay),1、非水溶液滴定法弱碱性冰醋酸为溶剂醋酸汞消除氢卤酸的干扰结晶紫为指示剂（盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇，也可电位法指示终点）若碱性较弱则加醋酐使突跃明显,例：重酒石酸去甲肾上腺素直接滴定 盐酸克伦特罗加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点 硫酸沙丁胺醇加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂,四种非水溶剂：,1.酸性溶剂：有机弱碱在酸性溶剂中可显著增强其相对碱度，比如冰醋酸。2.碱性溶剂：比如DMF。3.两性溶剂：比如甲醇。4.惰性溶剂：比如甲苯、三氯甲烷等。,1.酸性溶剂：常用冰HAc
8、除水（加入计算量的醋酐）,基准物：邻苯二甲酸氢钾（既可标定酸又可标定碱）,指示剂：结晶紫,2.标准溶液：HClO4的冰HAc溶液,基本原理,置换反应：强酸置换弱酸的过程，故而所用的酸多为高氯酸。,一般方法,精密称取供试样品加冰醋酸溶解，加各规定试液，指示液1-2滴，用高氯酸滴定液滴定。终点以电位滴定时的突跃点为准。,注意事项,1.加入醋酐防止氨基被乙酐化，氨基乙酐化后碱性显著减弱；2.低温可以防止氨基乙酐化；3.仲氨基的乙酰化物，以指示剂法和电位滴定法都不能被滴定；4.伯氨基的乙酰化物以电位滴定法尚可以；,适用范围：,1.适用于pka8的有机弱碱性药物及其盐类的含量测定，但不同的碱性有不同的溶
9、剂、滴定剂和指示方法；2.Pka=8-10,以冰醋酸为溶剂；10-12，醋酸加醋酐为溶剂；12以醋酐为溶剂；此外还可以加入乙酸，以利于碱性药物的碱性增强，使突跃显著增大。,各种影响：,1.醋酸汞可以消除盐酸对滴定的影响；2.醋酸具有挥发，温度和贮存条件影响滴定剂浓度；3.以电位滴定法来确定指示剂的终点颜色变化；,注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。,（3）加入醋酐可过量，但测 或 时不能过量。（4）防冻 16以下 冰+醋酐混合溶剂 或加入丙酸,3.温度校正：冰HAC体积膨胀系数大，温度，C，不标定，测定时结果偏高，可以用公式校正。4.指示剂（或用电位法）：
10、结晶紫 紫色蓝蓝绿黄应用电位法确定时 空白校正,（1）市售HClO4含水约为30.0，加入醋酐除去。（2）配制时（HClO4与醋酐反应剧烈）配0.1M HClO4 1000ml，需HClO4（70%）M=100.5 d=1.75,HClO4多少mL?V=8.2mL 用8.5mL,3.应用,1）胺类、氨基酸、含氮杂环 2）有机酸的碱金属盐 3）有机碱的氢卤酸盐 4）有机碱的有机酸盐,含量测定(Assay),2、溴量法基本原理：,测定方法：取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴 滴定液(0.1mol/L)50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微
11、开瓶 塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至 近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于3.395mg 的C9H13NO2HCl。,含量测定(Assay),3、比色法测定原理：,注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。,比色法含量测定,例：盐酸克伦特罗栓（Chp2005）【含量测定】对照品溶液的制备 精密称取盐酸克仑特罗对照品适量，加盐酸溶液(9100)制成每1ml 中含7.2g的溶液。供
12、试品溶液的制备 取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于 盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的氯仿20ml使溶解，用盐酸溶液(9 100)振摇提取3 次(20ml、15ml、10ml)，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸溶液(9 100)稀释至刻度，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。测定法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加盐酸溶 液(9100)5ml 与0.1 亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置3 分钟，各加0.5 氨基磺酸 铵溶液1ml，混匀，时时振摇10分钟，再各加0.1 盐酸萘乙二胺溶液1ml,混匀，放置 10分钟，用盐酸溶液(
13、9100)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录 B），在 500 nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。,含量测定(Assay),4、提取酸碱滴定法原理：溶解性盐酸盐或硫酸盐可溶于水，游离碱不溶于水，溶于有机溶剂。方法：供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。例：硫酸苯丙胺加水溶解加氢氧化钠试液8ml 加氯化钠使饱和乙醚多次提取合并乙醚液精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振摇低温蒸去乙醚放冷至室温加甲基红指示液2
14、滴用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于18.42mg的C18H26N2H2SO4。,含量测定(Assay),5、荧光分光光度法 基本原理：肾上腺素含有的邻苯二酚结构，被弱氧化剂氧化，生成肾上腺素红，发生转位为N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚（THI）。(Tri-Hydroxyl-Indole-),本法还可用于测定微量儿茶酚胺类药物。,含量测定(Assay),6、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液
15、甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.00.1，流速：1.0ml/min检测波长：280nm测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（125）稀释至刻度，摇匀，取2l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石 酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（125）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。,含量测定(Assay),6、高效液相色谱法例1：HPLC-EChD法测定血浆中儿茶酚胺类药物色谱条件：色谱柱：ODS型键合相 流动相：离子对试剂 检测器：电化学检测器供试品溶液的制备：氧化铝吸附洗脱,含量测定(
16、Assay),7、衍生化气相色谱法例：盐酸芬氟拉明(fenfluramine hydrochloride),由于结构中的仲胺基极性极强，使得气相色谱法测定值波动较大，因此将样品溶解后经碱化乙酸乙酯提取，加入内标，提取液用三氟乙酸酐进行酰化衍生化，将衍生化产物在5%SE-30的色谱柱上分析，用FID检测器检测。,第三节 芳氧丙醇胺类药物,典型药物：氧烯洛尔(Oxprenolol,别名烯丙氧心胺，心得平，Tracosal,Trasacor,Trasieor)肾上腺素受体阻滞药 盐酸卡替洛尔(Carteolol hydrochloride)受体阻滞药,鉴别反应(identification),化学鉴
17、别氧烯洛尔：取本品0.1g，加乙醇2ml溶解后，滴加0.1mol/L高锰酸钾溶液1ml，振 摇数分钟，高锰酸钾颜色消褪，并产生棕色沉淀。盐酸卡替洛尔：取本品约0.1g，加水5ml使溶解，加硫氰酸铬铵试液5滴，即生成淡红色沉淀。,紫外吸收峰特征 氧烯洛尔水溶液(40g/ml):在275nm 的波长处有最大吸收。盐酸卡替洛尔(8g/ml):在215nm 与252nm的波长处有最大吸收。,盐酸卡替洛尔的有关物质检查,TLC法，自身对照法检查方法：取本品0.20g，加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇
18、稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，吸取上述两种溶液备10l，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨溶液(50:20:1)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的 主斑点比较，不得更深。,含量测定,盐酸卡替洛尔原料取本品约0.5g，精密称定，加冰醋酸30ml，在水浴上加热溶解，放冷，加醋酐70ml，照电位 滴定法(附录 A)，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定 液(0.1mol/L)相当于32.88mg的C16H24N2O3HCl。,含量测定,盐酸
19、卡替洛尔滴眼液 精密量取本品适量，用水定量稀释制成每1ml中约含盐酸卡替洛尔16g的溶液，照分光光度法(附录 A)，在252nm的波长处测定吸收度；另取盐酸卡替洛尔对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含盐酸卡替洛尔16g的溶液，同法测定，计算，即得。,含量测定,人血浆中氧烯洛尔及其异构体的分析色谱条件：预柱：ODS填料，分析柱：手性OD-R柱（手性选择剂为3,5-二甲苯氨基甲酸酯纤维素）流动相：NaClO4(0.45mol/L)-乙腈(70:30)的磷酸盐缓冲溶液(pH6.0)检测波长：273nm血浆处理方法：醋酸纤维膜透析用预柱纯化、富集手性柱分离分析。,Thank You!,
